Manual method for producing liquid-based cell preparations - BD

MANUAL METHOD 

A cell preparation process for gynecologic applications 

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INTENDED USE 

For In Vitro Diagnostic Use 

The Manual Method is a method for producing liquid-based cell 

preparations (LBPs). The Manual Method is intended as a 

replacement for the conventional Pap smear preparation method 

for use in cervical cancer screening. 

SUREPATH ® Preservative Fluid is an appropriate collection and 

transportation medium for gynecologic specimens tested with 

BD ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q x and Neisseria 

gonorrhoeae (GC) Q x Amplified DNA Assays. Refer to the assay 

package inserts for instructions on using SUREPATH ® Preservative 

Fluid to prepare specimens for use with these assays. 

SUMMARY AND EXPLANATION 

Cervical cytology screening by the Papanicolaou (Pap) method 

involves the microscopic examination of cell samples that have 

been taken primarily from the ecto- and endocervix, smeared on 

glass slides and stained using the Pap procedure. 1,2,3 Cervical 

cytology screening with the Pap smear has decreased the mortality 

rates of invasive cervical carcinoma by 50 to 70 percent. 4 Because 

cervical cytology is a screening test, abnormal findings must be 

confirmed histologically. 

Specimen collection and preparation are extremely important to 

accuracy in Pap smears. Randomization or uniform sub-sampling 

is essential for complete accuracy. The conventional Pap smear 

technique does not provide for mixing of the sample prior to slide 

preparation. Due to the entanglement of cells in mucus on the 

sampling device, the cells actually transferred to the slide may not 

be representative of the total population collected. The cells are 

transferred to the slide in relation to where they happen to be on 

the sampling device. Many cells are left on the device. 5 

The non-homogeneity of a typical cervical sample can make 

conventional smears difficult to prepare, screen and interpret. 

Large areas of the conventional slide are often covered with 

debris, inflammatory cells and sheets of epithelial cells that can 

obscure valuable diagnostic material. In addition, if the smear is 

not fixed immediately after preparation, cellular morphology can 

be distorted as the smear dries (air-drying artifact). 

The Manual Method is a method for converting a liquid 

suspension of a cervical sample into a consistently stained, 

homogeneous SUREPATH ® slide while maintaining diagnostic cell 

clusters. 6,7,8,9 The process includes cell preservation, 

randomization, enrichment of diagnostic material, pipetting, and 

sedimentation to create a cellular preparation. The result of the 

preparation process is a SUREPATH ® slide for use in routine 

cytology screening and categorization as defined by the Bethesda 

System. 10 

PRINCIPLES OF THE PROCEDURE 

The Manual Method is a procedure for the preparation of LBPs of 

cervical cells. Gynecologic specimens are collected by qualified 

medical personnel using broom-like devices (e.g. Cervex-Brush ® ) 

or combination plastic spatula and endocervical brush devices 

(e.g.Cytobrush ® Plus GT and Pap-Perfect ® spatula, MedScand 

(USA), Inc.) with detachable heads. The head of the brush is 

removed from the handle and placed into a vial of SUREPATH ® 

Preservative Fluid. The vial is capped, labeled and sent with 

appropriate paperwork to the laboratory for processing. 

In the laboratory, the preserved sample is mixed by vortexing, and 

transferred into a tube containing PREPSTAIN ® Density Reagent. 

An enrichment step, consisting of centrifugal sedimentation 

through PREPSTAIN ® Density Reagent, partially removes nondiagnostic 

debris and excess inflammatory cells from the sample. 

After centrifugation, the tube containing the enriched cellular 

component is reconstituted with D.I. water and the cellular 

material is re-suspended with a pipettor, using an aspirate / 

dispense sequence. The sample material is then transferred to a 

PREPSTAIN ® Settling Chamber mounted on a SUREPATH ® PreCoat 

slide. Gravity sedimentation occurs during a short incubation. 

Excess material is decanted. The SUREPATH ® PreCoat slide is 

stained, cleared and coverslipped, with the cells presented in a 

circle, 13 mm in diameter. The SUREPATH ® Slide is examined by 

trained cytotechnologists and pathologists in conjunction with 

other relevant patient information. 

LIMITATIONS 

• Gynecologic specimens for preparation using the Manual 

Method should be collected using a broom-type device 

according to the standard collection procedure provided by 

the manufacturer. 

• The production and evaluation of TRIPATH Imaging ® , Inc 

liquid-based preparations should be performed only by 

personnel who have been trained by TRIPATH or others 

authorized by TRIPATH to provide such training. 

• Proper performance of the device requires the use of only 

those supplies supported by TRIPATH Imaging ® , Inc, or 

recommended by TRIPATH Imaging ® , Inc. Used supplies 

should be disposed of properly in accordance with 

institutional and governmental regulations. 

• All supplies are for single use only and cannot be reused. 

• A volume of 8.0 ± 0.5 mL of the sample collected in the 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial is required 

for the SUREPATH ® LBC Test process. 

WARNINGS 

• SUREPATH ® Preservative Fluid contains a dilute solution of 

denatured ethanol and is not intended for human 

consumption. The mixture contains small amounts of methanol 

and isopropanol which can be harmful and cause blindness if 

ingested. 

• PREPSTAIN ® Density Reagent contains sodium azide. 

Sodium azide may react with lead or copper plumbing to 

form highly explosive metal azides. On disposal, flush with 

a large volume of water to prevent buildup of azide. For 

further information, refer to the Manual Guide issued by the 

Centers for Disease Control 11 . 

PRECAUTIONS 

• It is expected that good laboratory practices will be followed 

and that all procedures for use of the Manual Method will be 

strictly observed. 

• All reagents are stable until stated expiration dates, provided 

recommended storage conditions are followed and 

maintained. 

• Microbial contamination of reagents may give incorrect 

results. 

• Substitution of other than SUREPATH ® PreCoat slides may 

result in less than optimal results. 

• Avoid splashing or generating aerosols. Use appropriate 

hand, eye and clothing protection. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid is bactericidal and has been 

tested against: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, 

Staphylococcus aureus, Candida albicans, Mycobacterium 

tubculosis, and Aspergillus niger. However, universal 

precautions for safe handling of biological fluids should be 

practiced at all times. 

OPTIONAL ALIQUOT REMOVAL 

Sufficient volume is available in the SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial to allow removal of up to 0.5 mL of 

homogeneous mixture of cells and fluid for ancillary testing, prior 

to the SUREPATH ® Pap Test while still allowing sufficient volume 

for Pap testing. 

While there is no evidence that removal of an aliquot from the 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial affects the quality 

of the specimen for cytology testing, rare instances of 

misallocation of pertinent diagnostic material may occur during 

this process. Healthcare providers may need to acquire a new 

specimen if the results do not correlate with the clinical history of 

the patient. Furthermore, cytology addresses different clinical 

questions than sexually transmitted disease (STD) testing; 

therefore, aliquot removal may not be suitable for all clinical 

situations. If necessary, a separate specimen may be collected for 

STD testing rather than taking an aliquot from the SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial. 

Aliquot removal from low-cellularity specimens may leave 

insufficient material in the SUREPATH ® Preservative Fluid 

Collection Vial for preparation of a satisfactory SUREPATH ® Pap 

test. 

Aliquot must be removed prior to processing the SUREPATH ® Pap 

Test. Only one aliquot may be removed from the SUREPATH ® 

Perservative Fluid Collection Vial prior to performing the PapTest, 

regardless of the volume of the aliquot. 

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Procedure 

1. In order to ensure a homogenous mixture, the SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial must be vortexed for 10- 

20 seconds and the 0.5 mL aliquot must be removed within 

one minute of vortexing. 

2. A polypropylene aerosol barrier pipette tip that is sized 

appropriately for the volume being withdrawn must be used 

for aliquot removal. Note: Serological pipettes should not be 

used. Good laboratory practices must be followed to avoid 

introducing contaminants into the SUREPATH ® Preservative 

Fluid collection vial or the aliquot. Aliquot removal should 

be performed in an appropriate location outside an area 

where amplification is performed. 

3. Visually check the aliquot material in the pipette for 

evidence of large gross particulates or semi-solids. Evidence 

of such material encountered while withdrawing the aliquot 

material should prompt return of all the material to the 

specimen vial and disqualify the specimen for ancillary 

testing prior to performing the Pap test. 

4. For instructions on processing the aliquot using the 

BD ProbeTec CT Q x and GC Q x Amplified DNA Assays, 

refer to the assay Package Inserts provided by the 

manufacturer. 

MATERIALS REQUIRED 

Materials Provided 

• SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial 

• PREPSTAIN ® Density Reagent 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers 

• SUREPATH ® PreCoat slides 

• Centrifuge Tubes 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes 

• Aspirator Tips 

Materials Required But Not Provided 

• Centrifuge 

• Slide Racks 

• Easy Aspirator (optional) 

• Processing Tray (optional) 

• Broom type sampling device or endocervical brush/plastic 

spatula with detachable head(s) 

• Vortex Mixer 

• Precision Pipettes with Disposable Tips 

• Deionized Water (pH 7.5 to 8.5) 

• Isopropanol and Reagent Grade Alcohol 

• Staining Reagents 

• Clearing Agent, Mounting Media, Coverslips 

STORAGE 

• SUREPATH ® Preservative Fluid without cytologic samples 

may be stored at room temperature (15° to 30° C) for up to 

36 months from date of manufacture. 

• The storage limit for SUREPATH ® Preservative Fluid with 

cytologic samples is 6 months at refrigerated temperatures 

(2° to 10° C) or 4 weeks at room temperature (15° to 30° C). 

• SUREPATH ® Preservative Fluid containing cytologic sample 

intended for use with the BD ProbeTec CT Q x and GC Q x 

Amplified DNA Assays can be stored and transported for up 

to 30 days at 2° – 30° C prior to transfer to the Liquid-Based 

Cytology Specimen (LBC) Dilution Tubes for the 

BD ProbeTec Q x Amplified DNA Assays. 

PROCEDURES 

1. After the sample is collected using a Rovers Cervex-Brush ® 

or equivalent sampling device, the brush head is rinsed 

directly into the fluid, removed from the handle and dropped 

into a SUREPATH ® Preservative Fluid vial. The vial is then 

tightly capped, labeled, and sent to the laboratory. 

2. When sample vials have been accessioned into the lab, place 

each vial into the processing tray with a labeled centrifuge 

tube pre-filled with 4 ml of PREPSTAIN ® Density Reagent 

and a labeled SUREPATH ® PreCoat slide. PREPSTAIN ® 

Density Reagent must be added to the tube before the 

sample is added or performance will be reduced. 

3. Vigorously vortex each sample vial for 10 – 20 seconds. 

(Sufficient volume is available in the SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial to allow removal of up to 0.5 mL of 

homogenous mixture of cells and fluid for ancillary testing, 

while still allowing sufficient volume for Pap testing. The 

aliquoting may be performed after this vortexing step in the 

SUREPATH ® LBC Test process.) 

• Use the PREPMATE Automated Accessory and 

PREPSTAIN ® Syringing Pipettes to transfer the sample. 

See the PREPMATE Operators Manual for 

instructions. Or 

• Remove vial cap. Hold a SUREPATH ® Preservative 

Vial in one hand, gently push a PREPSTAIN ® Syringing 

Pipettes into the vial until it stops, pointing the end of 

the PREPSTAIN ® Syringing Pipettes away from your 

face. Invert the vial / PREPSTAIN ® Syringing Pipettes 

assembly into the appropriately numbered PREPSTAIN ® 

Density Reagent tube. Allow all of the sample solution 

to completely drain from the PREPSTAIN ® Syringing 

Pipettes before proceeding. Or 

• Remove vial cap. Slowly pour approximately 8 ml of 

specimen onto PREPSTAIN ® Density Reagent. 

4. Place the tubes into the centrifuge racks according to the 

placement sequence diagram in the Procedure Manual (each 

tube rack has a capacity of 12 tubes). Placement sequence is 

critical and must be balanced. 

5. Balance the centrifuge tubes by adding Preservative Fluid if 

necessary, and centrifuge specimens for 2 minutes at 200 x 

g. 

6. If the Easy Aspirator is used, turn on the Easy Aspirator 

system and adjust pressure to 9 ± 2 in Hg. Place clean tips 

onto the Easy Aspirator aspirator. 

7. Remove centrifuge tube racks from the centrifuge. Slowly 

lower the Easy Aspirator tips (or disposable transfer pipettes) 

into the centrifuge tubes to aspirate supernatant. The 

aspirate device should touch the top of the tubes at 

completion. Rinse Aspirator Tips between samples with 

water. 

8. Centrifuge the tubes for 10 minutes at 800 x g to concentrate 

the diagnostic component into a cell pellet at the bottom of 

the tube. 

9. Remove the tube rack from the centrifuge. Gently and 

quickly decant into the sink. Keeping rack inverted, blot the 

tubes carefully on absorbent paper making sure that the cell 

pellet stays in the tube. 

10. Label a SUREPATH ® PreCoat slide with each specimen 

number, being careful not to touch the surface of the 

SUREPATH ® PreCoat slide. Place slides into Slide Rack and 

lock a PREPSTAIN ® Settling Chamber onto each slide. The 

position of each numbered SUREPATH ® PreCoat slide on the 

platter must match to the position of the corresponding 

centrifuge tube. 

11. Add 4 ml of Deionized Water (pH 7.5-8.0) to each specimen 

tube and mix well by vortexing. 

12. Working with one sample tube at a time, vortex tube and 

immediately transfer 800 µl of cell suspension into the 

correspondingly numbered PREPSTAIN ® Settling Chamber/ 

SUREPATH ® PreCoat slide. Repeat for each sample. 

13. Allow 10 minutes for full sedimentation to occur. After the 

sedimentation, gently invert the slide platter(s) over the sink 

to decant the remaining fluid and blot the excess liquid on 

absorbent paper. 

14. Rinse each PREPSTAIN ® Settling Chamber with 500 µl of 

denatured ethanol and decant. Repeat alcohol rinse and 

decant the remaining fluid and blot the excess liquid on 

absorbent paper, allowing them to remain inverted for at 

least 1 minute. 

15. Remove the PREPSTAIN ® Settling Chamber. 

16. Stain and coverslip SUREPATH ® Slides. 

RESULTS AND INTERPRETATION 

• All diagnostic criteria currently utilized in cytology 

laboratories for conventional Pap smears are applicable to 

TRIPATH Imaging ® , Inc. liquid-based preparations. 

• Any abnormal or questionable screening observations should 

be referred to a pathologist for review and diagnosis. Any 

cellular morphologic changes are significant and should be 

noted. 


BIBLIOGRAPHY 

1. Papanicolaou GN: A New Procedure for Staining Vaginal 

Smears. Science 1942; 95: 438-439. 

2. King A, Clay K, Felmar EG, Heustis DG, Karns RM, Krahl 

P, Tench WD: The Papanicolaou Smear. West J Med 1992; 

156: 202-204. 

3. Mandelblatt J, Gopaul I, Wistreich M: Gynecological Care 

of Elderly Women: Another Look at Papanicolaou Smear 

Testing. J Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 

4. Koss LG: The Papanicolaou Test for Cervical Cancer 

Detection: A Triumph and a Tragedy. J Am Med Assoc 

1989; 261: 737-743. 

5. Hutchinson ML, Isenstein LM, Goodman A, Hurley AA, 

Douglass KL, Mui KK, Patten FW, Zahniser DJ: 

Homogeneous Sampling Accounts for the Increased 

Diagnostic Accuracy Using the ThinPrep® Processor. Am J 

Clin Pathol 1994; 101: 215-219. 

6. McGoogan E, Reith A: Would Monolayers Provide More 

Representative Samples and Improved Preparations for 

Cervical Screening? Overview and Evaluation of Systems 

Available. Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 

7. Bishop JW: Comparison of the CytoRich System with 

Conventional Cervical Cytology: Preliminary Data on 2,032 

Cases from a Clinical Trial Site. Acta Cytol 1997; 41: 15- 

23. 

8. Geyer JW, Hancock F, Carrico C, Kirkpatrick M: 

Preliminary Evaluation of CytoRich: An Improved 

Automated Cytology Preparation. Diagn Cytopathol 1993; 

9: 417-422. 

9. Grohs HK, Zahniser DJ, Geyer JW: Standardization of 

Specimen Preparation Through Mono/Thin-Layer 

Technology in Automated Cervical Cancer Screening. 

Edited by HK Grohs, OAN Husain. New York, Igaku-shoin, 

1994, pp 176-185. 

10. Kurman RJ, Solomon D: The Bethesda System for 

Reporting Cervical/Vaginal Cytologic Diagnoses. Springer- 

Verlag, 1994. 

11. Manual Guide--Safety Management No. CDC-22, 

Decontamination of Laboratory Sink Drains to Remove 

Azide Salts, Center for Disease Control, Atlanta, Georgia, 

April 30, 1976. 

Technical Support 

USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

Telephone: +32 (0)53 720 673 

Fax: +32 (0)53 720 678 

TriPath Imaging, Inc. 

780 Plantation Drive 

Burlington, NC 27215 USA 

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Rineanna House 

Shannon Free Zone 

Shannon, County Clare 

Ireland 

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Becton Dickinson Pty Ltd. 

4 Research Park Drive, 

Macquarie University Research Park, 

North Ryde, 

NSW 2113 Australia 

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ALL RIGHTS RESERVED. 

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Becton, Dickerson and Company. © 2011 BD 


MANUELLE METHODE 

Ein Verfahren zum Präparieren von Zellen für gynäkologische 

Anwendungen 

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VERWENDUNGSZWECK 

Zur In-vitro-Diagnostik 

Die manuelle Methode ist eine Methode zur Herstellung von 

Zellpräparationen auf Flüssigkeitsbasis (LBPs). Die manuelle 

Methode wird als Ersatz für die herkömmliche Pap-Abstrich- 

Präparationsmethode beim Screening von Zervikalkarzinomen 

eingesetzt. 

SUREPATH ® Preservative Fluid (Konservierungslösung) ist ein 

geeignetes Entnahme- und Transportmedium für gynäkologische 

Proben, die mit den amplifizierten BD ProbeTec DNA-Assays für 

Chlamydia trachomatis (CT) Q x und Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x 

getestet wurden. Anweisungen zur Verwendung von SUREPATH ® 

Preservative Fluid (Konservierungslösung), um die Proben für die 

Tests mit den Assays zu präparieren, sind in der Packungsbeilage der 

Assays enthalten. 

ZUSAMMENFASSUNG UND ERKLÄRUNG 

Das Zytologie-Screening der Zervix mit der Papanicolaou (Pap)- 

Methode umfasst die mikroskopische Untersuchung von Zellproben, 

die zuvor der Ekto- und Endozervix entnommen, auf einen 

Objektträger aus Glas ausgestrichen und anhand des Pap-Verfahrens 

gefärbt wurden. 1,2,3. Das Zytologie-Screening der Zervix mit dem Pap- 

Abstrich hat die Mortalitätsrate von invasiven Zervikalkarzinomen 

um 50 bis 70 Prozent gesenkt. 4 Da es sich bei der Zervix-Zytologie 

um einen Screening-Test handelt, müssen abnormale Befunde 

histologisch abgeklärt werden. 

Beim Pap-Abstrich ist die Genauigkeit bei der Probenentnahme und - 

präparation von äußerster Wichtigkeit. Randomisierung bzw. 

einheitliche Probenteilung sind für eine vollständige Genauigkeit 

unerlässlich. Die herkömmliche Pap-Abstrich-Methode ermöglicht 

kein Durchmischen der Probe vor der Präparation des Objektträgers. Da 

die Zellen auf dem Probenentnahmegerät mit Schleim vermischt sind, 

sind die auf den Objektträger übertragenen Zellen möglicherweise 

nicht repräsentativ für die insgesamt entnommene Population. Die 

Zellen werden in Bezug auf ihre Position auf dem 

Probenentnahmegerät auf den Objektträger ausgestrichen. Viele 

Zellen werden dabei auf dem Gerät zurückgelassen. 5 

Die fehlende Homogenität einer typischen Zervikalprobe kann die 

Präparation, das Screening und die Interpretation eines herkömmlichen 

Abstrichs erschweren. Große Bereiche des konventionell präparierten 

Objektträgers sind oft mit Geweberesten, entzündlichen Zellen und 

Schichten von Epithelzellen bedeckt, die das zur Diagnose 

notwendige Material verdecken können. Wird der Abstrich nach der 

Präparation nicht sofort fixiert, kann außerdem die Zellmorphologie 

gestört werden, da der Abstrich austrocknet 

(Lufttrocknungsartefakte). 

Die manuelle Methode ist eine Methode zur Umwandlung einer 

flüssigen Suspension einer Zervikalprobe in einen regelmäßig 

gefärbten, homogenen SUREPATH ® -Objektträger, während 

diagnostische Zellgruppen erhalten bleiben. 6,7,8,9 Zu diesem Verfahren 

gehören Zellkonservierung, Randomisierung, Anreicherung des 

Diagnosematerials, Pipettieren und Sedimentieren, um ein 

Zellpräparat zu erhalten. Das Ergebnis des Präparationsverfahrens ist 

ein SUREPATH ® -Objektträger) für routinemäßiges Zytologie- 

Screening und Zytologiekategorisierung, wie sie durch das Bethesda 

System 10 definiert werden. 

VERFAHRENSGRUNDLAGEN 

Die manuelle Methode ist ein Verfahren für die Präparation von 

LBPs von Zervikalzellen. Gynäkologische Proben werden von 

qualifiziertem medizinischem Personal mit einer Abstrichbürste 

(z. B. Cervex Brush ® ) oder einer Kombination aus endozervikaler 

Abstrichbürste/Kunststoffspatel (z. B Cytobrush ® Plus GT und Pap 

Perfect ® Spatula, MedScand (USA) Inc.) mit abnehmbaren Köpfen 

entnommen. Der Bürstenkopf wird vom Griff getrennt und in eine 

kleine Flasche mit SUREPATH ® Preservative Fluid (Konservierungslösung) 

gelegt. Das Gefäß wird verschlossen, etikettiert und mit den 

entsprechenden Unterlagen zur Bearbeitung an das Labor versandt. 

Im Labor wird die konservierte Probe durch Vortexieren vermischt 

und in ein Röhrchen mit PREPSTAIN ® Density Reagent 

(Dichtereagenz) transferiert. Ein Anreicherungsschritt bestehend aus 

Zentrifugalsedimentierung mit dem PREPSTAIN ® Density Reagent 

(Dichtereagenz) entfernt nicht-diagnostische Gewebereste und 

überschüssige Entzündungszellen teilweise von der Probe. Nach der 

Zentrifugation wird das Röhrchen mit den angereicherten 

Zellbestandteilen mit entionisiertem Wasser rekonstituiert, und das 

Zellmaterial wird mit einem Pipettierer durch abwechselndes 

Aspirieren und Dispensieren resuspendiert. Anschließend wird das 

Probenmaterial in ein PREPSTAIN ® Settling Chamber (Absetzkammer) 

übertragen, die auf einem SUREPATH ® PreCoat (beschichteten) 

Objektträger angebracht ist. Während einer kurzen Inkubationszeit 

kommt es zur Schwerkraftsedimentierung. Das überschüssige 

Material wird abgegossen. Der SUREPATH ® PreCoat (beschichtete) 

Objektträger, auf dem die Zellen in einem Kreis von 13 mm 

Durchmesser angeordnet sind, wird gefärbt, gereinigt und mit einem 

Deckglas versehen. Der SUREPATH ® -Objektträger) wird von 

ausgebildeten Zytotechnikern und Pathologen, die Zugang zu anderen 

wichtigen Informationen der Patientin haben, untersucht. 

EINSCHRÄNKUNGEN 

• Die für die Präparation mit der manuellen Methode 

vorgesehenen gynäkologischen Proben sollten mit einer 

Abstrichbürste entnommen werden. Dabei ist das vom 

Hersteller vorgeschriebene Verfahren zur 

Standardprobenentnahme zu befolgen. 

• Die Herstellung und Auswertung der TRIPATH Imaging, Inc 

Präparate auf Flüssigkeitsbasis dürfen nur durch von TRIPATH 

autorisiertem oder ausgebildetem Personal ausgeführt werden. 

• Zur korrekten Funktion des Geräts darf nur von 

TRIPATH Imaging ® , Inc unterstütztes oder von 

TRIPATH Imaging ® , Inc. empfohlenes Verbrauchsmaterial 

verwendet werden. Gebrauchtes Verbrauchsmaterial muss 

vorschriftsgemäß entsorgt werden. 

• Alle Verbrauchsmaterialien sind für den Einmalgebrauch 

konzipiert und dürfen nicht wiederverwendet werden. 

• Ein Volumen von 8,0 ± 0,5 mL der im SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial (Versandgefäß für Konservierungslösung) 

enthaltenen Probe ist für den SUREPATH ® LBC Test process 

(LBC-Testverfahren) erforderlich. 

WARNHINWEISE 

• Die SUREPATH ® Preservative Fluid (Konservierungslösung) 

enthält eine verdünnte denaturierte Ethanollösung und darf nicht 

konsumiert werden. Die Mischung enthält kleine Mengen von 

Methanol und Isopropanol, die schädlich sein und zu Blindheit 

führen können, wenn sie eingenommen werden. 

• Das PREPSTAIN ® Density Reagent (Dichtereagenz) enthält 

Natriumazid. Natriumazid kann mit Blei- oder Kupferrohren 

reagieren und hochexplosive Metallazide bilden. Beim 

Entsorgen stets mit viel Wasser nachspülen, um eine 

Ansammlung der Azide zu verhindern. Weitere Informationen 

finden Sie in dem von den Centers for Disease Control 11 

herausgegebenen Handbuch. 

SICHERHEITSHINWEISE 

• Es wird erwartet, dass gute Laborpraktiken eingehalten und alle 

Verfahren für die Anwendung der manuellen Methode strikt 

befolgt werden. 

• Alle Reagenzien sind bis zum aufgedruckten Verfallsdatum 

stabil, wenn sie entsprechend den Lagerungsbedingungen 

aufbewahrt werden. 

• Eine Verunreinigung der Reagenzien durch Mikroben kann zu 

inkorrekten Ergebnissen führen. 

• Wenn anstelle von SUREPATH ® PreCoat (beschichtete) 

Objektträger andere Objektträger verwendet werden, werden 

keine optimalen Ergebnisse erzielt. 

• Spritzer und Aerosolbildung sind zu vermeiden. Es ist ein 

entsprechender Hand-, Augen- und Kleiderschutz zu tragen. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (Konservierungslösung) ist 

bakterientötend und wurde gegen die folgenden Erreger 

getestet: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, 

Staphylococcus aureus, Candida albicans, Mycobacterium 

tubculosis und Aspergillus niger. Die allgemeinen 

Sicherheitshinweise für einen sicheren Umgang mit biologischen 

Flüssigkeiten sind dennoch jederzeit einzuhalten. 

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OPTIONALE ALIQUOT-ENTNAHME 

Das Volumen des SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial 

(Versandgefäß für Konservierungslösung) reicht aus, um bis zu 0,5 

mL einer homogenen Zell-/Flüssigkeitsmischung für Zusatztests 

entnehmen zu können, bevor der SUREPATH ® Pap-Test durchgeführt 

wird, sodass für diesen immer noch genügend Volumen zur 

Verfügung steht. 

Obwohl es keine Anzeichen dafür gibt, dass das Entnehmen eines 

Aliquots aus dem SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial 

(Versandgefäß für Konservierungslösung) die Probenqualität für 

Zytologie-Tests beeinträchtigt, kann bei diesem Verfahren in seltenen 

Fällen eine Fehlallokation von relevantem Probenmaterial entstehen. 

Der Mediziner muss möglicherweise eine neue Probe entnehmen, 

wenn die Ergebnisse nicht mit der Krankengeschichte der Patientin 

übereinstimmen. Des Weiteren werden im Rahmen der Zytologie 

Tests hinsichtlich unterschiedlicher klinischer Aspekte durchgeführt, 

nicht nur Tests auf sexuell übertragene Krankheiten (STD), deshalb 

ist die Aliquot-Entnahme nicht unbedingt für alle klinischen 

Situationen geeignet. Bei Bedarf sollte eine separate Probe für STD- 

Tests und kein Aliquot aus dem SUREPATH ® Preservative Fluid 

Collection Vial (Versandgefäß für Konservierungslösung) entnommen 

werden. 

Die Aliquot-Entnahme von Proben mit niedriger Zellularität kann 

dazu führen, dass nur noch unzureichendes Material im SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial (Versandgefäß für 

Konservierungslösung) vorhanden und somit die Präparation eines 

zufriedenstellenden SUREPATH ® Pap-Tests nicht möglich ist. 

Das Aliquot muss vor Durchführung des SUREPATH ® Pap-Tests 

entnommen werden. Vor Durchführung des Pap-Tests darf 

unabhängig vom Volumen des Aliquots nur ein Aliquot aus dem 

SUREPATH ® Perservative Fluid Collection Vial (Versandgefäß für 

Konservierungslösung) entnommen werden. 

Verfahren 

1. Um eine homogene Mischung sicherzustellen, muss das 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (Versandgefäß 

für Konservierungslösung) 10 – 20 Sekunden lang vortexiert, 

und das Aliquot von 0,5 mL muss innerhalb von einer Minute 

nach dem Vortexieren entnommen werden. 

2. Für die Aliquot-Entnahme muss eine Polypropylen- 

Pipettenspitze mit Aerosolbarriere verwendet werden, deren 

Größe dem zu entnehmenden Probenvolumen angepasst ist. 

Hinweis: Serologische Pipetten dürfen nicht verwendet werden. 

Es müssen gute Laborpraktiken eingehalten werden, um zu 

verhindern, dass Verunreinigungen in das SUREPATH ® 

Preservative Fluid collection vial (Versandgefäß für 

Konservierungslösung) oder das Aliquot gelangen. Die Aliquot- 

Entnahme muss an einem angemessenen Ort außerhalb von 

Bereichen, in denen die Amplifikation durchgeführt wird, 

stattfinden. 

3. Das Aliquot in der Pipette muss visuell auf Vorhandensein von 

großen, groben Partikeln oder halbfesten Körpern überprüft 

werden. Bei Vorhandensein solcher Materialien beim 

Entnehmen des Aliquots muss das gesamte Material sofort 

zurück in die Probenflasche gegeben und die Probe vor dem 

Durchführen des Pap-Tests vom Zusatztest ausgeschlossen 

werden. 

4. Anweisungen zum Bearbeiten des Aliquots mithilfe der 

amplifizierten BD ProbeTec CT Q x - und GC Q x -DNA- 

Assays sind in den vom Hersteller bereitgestellten 

Packungsbeilagen der Assays enthalten. 

ERFORDERLICHES MATERIAL 

Mitgeliefertes Arbeitsmaterial 

• SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (Versandgefäß 

für Konservierungslösung) 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (Dichtereagenz) 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers (Absetzkammern) 

• SUREPATH ® PreCoat slides (beschichtete Objektträger) 

• Zentrifugenröhrchen 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (Spritzenpipetten) 

• Saugspitzen 

Benötigtes, jedoch nicht mitgeliefertes Arbeitsmaterial 

• Zentrifuge 

• Objektträgerhalter 

• Easy Aspirator (optional) 

• Bearbeitungsträger (optional) 

• Abstrichbürste oder endozervikale Bürste/Kunststoffspatel mit 

abnehmbarem Kopf/Köpfen 

• Vortex-Mixer 

• Präzisionspipetten mit Einwegspitzen 

• Entionisiertes Wasser (pH 7,5 bis 8,5) 

• Isopropanol und Reagenzalkohol 

• Färbereagenzien 

• Klärmittel, Eindeckmedien, Deckgläser 

LAGERUNG 

• SUREPATH ® Preservative Fluid without cytologic samples 

(Konservierungslösung ohne zytologische Proben) kann bis zu 

36 Monate nach dem Herstellungsdatum bei Zimmertemperatur 

(15 °C bis 30 °C) gelagert werden. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid with cytologic samples 

(Konservierungslösung mit zytologischen Proben) kann 

6 Monate im Kühlschrank bei einer Temperatur zwischen 2 

°C und 10 °C oder 4 Wochen bei Zimmertemperatur (15 °C bis 

30 °C) gelagert werden. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid containing cytologic sample 

(Konservierungslösung mit zytologischen Proben) zur 

Verwendung mit den amplifizierten BD ProbeTec CT Q x - 

und GC Q x -DNA-Assays kann bis zu 30 Tage bei einer 

Temperatur zwischen 2 °C und 30 °C gelagert und transportiert 

werden, bevor sie in die Verdünnungsröhrchen für zytologische 

Proben auf Flüssigkeitsbasis (LBC) für die amplifizierten BD 

ProbeTec CT Q x - und GC Q x -DNA-Assays übertragen wird. 

VERFAHREN 

1. Nachdem die Probe mit einer Rovers Cervex-Brush ® oder 

einem ähnlichen Probenentnahme-Instrument entnommen 

wurde, wird der Bürstenkopf direkt in der Flüssigkeit 

ausgespült, vom Griff getrennt und in ein SUREPATH ® 

Preservative Fluid vial (Versandgefäß für Konservierungslösung) 

gegeben. Das Gefäß wird gut verschlossen, etikettiert und an 

das Labor geschickt. 

2. Sind die Probengefäße im Labor angekommen, wird jedes 

Gefäß mit einem etikettierten Zentrifugenröhrchen, das mit 4 ml 

PREPSTAIN ® Density Reagent (Dichtereagenz) vorgefüllt ist, 

und mit einem etikettierten, SUREPATH ® PreCoat (beschichteten) 

Objektträger in den Bearbeitungsträger gestellt. Bevor die Probe 

ins Röhrchen gegeben wird, muss das PREPSTAIN ® Density 

Reagent (Dichtereagenz) zugegeben werden, da die Leistung 

sonst beeinträchtigt wird. 

3. Jede Probe 10 – 20 Sekunden lang heftig vortexieren. 

(Das Volumen des SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial 

(Versandgefäßes für Konservierungslösung) reicht aus, um bis zu 

0,5 mL einer homogenen Zell-/Flüssigkeitsmischung für 

Zusatztests entnehmen zu können, sodass immer noch genügend 

Volumen zur Verfügung steht, um den Pap-Test durchzuführen. 

Die Aliquot-Entnahme kann im SUREPATH ® LBC Test process 

(LBC-Testverfahren) nach diesem Vortexier-Schritt durchgeführt 

werden.) 

• Die Probe wird mithilfe des PREPMATE 

Automatisierten Zusatzgeräts und der PREPSTAIN ® 

Syringing Pipettes (Spritzenpipetten) übertragen. 

Anweisungen siehe PREPMATE Benutzerhandbuch. Oder 

• Den Deckel des Gefäßes entfernen. Eine Flasche mit 

SUREPATH ® Preservative Vial (Konservierungslösung) in 

einer Hand halten und vorsichtig eine PREPSTAIN ® 

Syringing Pipettes (Spritzenpipette) bis zum Anschlag in 

die Flasche drücken, wobei das Ende der PREPSTAIN ® 

Syringing Pipettes (Spritzenpipette) vom Gesicht weg 

zeigen muss. Die Flasche/PREPSTAIN ® Syringing Pipettes 

(Spritzenpipette) in das entsprechend nummerierte 

Röhrchen mit PREPSTAIN ® Density Reagent 

(Dichtereagenz) invertieren. Bevor fortgefahren wird, muss 

die gesamte Probenflüssigkeit aus der PREPSTAIN ® 

Syringing Pipettes (Spritzenpipette) abgeflossen sein. 

Oder 

• Den Deckel des Gefäßes entfernen. Langsam etwa 8 ml 

der Probe auf das PREPSTAIN ® Density Reagent 

(Dichtereagenz) gießen. 

4. Die Röhrchen wie im Verfahrenshandbuch dargestellt in die 

Zentrifugenhalter stellen (jeder Zentrifugenhalter kann 12 Röhrchen 

aufnehmen). Die Anordnung ist wichtig und muss gleichmäßig 

erfolgen. 

5. Falls nötig, die Zentrifugenröhrchen mit zusätzlicher 

Konservierungslösung ausgleichen und die Proben 2 Minuten 

lang bei 200-facher Schwerkraft zentrifugieren. 

6. Wenn der Easy Aspirator verwendet wird, das Easy Aspirator- 

System einschalten und den Druck auf 

229 ± 51 mm Hg einstellen. Saubere Spitzen auf den Easy 

Aspirator-Sauger aufsetzen. 


7. Die Zentrifugenröhrchenhalter aus der Zentrifuge entnehmen. 

Die Easy Aspirator-Spitzen (oder Einweg-Transferpipetten) 

langsam in die Zentrifugenröhrchen absenken, um den 

Überschuss abzusaugen. Nach Beenden dieses Schritts sollte 

das Absauggerät die Oberkante der Röhrchen berühren. 

Zwischen den Proben die Saugspitzen mit Wasser spülen. 

8. Die Röhrchen 10 Minuten lang bei 800-facher Schwerkraft 

zentrifugieren, damit die diagnostischen Bestandteile am Boden 

des Röhrchens ein Zellpellet bilden. 

9. Den Zentrifugenröhrchenhalter aus der Zentrifuge entnehmen. 

Sorgfältig und rasch in den Ausguss abgießen. Bei umgekehrtem 

Halter die Röhrchen sorgfältig an absorbierendem Papier 

abtupfen, wobei darauf zu achten ist, dass die Zellpellets in den 

Röhrchen verbleiben. 

10. Einen SUREPATH ® PreCoat slide (beschichteten Objektträger) 

mit den einzelnen Probennummern etikettieren, wobei die 

Oberfläche des SUREPATH ® PreCoat slide (beschichteten 

Objektträgers) nicht berührt werden darf. Die Objektträger in 

den Objektträgerhalter stellen und eine PREPSTAIN ® Settling 

Chamber (Absetzkammer) auf jeden Objektträger aufsetzen. 

Die Position eines jeden nummerierten SUREPATH ® PreCoat 

slide (beschichteten Objektträgers) auf der Platte muss der 

Position des entsprechenden Zentrifugenröhrchens entsprechen. 

11. Jeder Probe 4 mL entionisiertes Wasser (pH 7,5 bis 8,5) 

zugeben und durch Vortexieren gut vermischen. 

12. Ein Röhrchen nach dem andern vortexieren und sofort 800 µL 

der Zellsuspension in die entsprechend nummerierte 

PREPSTAIN ® Settling Chamber/ (Absetzkammer) bzw. auf den 

SUREPATH ® PreCoat slide (beschichteten Objektträger) geben. 

Für jede Probe wiederholen. 

13. Zehn Minuten warten, bis es zu einer vollständigen 

Sedimentierung gekommen ist. Nach der Sedimentierung die 

Objektträgerplatte(n) sorgfältig über dem Ausguss umdrehen, 

um die zurückgebliebene Flüssigkeit abzugießen, und die 

überschüssige Flüssigkeit mit absorbierendem Papier 

aufnehmen. 

14. Jede PREPSTAIN ® Settling Chamber (Absetzkammer) mit 500 µl 

denaturiertem Ethanol spülen und abschütten. Das Spülen mit 

Alkohol wiederholen, die zurückgebliebene Flüssigkeit 

abgießen und überschüssige Flüssigkeit mit absorbierendem 

Papier aufnehmen, wobei die Kammern mindestens 1 Minute 

lang umgedreht bleiben müssen. 

15. Die PREPSTAIN ® Settling Chamber (Absetzkammer) entfernen. 

16. Die SUREPATH ® -Objektträger färben und mit einem Deckglas 

versehen. 

ERGEBNISSE UND INTERPRETATION 

• Alle diagnostischen Kriterien, die derzeit in Zytologielabors bei 

herkömmlichen Pap-Abstrichen angewendet werden, können 

auch bei den TRIPATH Imaging ® , Inc. Präparaten auf 

Flüssigkeitsbasis angewendet werden. 

• Jede abnormale oder fragliche Beobachtung bei einem 

Screening sollte zur Überprüfung und Diagnose an einen 

Pathologen weitergeleitet werden. Alle zellmorphologischen 

Veränderungen sind von Bedeutung und sollten beachtet 

werden. 

BIBLIOGRAFIE 



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Tench WD: The Papanicolaou Smear. West J Med 1992; 156: 

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3. Mandelblatt J, Gopaul I, Wistreich M: Gynecological Care of 

Elderly Women: Another Look at Papanicolaou Smear Testing. 

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A Triumph and a Tragedy. J Am Med Assoc 1989; 261: 737- 

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Sampling Accounts for the Increased Diagnostic Accuracy 

Using the ThinPrep ® Processor. Am J Clin Pathol 1994; 101: 

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Representative Samples and Improved Preparations for Cervical 

Screening? Overview and Evaluation of Systems Available. 

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Preparation. Diagn Cytopathol 1993; 9: 417-422. 


Specimen Preparation Through Mono/Thin-Layer Technology 

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OAN Husain. New York, Igaku-shoin, 1994, pp 176-185. 

10. Kurman RJ, Solomon D: The Bethesda System for Reporting 

Cervical/Vaginal Cytologic Diagnoses. Springer-Verlag, 1994. 


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Salts, Center for Disease Control, Atlanta, Georgia, April 30, 

1976. 


USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

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MÉTHODE MANUELLE 

Processus de préparation cellulaire pour les applications 

gynécologiques 

REF 490529 REF 490635 

APPLICATION 

Utilisation diagnostique in vitro 

La méthode manuelle permet de produire des préparations cellulaires 

liquides. Elle est destinée à remplacer la méthode de préparation 

classique par frottis Pap, à des fins de dépistage du cancer du col de 

l’utérus. 

Le SUREPATH ® Preservative Fluid (liquide de conservation) constitue 

un support de prélèvement et de transport adapté aux échantillons 

gynécologiques testés à l’aide des tests à ADN amplifié BD 

ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q x et Neisseria 

gonorrhoeae (GC) Q x . Pour plus d’instructions sur l’utilisation du 

SUREPATH ® Preservative Fluid (liquide de conservation) à des fins de 

préparation des échantillons à utiliser avec ces tests, se reporter aux 

notices du test. 

RÉSUMÉ ET EXPLICATION 

Le dépistage cytologique cervical par la méthode Papanicolaou (Pap) 

requiert l’examen au microscope d’échantillons cellulaires prélevés, à 

l’origine, sur l’exocol et l’endocol, puis étalés sur des lames en verre 

et colorés à l’aide du procédé Pap. 1,2,3 Le dépistage cytologique 

réalisé sur le col de l’utérus sur la base d’un frottis Pap a permis de 

réduire les taux de mortalité due au cancer invasif du col de l’utérus, 

de 50 à 70 %. 4 Étant donné que la cytologie cervicale constitue un 

test de dépistage, les résultats anormaux doivent être confirmés par 

une analyse histologique. 

La qualité du prélèvement et de la préparation des échantillons est 

déterminante pour la précision des frottis Pap. La randomisation ou le 

sous-échantillonnage homogène est essentiel pour obtenir une 

précision parfaite. La technique classique de réalisation des frottis 

Pap ne permet pas de mélanger l’échantillon avant la préparation des 

lames. En raison de la présence de cellules dans le mucus sur le 

dispositif de prélèvement, il est possible que les cellules effectivement 

transférées sur la lame ne soient pas représentatives de l’ensemble de 

la population prélevée. Les cellules sont transférées sur la lame en 

fonction de leur emplacement sur le dispositif de prélèvement. De 

nombreuses cellules restent sur le dispositif. 5 

L’absence d’homogénéité du prélèvement cervical type peut 

compliquer la préparation, le dépistage et l’interprétation du frottis 

classique. De grandes parties de la lame classique sont souvent 

couvertes de débris, de cellules inflammatoires et de gros amas de 

cellules épithéliales pouvant masquer des substances importantes 

pour le diagnostic. En outre, si le frottis n’est pas fixé juste après la 

préparation, l’aspect morphologique des cellules peut se dégrader à 

mesure que le frottis sèche (artefact de séchage à l'air). 

La méthode manuelle permet de transformer une suspension liquide 

d’échantillon cervical en une lame SUREPATH ® homogène, 

à coloration uniforme, tout en conservant les amas cellulaires pour le 

diagnostic. 6,7,8,9 Ce procédé intègre la conservation des cellules, 

la randomisation, l’enrichissement du matériau de diagnostic, 

le pipetage et la sédimentation de manière à créer une préparation 

cellulaire. On obtient ainsi une lame SUREPATH ® servant pour le 

dépistage cytologique de routine et le classement selon le système 

Bethesda. 10 

PRINCIPES DE LA MÉTHODE 

La méthode manuelle permet de produire des préparations de 

produits cellulaires liquides. Les échantillons gynécologiques sont 

prélevés par un personnel médical qualifié, qui utilise des dispositifs de 

type balai (par ex., Cervex Brush ® ) ou une combinaison de spatule en 

plastique et brosse endocervicale (par ex., Cytobrush ® Plus GT et 

spatule Pap-Perfect ® , Medscand (États-Unis) Inc.,) à têtes amovibles. 

La tête de la brosse est détachée du manche puis placée dans un 

flacon contenant le SUREPATH ® Preservative Fluid (liquide de 

conservation). Le flacon est rebouché, étiqueté et envoyé au 

laboratoire, avec les documents nécessaires à son traitement. 

En laboratoire, l’échantillon conservé est mélangé au vortex puis 

transféré dans un tube contenant le réactif de densité PREPSTAIN ® 

Density Reagent (réactif de densité). Une phase d’enrichissement, 

consistant en une sédimentation par centrifugation réalisée avec le 

réactif de densité PREPSTAIN ® Density Reagent (réactif de densité), 

permet d’éliminer partiellement de l’échantillon les débris inutiles au 

diagnostic et l’excès de cellules inflammatoires. Après la 

centrifugation, les composants cellulaires enrichis contenus dans le 

tube sont mis en suspension avec de l’eau désionisée. Ce mélange est 

resuspendu avec un pipetteur, au moyen d’une séquence 

aspiration/distribution. L’échantillon est ensuite transféré dans une 

chambre de décantation PREPSTAIN ® Settling Chamber (chambre de 

décantation) montée sur une lame SUREPATH ® PreCoat (sous-couche). La 

sédimentation par gravité se produit pendant une incubation de courte 

durée. L’excès de matériau est décanté. La lame SUREPATH ® PreCoat 

(sous-couche) est colorée, nettoyée et recouverte d’une lamelle : les 

cellules sont présentées dans un cercle de 13 mm de diamètre. La 

lame SUREPATH ® est examinée par des cytologistes et des 

pathologistes qualifiés, ayant accès à d’autres informations 

pertinentes sur les antécédents médicaux de la patiente. 

LIMITES 

• Les échantillons gynécologiques à préparer suivant la méthode 

manuelle doivent être recueillis à l’aide d’un dispositif de 

prélèvement de type balai, conformément à la procédure de 

prélèvement standard indiquée par le fabricant. 

• La production et l’évaluation des préparations liquides TRIPATH 

Imaging ® , Inc doivent être effectuées uniquement par un 

personnel formé par TRIPATH ou par d’autres personnes 

habilitées par TRIPATH à fournir cette formation. 

• Le dispositif ne fonctionne correctement qu’avec les accessoires 

pris en charge par TRIPATH Imaging ® , Inc ou recommandés par 

TRIPATH Imaging ® , Inc. Les fournitures et les produits usagés 

doivent être mis au rebut correctement, conformément aux 

réglementations nationales en vigueur dans l’établissement. 

• Toutes les fournitures sont à usage unique et ne peuvent pas 

être réutilisées. 

• Un volume de 8,0 ±0,5 ml d’échantillon prélevé dans le 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (flacon de 

prélèvement avec liquide de conservation) est nécessaire pour le 

processus SUREPATH ® LBC Test. 

AVERTISSEMENTS 

• Le SUREPATH ® Preservative Fluid (liquide de conservation) 

contient une solution diluée composée d’éthanol dénaturé et ne 

doit pas être ingéré. Le mélange contient de petites quantités de 

méthanol et d’isopropanol qui, en cas d’ingestion, peuvent 

provoquer des blessures graves, voire une cécité. 

• Le PREPSTAIN ® Density Reagent (réactif de densité) contient de 

l’acide de sodium. L’acide de sodium peut réagir avec les 

conduits en cuivre ou en plomb et former des azides métalliques 

très explosifs. Lors de l’élimination, rincer à grande eau pour 

éviter l’accumulation d’azides. Pour plus d’informations, se 

reporter au guide des méthodes manuelles publié par les Centers 

for Disease Control 11 . 

PRÉCAUTIONS 

• Les bonnes pratiques de laboratoire doivent être respectées et 

toutes les procédures relatives à l’utilisation de la méthode 

manuelle doivent être rigoureusement observées. 

• Tous les réactifs sont stables jusqu’à leur date de péremption, 

dans la mesure où les conditions de conservation 

recommandées sont respectées et maintenues. 

• La contamination microbienne des réactifs peut fausser les 

résultats. 

• L’utilisation de lames autres que les lames SUREPATH ® PreCoat 

(sous-couche) peut produire des résultats médiocres. 

• Éviter les éclaboussures ou l’émission d’aérosols. Porter des 

gants, des lunettes et des vêtements de protection appropriés. 

• L’efficacité antimicrobienne du SUREPATH ® Preservative Fluid 

(liquide de conservation) a été testée et validée contre les 

bactéries suivantes : Escherichia coli, Pseudomonas 

aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida albicans, 

Mycobacterium tuberculosis et Aspergillus niger. Il convient 

toutefois de toujours respecter les précautions universelles de 

manipulation des liquides biologiques. 

EXTRACTION FACULTATIVE DE L’ALIQUOTE 

Le volume présent dans le SUREPATH ® Preservative Fluid Collection 

Vial (flacon de prélèvement avec liquide de conservation) est 

suffisant pour permettre l’extraction de 0,5 ml de mélange homogène 

de cellules et de liquide à des fins de test complémentaire préalable au 

SUREPATH ® Pap Test, qui peut toujours être réalisé ensuite avec le 

volume restant. 

Même si rien n’indique que l’extraction d’une aliquote sur le 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (flacon de prélèvement 

avec liquide de conservation) affecte la qualité de l’échantillon pour 

l’analyse cytologique, il arrive parfois que le matériau de diagnostic 

approprié soit égaré au cours du processus. Les personnels soignants 

doivent alors procéder à l’acquisition d’un nouvel échantillon si les 

résultats ne viennent pas corréler les antécédents cliniques de la 

patiente. En outre, la cytologie fournit des informations cliniques 

différentes de celles des tests des maladies sexuellement 

transmissibles (MST) ; par conséquent, 

le prélèvement d’une aliquote peut ne pas être adapté à toutes les 

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situations cliniques. Si nécessaire, un échantillon distinct peut être 

prélevé à des fins de dépistage des MST, au lieu d’extraire une 

aliquote du SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (flacon de 

prélèvement avec liquide de conservation). 

Le prélèvement de l’aliquote sur des échantillons à faible cellularité 

risque de laisser un matériau biologique insuffisant pour la préparation 

d’un SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (flacon de 

prélèvement avec liquide de conservation) adapté au test SUREPATH ® 

Pap. 

L’aliquote doit être extraite avant le traitement du test SUREPATH ® 

Pap. Une seule aliquote peut être prélevée dans le SUREPATH ® 

Perservative Fluid Collection Vial (flacon de prélèvement avec liquide 

de conservation) avant de réaliser le test Pap, quel que soit le volume 

de l’aliquote. 

Procédure 

1. Afin de garantir l’homogénéité du mélange, il convient de 

vortexer le SUREPATH ® Perservative Fluid Collection Vial 

(flacon de prélèvement avec liquide de conservation) pendant 

10 à 20 secondes, et d’extraire l’aliquote de 0,5 ml dans la 

minute suivant le mélange au vortex. 

2. Pour extraire l’aliquote, utiliser un embout de pipette avec 

barrière aérosol en polypropylène de taille adaptée au volume 

prélevé. Remarque : ne pas utiliser de pipettes sérologiques. 

Appliquer les bonnes pratiques de laboratoire afin d’éviter toute 

contamination du SUREPATH ® Perservative Fluid Collection 

Vial (flacon de prélèvement avec liquide de conservation) ou de 

l’aliquote. L’extraction de l’aliquote doit être réalisée dans un 

environnement adapté, en dehors de la zone d’amplification. 

3. Inspecter visuellement les matériaux de l’aliquote dans la pipette 

afin de déceler toute présence de grosses particules en suspension ou 

de semi-solides. En cas de détection de la présence de ces 

matériaux au cours de l’extraction de l’aliquote, reverser 

immédiatement tous les matériaux dans le flacon de l’échantillon 

et exclure l’échantillon des tests complémentaires préalables au test 

Pap. 

4. Pour plus d’instructions sur le traitement de l’aliquote à l’aide des 

tests à ADN amplifié BD ProbeTec CT Q x et GC Q x , se 

reporter aux notices livrées par le fabricant du test. 

MATÉRIEL REQUIS 

Matériel fourni 

• SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (flacon de 

prélèvement avec liquide de conservation) 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (réactif de densité) 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers (chambres de décantation) 

• Lames SUREPATH ® PreCoat (sous-couche) 

• Tubes de centrifugation 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (pipettes) 

• Embouts d’aspiration 

Matériel requis mais non fourni 

• Centrifugeuse 

• Portoirs de lames 

• Aspirateur Easy (en option) 

• Plateau de traitement (en option) 

• Dispositif de prélèvement de type balai ou brosse 

endocervicale/spatule en plastique à tête(s) amovible(s) 

• Agitateur vortex 

• Pipettes de précision avec embouts jetables 

• Eau désionisée (pH 7,5 à 8,5) 

• Isopropanol et alcool de type réactif 

• Réactifs de coloration 

• Agent de nettoyage, milieu et lamelles de recouvrement 

CONSERVATION 


sans échantillon cytologique peut être conservé à température 

ambiante (15 à 30 °C) jusqu’à 36 mois, à compter de la date de 

fabrication. 

• La durée limite de stockage du SUREPATH ® Preservative Fluid 

(liquide de conservation) avec des échantillons cytologiques est 

de 6 mois en réfrigérateur (2 à 10 °C) ou 4 semaines à 

température ambiante (15 à 30 °C). 


avec échantillon cytologique à utiliser avec les tests à ADN 

amplifié BD ProbeTec CT Q x et GC Q x peut être conservé et 

transporté pendant 30 jours (maximum) à une température 

comprise entre 2 et 30 °C, avant son transfert dans les tubes de 

dilution des échantillons de cytologie à base liquide (LBC) pour 

les tests à ADN amplifié BD ProbeTec Q x . 

PROCÉDURES 

1. Une fois l’échantillon prélevé à l’aide de la brosse Rovers 

Cervex-Brush ® ou d’un dispositif de prélèvement équivalent, la 

tête de la brosse doit être rincée directement dans le liquide, 

retirée du manche et placée dans un SUREPATH ® Preservative 

Fluid Vial (flacon avec liquide de conservation). Le flacon est 

ensuite fermement rebouché, étiqueté et envoyé au laboratoire, 

avec les documents nécessaires à son traitement. 

2. Une fois que le laboratoire est entré en possession des flacons de 

prélèvement, placer chaque flacon dans le plateau de traitement 

avec un tube de centrifugation étiqueté, rempli au préalable de 

4 ml de PREPSTAIN ® Density Reagent (réactif de densité) et une 

lame étiquetée SUREPATH ® PreCoat (sous-couche). Le 

PREPSTAIN ® Density Reagent (réactif de densité) doit être 

ajouté au tube avant l’échantillon, afin d’en préserver 

l’efficacité. 

3. Mélanger énergiquement chaque flacon de prélèvement au 

vortex pendant 10 à 20 secondes. (Le volume présent dans le 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (flacon de 

prélèvement avec liquide de conservation) est suffisant pour 

permettre l’extraction de Syringing Pipettes 0,5 ml de mélange 

homogène de cellules et de liquide à des fins de test 

complémentaire préalable au test SUREPATH ® Pap, qui peut 

toujours être réalisé ensuite avec le volume restant. L’aliquotage 

peut être réalisé après l’étape de mélange au vortex dans le 

cadre du processus de test SUREPATH ® LBC.) 

• Utiliser l’accessoire PREPMATE Automated Accessory 

et les pipettes PREPSTAIN ® Syringing Pipettes pour 

transférer l’échantillon. Se reporter aux instructions du 

manuel d’utilisation PREPMATE Ou 

• Retirer le bouchon du flacon. Tout en maintenant la 

pipette PREPSTAIN ® éloignée de votre visage, tenir le 

SUREPATH ® Preservative Vial d’une main puis, de l’autre, 

enfoncer délicatement une pipette SUREPATH ® dans le 

flacon jusqu’à ce qu’elle s’arrête. Renverser l’ensemble 

flacon/pipette SUREPATH ® dans le tube PREPSTAIN ® 

Density Reagent (réactif de densité) correctement 

numéroté. Laisser toute la solution d’échantillon se vider 

complètement de la pipette SUREPATH ® avant de 

continuer. Ou 

• Retirer le bouchon du flacon. Verser lentement environ 

8 ml d’échantillon dans le PREPSTAIN ® Density Reagent 

(réactif de densité). 

4. Placer les tubes dans les portoirs de centrifugation, en 

respectant le schéma de positionnement indiqué dans le manuel 

de procédure (chaque portoir peut accueillir jusqu’à 12 tubes). 

La séquence de placement est primordiale et doit être 

équilibrée. 

5. Équilibrer les tubes à centrifuger en ajoutant du liquide de 

conservation, si nécessaire, et centrifuger les échantillons 

pendant 2 minutes à 200 x g. 

6. Si l’aspirateur Easy est utilisé, mettre le système d’aspirateur 

Easy sous tension et régler la pression sur 9 ± 2 en Hg. Placer 

des embouts propres sur l’aspirateur Easy. 

7. Retirer les portoirs de tubes de centrifugation de la 

centrifugeuse. Abaisser lentement les embouts de l’aspirateur 

Easy (ou les pipettes de transfert jetables) dans les tubes de 

centrifugation afin d’aspirer le surnageant. Le dispositif 

d’aspiration doit toucher le haut des tubes à la fin du processus. 

Rincer à l’eau les embouts de l’aspirateur entre les échantillons. 

8. Centrifuger les tubes pendant 10 minutes à 800 x g pour 

concentrer le composant diagnostique dans un culot cellulaire 

au fond du tube. 

9. Retirer le portoir de tubes de la centrifugeuse. Décanter 

délicatement et rapidement dans l’évier. En maintenant le 

portoir renversé, absorber soigneusement le contenu des tubes à 

l’aide d’un buvard tout en s’assurant que le culot cellulaire reste 

dans le tube. 

10. Étiqueter une lame SUREPATH ® PreCoat (sous-couche) avec le 

numéro de chaque échantillon, en prenant soin de ne pas 

toucher la surface de la lame SUREPATH ® PreCoat (souscouche). 

Placer les lames dans le portoir de lames et fixer une 

PREPSTAIN ® Settling Chamber (chambre de décantation) sur 

chaque lame. La position de chaque lame numérotée 

SUREPATH ® PreCoat (sous-couche) sur le plateau doit 

correspondre à la position du tube de centrifugation associé. 

11. Ajouter 4 ml d’eau désionisée (pH 7,5 à 8) à chaque tube 

d’échantillon et bien mélanger au vortex. 

12. En travaillant avec un tube d’échantillon à la fois, mélanger le 

tube au vortex et transférer immédiatement 800 µl de 

suspension cellulaire dans la PREPSTAIN ® Settling Chamber 

(chambre de décantation)/lame SUREPATH ® PreCoat (souscouche) 

portant le numéro correspondant. Répéter l’opération 

pour chaque échantillon. 


13. Attendre 10 minutes de manière à ce que la sédimentation soit 

complète. Après la sédimentation, renverser délicatement le 

plateau des lames au-dessus de l’évier pour décanter le liquide 

restant et absorber le surplus de liquide à l’aide d’un buvard. 

14. Rincer chaque PREPSTAIN ® Settling Chamber (chambre de 

décantation) avec 500 µl d’alcool dénaturé et décanter. 

Recommencer le rinçage à l’alcool, décanter le liquide restant et 

absorber le surplus de liquide à l’aide d’un buvard, en tenant le 

matériel renversé pendant au moins 1 minute. 

15. Retirer la PREPSTAIN ® Settling Chamber (chambre de 

décantation). 

16. Colorer les lames SUREPATH ® et les recouvrir de lamelles. 

RÉSULTATS ET INTERPRÉTATION 

• Tous les critères de diagnostic actuellement utilisés dans les 

laboratoires de cytologie pour les frottis Pap classiques sont 

applicables aux préparations liquides TRIPATH Imaging ® , Inc. 

• Toute observation anormale ou suspecte doit être signalée à un 

pathologiste à des fins d’examen et de diagnostic. Toutes les 

modifications morphologiques cellulaires sont importantes et 

doivent être relevées. 

BIBLIOGRAPHIE 




Tench WD: The Papanicolaou Smear. West J Med 1992; 

156: 202-204. 



J Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 



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Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 








Specimen Preparation Through Mono/Thin-Layer Technology in 

Automated Cervical Cancer Screening. Edited by HK Grohs, 







1976. 


USA 

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Fax: 1-336-290-8333 

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MANUAL METHOD (Método manual) 

Proceso de preparación de células para aplicaciones 

ginecológicas 

REF 490529 REF 490635 

USO PREVISTO 

Para uso diagnóstico in vitro 

El Manual Method (método manual) se utiliza para obtener 

preparaciones de células basadas en líquido (LBP). Sirve como 

sustituto del método convencional de preparación de extensiones de 

pruebas de Papanicolaou para utilizar en la detección de cáncer 

cervical. 

El SUREPATH ® Preservative Fluid (líquido conservante) es un medio 

de transporte y recogida adecuado para muestras ginecológicas 

probadas con el análisis BD ProbeTec Chlamydia trachomatis 

(CT) Q x and Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x Amplified DNA Assays 

(análisis de ADN amplificado Chlamydia trachomatis (CT) Q x y 

Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x ). Consulte los folletos de la caja del 

análisis para obtener instrucciones sobre el uso del SUREPATH ® 

Preservative Fluid (líquido conservante) para preparar muestras para 

su uso con estos análisis. 

RESUMEN Y EXPLICACIÓN 

Un examen citológico cervical con el método de Papanicolau (Pap) 

implica un estudio microscópico de las muestras de células 

principalmente ectocervicales y endocervicales extendidas en 

portaobjetos de vidrio y teñidas mediante el procedimiento de 

Papanicolau 1,2,3 . Los estudios citológicos cervicales con el método de 

extensión de Papanicolau han reducido los índices de mortalidad por 

carcinoma cervical invasivo entre un 50 y un 70% 4 . Debido a que la 

citología cervical constituye una prueba de detección, los resultados 

anormales deberán ser confirmados mediante estudios histológicos. 

La recogida y preparación de las muestras son procesos sumamente 

importantes para garantizar la precisión de las extensiones de 

Papanicolau. La randomización o el submuestreo uniforme resultan 

esenciales para confirmar la exactitud. Las técnicas de extensión de 

Papanicolau convencionales no permiten mezclar la muestra antes de 

preparar el portaobjetos. Debido a la presencia de células en las 

mucosas en el dispositivo de muestreo, es posible que las células que 

se transfieran al portaobjetos no sean representativas de todas las 

células recogidas. Las células se transfieren al portaobjetos según la 

posición que ocupan en el dispositivo de muestreo. Muchas células se 

quedan en el dispositivo 5 . 

La falta de homogeneidad en una muestra cervical típica puede 

dificultar la preparación, el estudio y la interpretación de las 

extensiones convencionales. A menudo, grandes zonas del 

portaobjetos convencional están cubiertas de detritos, células 

inflamatorias y capas de células epiteliales que pueden ocultar un 

valioso material de diagnóstico. Además, si la extensión no se fija 

inmediatamente después de su preparación, la morfología celular 

puede sufrir distorsiones a medida que se va secando la extensión 

(artefacto de secado por aire). 

El Manual Method (método manual) convierte una suspensión líquida 

de una muestra cervical en un SUREPATH ® slide (portaobjetos) 

homogéneo y con tinción uniforme, mientras conserva agrupamientos 

de células de diagnóstico 6,7,8,9 . El proceso incluye la conservación de 

las células, la randomización, la potenciación del material de 

diagnóstico, el pipeteado y la sedimentación para crear una 

preparación celular. El resultado del proceso de preparación es un 

SUREPATH ® slide (portaobjetos) para utilizar en pruebas citológicas 

rutinarias y su clasificación según The Bethesda System 10 . 

PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO 

El Manual Method (método manual) se utiliza para obtener 

preparaciones de células basadas en líquido (LBP) de células 

cervicales. El personal médico cualificado utiliza dispositivos de tipo 

escobilla (p. ej., Cervex-Brush ® ) o dispositivos de combinación de 

espátula de plástico y cepillo endocervical (p. ej., 

Cytobrush ® Plus GT y espátula Pap-Perfect ® , MedScand (EE.UU.), 

Inc.) con cabezales desmontables para recoger las muestras 

ginecológicas. 

El cabezal del cepillo se retira del asa y se coloca en un vial de 

SUREPATH ® Preservative Fluid (líquido conservante). El vial se tapa, 

se etiqueta y se envía, junto con la documentación correspondiente, al 

laboratorio para su procesamiento. 

En el laboratorio, la muestra conservada se mezcla con vórtex y se 

transfiere a una probeta que contiene PREPSTAIN ® Density Reagent 

(reactivo de densidad). Un paso de potenciación, que consiste en la 

sedimentación centrífuga a través del PREPSTAIN ® Density Reagent 

(reactivo de densidad), elimina parcialmente los detritos y el exceso 

de células inflamatorias de la muestra. Después de la centrifugación, 

la probeta que contiene el componente celular enriquecido se 

reconstituye con agua desionizada y el material celular se vuelve a 

suspender con una pipeta, mediante un proceso de 

aspiración/dispensación. A continuación, la muestra se transfiere a una 

PREPSTAIN ® Settling Chamber (cámara de sedimentación) montada 

en un SUREPATH ® PreCoat slide (portaobjetos revestidos). Se produce 

una sedimentación por gravedad durante una breve incubación. El 

exceso de material se decanta. El SUREPATH ® PreCoat slide 

(portaobjetos revestido) se tiñe, se limpia y se recubre, ocupando las 

células un círculo de 13 mm de diámetro. Posteriormente, es estudiado 

por citotécnicos y patólogos cualificados junto con otra información 

importante del paciente. 

LIMITACIONES 

• Las muestras ginecológicas para preparación con el Manual 

Method (método manual) deberán recogerse con un dispositivo de 

tipo escobilla según el procedimiento de recogida estándar 

proporcionado por el fabricante. 

• La producción y evaluación de las preparaciones basadas en 

líquido de TRIPATH Imaging ® , Inc sólo deberán ser realizadas por 

personal formado por TRIPATH u otro personal autorizado por 

TRIPATH para impartir dicha formación. 

• El dispositivo funcionará correctamente sólo con productos 

admitidos o recomendados por TRIPATH Imaging ® , Inc. Los 

productos utilizados deben eliminarse según las normativas 

instituciones y gubernamentales. 

• Todos los productos son de un solo uso y no podrán ser 

reutilizados. 

• Es necesario un volumen de 8,0 ± 0,5 mL de la muestra 

recogida en el SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial 

(vial de recogida con líquido conservante) para proceso de 

prueba de SUREPATH ® LBC Test. 

ADVERTENCIAS 

• El SUREPATH ® Preservative Fluid (líquido conservante) 

contiene una solución de dilución de etanol desnaturalizado y 

no es apto para el consumo humano. La mezcla contiene 

pequeñas cantidades de metanol e isopropanol, que son 

perjudiciales y pueden causar ceguera en caso de ingestión. 

• El PREPSTAIN ® Density Reagent (reactivo de densidad) 

contiene azida sódica. La azida sódica puede reaccionar con las 

tuberías de plomo o cobre y formar azidas de metal altamente 

explosivas. Cuando la deseche, deje correr agua abundante para 

evitar la acumulación de azida. Para obtener más información, 

consultar el documento Manual Guide (Guía Manual) publicado 

por Centers for Disease Control 11 . 

PRECAUCIONES 

• Deberán seguirse buenas prácticas de laboratorio y cumplirse 

estrictamente todos los procedimientos de uso del Manual 

Method (Método Manual). 

• Todos los reactivos permanecerán estables hasta su fecha de 

caducidad indicada, siempre y cuando se sigan y se mantengan las 

condiciones de conservación recomendadas. 

• La contaminación microbiana de los reactivos puede producir 

resultados incorrectos. 

• El uso de portaobjetos que no sean SUREPATH ® PreCoat slides 

(portaobjetos revestidos) puede dar lugar a resultados deficientes. 

• Evite salpicaduras o la formación de aerosoles. Utilice un 

material de protección adecuado para las manos, los ojos y la 

ropa. 

• El SUREPATH ® Preservative Fluid (líquido conservante) es 

bactericida y ha sido probado contra: Escherichia coli, 

Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, Candida 

albicans, Mycobacterium tubculosis, y Aspergillus niger. No 

obstante, deberán tomarse en todo momento las precauciones 

universales para la manipulación segura de fluidos biológicos. 

779-07083-00 Rev G Español Page 10

RETIRADA OPCIONAL DE ALÍCUOTA 

Se dispone de volumen suficiente en el SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial (vial de recogida con líquido conservante) para 

retirar hasta 0,5 mL de mezcla homogénea de células y fluido para las 

pruebas complementarias antes de realizar la prueba de SUREPATH ® 

Pap Test (prueba de Papanicolau), dejando suficiente volumen para 

realizar dicha prueba. 

Aunque no existen pruebas de que la retirada de una parte alícuota del 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (vial de recogida con 

líquido conservante) afecte a la calidad de la muestra para la prueba 

citológica, pueden producirse en raras ocasiones casos de 

asignaciones erróneas del material de diagnóstico pertinente durante 

este proceso. Puede que sea necesario que los sanitarios adquieran 

una nueva muestra si los resultados no están correlacionados con el 

historial clínico del paciente. Además, la citología responde a 

cuestiones clínicas diferentes a las pruebas de enfermedades de 

transmisión sexual (ETS); por lo tanto, la retirada de una parte 

alícuota puede que no esté indicada para todas las situaciones 

clínicas. Si fuera necesario, puede recogerse una muestra diferente 

para la prueba de ETS en lugar de tomar una parte alícuota del 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (vial de recogida con 

líquido conservante). 

La retirada de una parte alícuota de muestras con bajo nivel de 

celularidad puede dejar material insuficiente en el SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial (vial de recogida con líquido 

conservante) para la preparación de una prueba de SUREPATH ® Pap 

test (prueba de Papanicolau) satisfactoria. 

La parte alícuota debe retirarse antes de procesar la prueba de 

SUREPATH ® Pap Test (prueba de Papanicolau). Sólo puede retirarse 

una parte alícuota del SUREPATH ® Perservative Fluid Collection Vial 

(vial de recogida con líquido conservante) antes de realizar la prueba 

de Papanicolau, independientemente del volumen de la parte alícuota. 

Procedimiento 

1. Para garantizar una mezcla homogénea, el SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial (vial de recogida con líquido 

conservante) debe mezclarse con vórtex durante 10 a 20 segundos y la 

parte alícuota de 0,5 mL debe retirarse en el plazo de un minuto 

tras la mezcla con vórtex. 

2. Para la retirada de la parte alícuota deberá utilizarse una punta de 

pipeta de polipropileno resistente a aerosoles con el tamaño 

adecuado para el volumen que se esté retirando. Nota: No 

deberán utilizarse pipetas serológicas. Deberán seguirse las 

buenas prácticas del laboratorio para evitar la introducción de 

contaminantes en el SUREPATH ® Preservative Fluid collection vial 

(vial de recogida con líquido conservante) o la parte alícuota. La 

retirada de la parte alícuota debe realizarse en una ubicación 

adecuada, fuera del área en la que se realice la amplificación. 

3. Compruebe visualmente el material de la parte alícuota en la 

pipeta por si existieran partículas de gran tamaño o semisólidas. 

Si existe dicho material a la hora de retirar la parte alícuota, 

deberá devolverse todo el material al vial de muestra y descartar la 

muestra para las pruebas complementarias antes de realizar la 

prueba de Papanicolau. 

4. Para obtener instrucciones sobre el procesamiento de la parte 

alícuota con el análisis BD ProbeTec CT Q x y GC Q x 

Amplified DNA Assays (análisis de ADN amplificado), 

consulte los folletos de la caja suministrados por el fabricante 

del análisis. 

MATERIALES NECESARIOS 

Materiales suministrados 

• SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (vial de recogida con 

líquido conservante) 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (reactivo de densidad) 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers (cámaras de sedimentación) 

• SUREPATH ® PreCoat slides (portaobjetos prerrevestidos) 

• Tubos de centrifugado 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (pipetas para dispensar) 

• Puntas de aspirador 

Materiales necesarios pero no suministrados 

• Centrífuga 

• Gradillas 

• Aspirador Easy Aspirator (opcional) 

• Bandeja de procesado (opcional) 

• Dispositivo de muestreo de tipo escobilla o espátula de 

plástico/cepillo endocervical con cabezal(es) desmontable(s) 

• Mezclador vórtex 

• Pipetas de precisión con puntas desechables 

• Agua desionizada (pH 7,5 a 8,5) 

• Isopropanol y alcohol reactivo 

• Reactivos de tinción 

• Agente de limpieza, medios de montaje, cubreobjetos 

CONSERVACIÓN 

• El SUREPATH ® Preservative Fluid (líquido conservante) sin 

muestras citológicas puede almacenarse a temperatura ambiente (de 

15 a 30° C) durante un máximo de 36 meses desde la fecha de 

fabricación. 

• El límite de conservación del SUREPATH ® Preservative Fluid 

(líquido conservante) con muestras citológicas es de 

6 meses a temperaturas de refrigeración (de 2 a 10 °C) o de 

4 semanas a temperatura ambiente (de 15 a 30 °C). 

• El SUREPATH ® Preservative Fluid (líquido conservante) con 

muestra citológica para su uso con BD ProbeTec CT Q x y GC 

Q x Amplified DNA Assays (análisis amplificado de ADN) se 

pueden almacenar y transportar durante un máximo de 30 días a 

2 – 30 °C antes de transferirlo a los tubos de dilución de 

muestras de citología basadas en líquido (LBC) para los BD 

ProbeTec CT Q x y GC Q x Amplified DNA Assays (análisis 

de ADN amplificado). 

PROCEDIMIENTOS 

1. Una vez recogida la muestra con un Rovers Cervex-Brush ® u 

otro dispositivo de muestreo equivalente, el cabezal del cepillo 

se lava directamente en el líquido, se retira del asa y se deposita 

en un vial de SUREPATH ® Preservative Fluid (líquido 

conservante). El vial se cierra bien, se etiqueta y se envía al 

laboratorio. 

2. Cuando los viales con las muestras lleguen al laboratorio, 

coloque cada vial en la bandeja de procesado con un tubo de 

centrifugado etiquetado y llenado previamente con 4 mL de 

PREPSTAIN ® Density Reagent (reactivo de densidad) y un 

SUREPATH ® PreCoat slide (portaobjetos prerrevestido) 

etiquetado. Deberá añadirse PREPSTAIN ® Density Reagent 

(reactivo de densidad) al tubo antes de introducir la muestra 

para evitar que se reduzca el rendimiento. 

3. Mezcle enérgicamente cada vial con vórtex durante 

10 – 20 segundos. 

(Se dispone de volumen suficiente en el SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial (vial de recogida con líquido conservante) 

para retirar hasta 0,5 mL de mezcla homogénea de células y fluido 

para las pruebas complementarias, dejando suficiente volumen 

para realizar la prueba de Papanicolau. La retirada de parte alícuota 

puede realizarse después del paso de agitación con vórtex en el 

proceso de prueba de SUREPATH ® LBC Test.) 

• Utilice el PREPMATE Automated Accessory (accesorio 

automatizado) y las PREPSTAIN ® Syringing Pipettes 

(pipetas para dispensar) para transferir la muestra. Consulte 

el Manual del usuario de PREPMATE para obtener 

instrucciones. O bien 

• Retire el tapón del vial. Sostenga un SUREPATH ® 

Preservative Vial (vial conservante) con una mano e 

introduzca en él con cuidado las PREPSTAIN ® Syringing 

Pipettes (pipetas para dispensar) hasta que se detengan, 

con el extremo de las pipetas en la dirección opuesta a la 

cara del usuario. Vierta el contenido del conjunto 

vial/PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (pipetas para 

dispensar) en el tubo de PREPSTAIN ® Density Reagent 

(reactivo de densidad) debidamente numerado. Deje que 

se vacíe completamente toda la solución de la muestra de 

las PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (pipetas para 

dispensar) antes de continuar. O bien 

• Retire el tapón del vial. Vierta lentamente unos 8 mL de la 

muestra en el PREPSTAIN ® Density Reagent (reactivo de 

densidad). 

4. Coloque los tubos en las gradillas de centrifugado según el 

diagrama de la secuencia de colocación que aparece en el 

Manual de procedimientos (cada gradilla tiene una capacidad 

para 12 tubos). La secuencia de colocación resulta fundamental y 

deberá ser equilibrada. 

5. Equilibre los tubos de centrifugado añadiendo líquido 

conservante si es necesario y centrifugue las muestras durante 2 

minutos a 200 x g. 

6. Si se utiliza el Easy Aspirator, encienda el sistema Easy 

Aspirator y ajuste la presión a 228 ± 50 mm de Hg. Coloque 

puntas limpias en el aspirador Easy Aspirator. 

7. Retire las gradillas de los tubos de centrifugado de la centrífuga. 

Baje lentamente las puntas del Easy Aspirator (o las pipetas de 

transferencia desechables) e introdúzcalas en los tubos de 

centrifugado para aspirar el sobrenadante. El dispositivo de 

aspiración deberá estar en contacto con la parte superior de los 


tubos cuando finalice el proceso. Lave con agua las puntas del 

aspirador entre las muestras. 

8. Centrifugue los tubos durante 10 minutos a 800 x g para 

concentrar el componente de diagnóstico en un pellet en el 

fondo del tubo. 

9. Retire la gradilla de los tubos de la centrífuga. Decante el 

líquido con cuidado y rápidamente en la pila. Manteniendo la 

gradilla en posición invertida, seque con cuidado los tubos con 

papel absorbente y asegúrese de que el pellet no salga del tubo. 

10. Etiquete un SUREPATH ® PreCoat slide (portaobjetos 

prerrevestido) con el número de cada muestra con cuidado de 

no tocar su superficie. Coloque los portaobjetos en la gradilla y 

fije una PREPSTAIN ® Settling Chamber (cámara de 

sedimentación) en cada portaobjetos. La posición de cada 

SUREPATH ® PreCoat slide (portaobjetos prerrevestido) 

numerado deberá coincidir con la posición del tubo de 

centrifugado correspondiente. 

11. Añada 4 mL de agua desionizada (pH 7,5 – 8,0) a cada tubo 

con muestra y mézclelo bien con vórtex. 

12. Trabajando con un tubo de muestra cada vez, mezcle con vórtex 

el contenido del tubo y transfiera inmediatamente 

800 µL de suspensión de células a la PREPSTAIN ® Settling 

Chamber (cámara de sedimentación)/ SUREPATH ® PreCoat 

slide (portaobjetos prerrevestido) correspondientemente 

numerados. Repita el proceso con cada muestra. 

13. Deje transcurrir 10 minutos para obtener una sedimentación 

completa. Después de la sedimentación, invierta con cuidado 

las bandejas de los portaobjetos sobre la pila para decantar el 

fluido restante y seque el exceso de líquido con papel 

absorbente. 

14. Lave cada PREPSTAIN ® Settling Chamber (cámara de 

sedimentación) con 500 µL de etanol desnaturalizado y decante 

el líquido. Repita el proceso de lavado con alcohol, decante el 

fluido restante y seque el exceso de líquido con papel 

absorbente, dejando las bandejas invertidas durante al menos 1 

minuto. 

15. Retire la PREPSTAIN ® Settling Chamber (cámara de 

sedimentación). 

16. Tiña y cubra los SUREPATH ® Slides (portaobjetos). 

RESULTADOS E INTERPRETACIÓN 

• Todos los criterios de diagnóstico utilizados actualmente en 

laboratorios citológicos para extensiones de Papanicolau 

convencionales son aplicables a las preparaciones de basadas en 

líquido de TRIPATH Imaging ® , Inc. 

• Cualquier resultado anormal o dudoso deberá remitirse a un 

patólogo para que proceda a su estudio y diagnóstico. Cualquier 

alteración morfológica celular es importante y deberá ser 

anotada. 

BIBLIOGRAFÍA 





202-204. 



J Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 


A Triumph and a Tragedy. J Am Med Assoc 1989; 261: 

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METODO MANUALE 

Procedimento di allestimento del preparato cellulare per 

applicazioni ginecologiche 

REF 490529 REF 490635 

USO PREVISTO 

Per uso diagnostico in vitro 

Il metodo manuale è una metodica per l'allestimento di preparati 

cellulari con base liquida (LBP). Il metodo manuale deve essere 

utilizzato in sostituzione della tradizionale metodica di allestimento 

del Pap smear utilizzata nello screening del carcinoma della cervice. 

Il SUREPATH ® Preservative Fluid (conservante) è una soluzione 

adatta alla raccolta e al trasporto di campioni ginecologici da 

sottoporre ai saggi di amplificazione del DNA BD ProbeTec 

Chlamydia trachomatis (CT) Q x e Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x . 

Per istruzioni sull'uso del SUREPATH ® Preservative Fluid (conservante) 

per la preparazione dei campioni da utilizzare in questi saggi, fare 

riferimento al foglietto illustrativo. 

SOMMARIO E SPIEGAZIONE 

Lo screening citologico cervicale con test di Papanicolaou (Pap) 

comprende l'analisi al microscopio dei campioni di cellule prelevate 

principalmente dall'esocervice e dall'endocervice, strisciate su vetrini 

e colorate mediante la procedura di colorazione di Papanicolaou. 1,2,3 

Lo screening citologico cervicale con Pap smear ha ridotto i tassi di 

mortalità per carcinoma cervicale invasivo del 50 - 70%. 4 Dato che la 

citologia cervicale è un test di screening, è necessaria la conferma 

istologica dei risultati anomali. 

Il prelievo e la preparazione dei campioni sono estremamente 

importanti per l'accuratezza nei Pap smear. La randomizzazione o il 

sottocampionamento uniforme è indispensabile per una totale 

accuratezza. La tradizionale tecnica di Pap smear non prevede il 

mescolamento del campione prima dell'allestimento del vetrino. 

A causa della legatura delle cellule nel muco nel dispositivo per il 

prelievo, è possibile che le cellule effettivamente trasferite sul vetrino 

non rappresentino il totale della popolazione cellulare prelevata. Le 

cellule vengono trasferite sul vetrino in rapporto alla loro collocazione 

sul dispositivo per il prelievo. Molte cellule vengono lasciate sul 

dispositivo. 5 

La disomogeneità di un tipico campione cervicale può rendere 

difficile l'allestimento, lo screening e l'interpretazione degli strisci 

convenzionali. Ampie aree del vetrino convenzionale vengono spesso 

coperte di detriti, cellule infiammatorie e strati di cellule epiteliali che 

possono oscurare il prezioso materiale diagnostico. Inoltre, se non si 

fissa lo striscio subito dopo l'allestimento, 

è possibile che la morfologia cellulare risulti alterata a causa 

dell'essiccazione dello striscio (artefatto per essiccazione all'aria). 

Il metodo manuale converte una sospensione liquida di un campione 

di cellule cervicali in un BD SUREPATH ® slide (vetrino) omogeneo 

con colorazione uniforme mantenendo nel contempo i gruppi di 

cellule diagnostici. 6,7,8,9 Il procedimento per la creazione del preparato 

cellulare comprende la conservazione delle cellule, 

la randomizzazione, l'arricchimento del materiale diagnostico, 

la pipettatura e la sedimentazione. Il risultato del procedimento è un 

SUREPATH ® slide (vetrino) da usare nello screening citologico di 

routine e nella categorizzazione definita dal sistema Bethesda. 10 

PRINCIPI DELLA PROCEDURA 

Il metodo manuale è una tecnica di allestimento LBP delle cellule 

cervicali. I campioni ginecologici vengono prelevati da personale 

medico qualificato utilizzando dispositivi del tipo cervex brush (per 

esempio, Cervex-Brush ® ) o dispositivi combinati del tipo brush 

endocervicale/spatola in plastica (per esempio, spatole 

Cytobrush ® Plus GT e Pap-Perfect ® , MedScand USA, Inc.) con teste 

smontabili. La testa del dispositivo di prelievo viene tolta 

dall'impugnatura e inserita in una fiala di BD SUREPATH ® Preservative 

Fluid (conservante). La fiala viene quindi chiusa con il tappo, 

etichettata e inviata con la dovuta documentazione allegata al 

laboratorio di analisi. 

In laboratorio, il campione conservato viene mescolato su vortex e 

trasferito in una provetta contenente PREPSTAIN ® Density Reagent 

(reagente di densità). La fase di arricchimento, consistente nella 

sedimentazione centrifuga mediante PREPSTAIN ® Density Reagent 

(reagente di densità), rimuove parzialmente dal campione i detriti non 

diagnostici e l'eccesso di cellule infiammatorie. Dopo la 

centrifugazione la provetta contenente il componente cellulare 

arricchito viene ricostituita con acqua deionizzata e il materiale 

cellulare viene risospeso con una pipettatrice, praticando una 

sequenza di aspirazione e di erogazione. Il materiale campione viene 

quindi trasferito nella PREPSTAIN ® Settling Chamber (camera di 

decantazione) montata su un SUREPATH ® PreCoat Slide (vetrino). La 

sedimentazione per gravità avviene nel corso di una breve 

incubazione. Il materiale in eccesso viene decantato. Le cellule 

vengono disposte sul SUREPATH ® PreCoat Slide (vetrino) 

precedentemente colorato e schiarito, in modo da ricoprire un'area 

circolare del diametro di 13 mm, quindi viene montato il relativo 

coprioggetto. Qualificati tecnici di citologia e medici patologi 

esamineranno il SUREPATH ® Slide (vetrino), insieme ad altre 

informazioni pertinenti relative alla paziente. 

LIMITAZIONI 

• I campioni ginecologici per l'allestimento con il metodo 

manuale devono essere prelevati utilizzando un dispositivo del 

tipo cervex brush secondo la tecnica di prelievo standard 

prevista dal produttore. 

• La produzione e l'esame dei preparati con base liquida TRIPATH 

Imaging ® , Inc devono essere eseguiti solamente da personale 

opportunamente addestrato da BD Diagnostics - TriPath o da 

terzi autorizzati da BD Diagnostics - TriPath a fornire tale 

formazione. 

• Per il corretto funzionamento del dispositivo è necessario utilizzare 

esclusivamente forniture TRIPATH Imaging ® , Inc o prodotti 

consigliati da TRIPATH Imaging ® , Inc. Le forniture usate 

dovrebbero essere smaltite correttamente in conformità con le 

normative istituzionali e governative vigenti. 

• Tutte le forniture sono monouso e non sono riutilizzabili. 

• Per l'esecuzione del test SUREPATH ® LBC è necessario un 

volume di 8,0 ± 0,5 mL del campione raccolto in una 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (fiala per il 

prelievo con conservante). 

AVVERTENZE 

• Il SUREPATH ® Preservative Fluid (conservante) contiene una 

soluzione diluita di etanolo denaturato e non è destinato al 

consumo umano. La miscela contiene piccole quantità di 

metanolo e isopropanolo che, se ingerite, possono risultare 

pericolose e provocare cecità. 

• Il PREPSTAIN ® Density Reagent (reagente di densità) contiene 

sodio azide. La sodio azide può reagire con il piombo e il rame 

delle tubature, formando azidi metalliche altamente esplosive. 

Al momento dello smaltimento, sciacquare le tubature con 

abbondante acqua per evitare l'accumulo di azide. Per ulteriori 

informazioni, consultare la Manual Guide pubblicata dai Centers 

for Disease Control (CDC). 11 

PRECAUZIONI 

• Si richiede la stretta osservanza delle buone pratiche di 

laboratorio e di tutte le procedure per l'uso del metodo manuale. 

• Tutti i reagenti sono stabili fino alle date di scadenza indicate, 

purché si seguano e si mantengano le condizioni di conservazione 

raccomandate. 

• La contaminazione microbica dei reagenti può dare origine a 

risultati errati. 

• La sostituzione di vetrini diversi dai SUREPATH ® PreCoat Slide 

(vetrini) può inficiare il livello ottimale dei risultati. 

• Evitare schizzi o generazione di aerosol. Utilizzare mezzi di 

protezione adeguati per le mani, gli occhi e gli indumenti. 

• Il SUREPATH ® Preservative Fluid (conservante) è battericida ed 

è stato sottoposto a test di efficacia nei confronti di Escherichia 

coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus aureus, 

Candida albicans, Mycobacterium tuberculosis e Aspergillus 

niger. Tuttavia, è necessario adottare sempre misure 

precauzionali standard per una manipolazione sicura dei liquidi 

biologici. 

PRELIEVO OPZIONALE DI UN'ALIQUOTA 

La SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (fiala per il prelievo 

con conservante) può contenere un volume di campione sufficiente a 

consentire il prelievo di 0,5 mL di miscela omogenea di cellule e 

liquido per test ausiliari prima dell'esecuzione del pap test SUREPATH ® 

conservando ancora un volume sufficiente per questo test. 

779-07083-00 Rev G Italiano Page 13

Non esistono prove che il prelievo di un'aliquota di campione dalla 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (fiala per il prelievo 

con conservante) influenzi la qualità del campione per il test citologico, 

tuttavia durante questo processo possono verificarsi rari casi di errata 

collocazione del materiale diagnostico pertinente. Se i risultati non 

sono correlati alla storia clinica della paziente, può essere necessario 

il prelievo di un altro campione da parte degli operatori sanitari. 

Inoltre, dato che la citologia affronta problemi clinici diversi dai test 

sulla malattie sessualmente trasmissibili (STD), il prelievo di 

un'aliquota può non essere adatto a tutte le situazioni cliniche. Se 

necessario, si può prelevare un altro campione per il test STD invece di 

prelevare un'aliquota da SUREPATH ® Preservative Fluid Collection 

Vial (fiala per il prelievo con conservante). 

Il prelievo di un'aliquota da campioni a bassa cellularità può lasciare 

in SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (fiala per il prelievo 

con conservante) materiale insufficiente per la preparazione di un pap 

test SUREPATH ® soddisfacente. 

L'aliquota deve essere prelevata prima dell'esecuzione del pap test 

SUREPATH ® . Prima dell'esecuzione di questo test, è possibile prelevare 

una sola aliquota da SUREPATH ® Perservative Fluid Collection Vial 

(fiala per il prelievo con conservante), indipendentemente dal volume 

dell'aliquota. 

Procedura 

1. Per garantire una miscela omogenea, SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial (fiala per il prelievo con conservante) deve 

essere agitata in vortex per 10 - 20 secondi e l'aliquota da 0,5 

mL deve essere prelevata entro un minuto. 

2. Per il prelievo dell'aliquota è necessario usare una punta per 

pipette di polipropilene provvista di barriera antiaerosol di 

misura appropriata al volume da prelevare. Nota.: non usare 

pipette sierologiche. Seguire le corrette pratiche di laboratorio 

per non rischiare di introdurre contaminanti in SUREPATH ® 

Preservative Fluid collection vial (fiala per il prelievo con 

conservante) o nell'aliquota. Il prelievo dell'aliquota dovrebbe 

essere effettuato in un'area adeguata, fuori dalla zona in cui 

viene eseguita l'amplificazione. 

3. Verificare visivamente che il materiale dell'aliquota presente 

nella pipetta non presenti particolati grossolani di grandi 

dimensioni o semisolidi. Il riscontro di questo materiale durante 

il prelievo dell'aliquota del campione dovrebbe consigliare di 

reinfondere il materiale nella fiala e scartare il campione per i 

test ausiliari prima dell'esecuzione del pap test. 

4. Per istruzioni per il trattamento dell'aliquota con i test di 

amplificazione del DNA BD ProbeTec Chlamydia 

trachomatis (CT) Q x e Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x , fare 

riferimento al foglietto illustrativo del saggio fornito dal 

produttore. 

MATERIALI NECESSARI 

Materiali forniti 

• SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (fiala per il 

prelievo con conservante) 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (reagente di densità) 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers (camere di sedimentazione) 

• SurePath ® PreCoat slides (vetrini) 

• Provette per centrifuga 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (pipette di erogazione) 

• Punte per aspiratore 

Materiali necessari ma non forniti 

• Centrifuga 

• Rack per vetrini 

• Aspiratore Easy Aspirator (opzionale) 

• Vaschetta di analisi (opzionale) 

• Dispositivo di prelievo tipo cervex brush o brush/spatola di 

plastica endocervicale con una o più teste staccabili 

• Miscelatore vortex 

• Pipette di precisione con punte monouso 

• Acqua deionizzata (pH 7,5 - 8,5) 

• Isopropanolo e alcool per reagente 

• Reagenti di colorazione 

• Diafanizzante, mezzo di montaggio, vetrini coprioggetti 

STOCCAGGIO 

• Il SUREPATH ® Preservative Fluid (conservante) privo di 

campioni citologici può essere stoccato a temperatura ambiente 

(tra 15 °C e 30 °C) per un massimo di 36 mesi dalla data di 

produzione. 

• La durata massima di stoccaggio del SUREPATH ® Preservative 

Fluid (conservante) contenente campioni citologici è di 6 mesi a 

temperatura refrigerata (tra 2 °C e 10 °C) o 4 settimane a 

temperatura ambiente (tra 15 °C e 30 °C). 

• Il SUREPATH ® Preservative Fluid (conservante) contenente 

campioni citologici da usare nei saggi di amplificazione del 

DNA BD ProbeTec CT Q x e GC Q x può essere stoccato e 

trasportato per un massimo di 30 giorni a 2° - 30° C prima di 

essere trasferito nelle provette di diluizione di campioni 

citologici a base liquida (LBC) Dilution per i saggi di 

amplificazione del DNA BD ProbeTec Q x . 

PROCEDURE 

1. Dopo il prelievo del campione con un Rovers Cervex-Brush ® o 

un dispositivo di prelievo equivalente, la testa del dispositivo viene 

sciacquata direttamente nel fluido, rimossa dall'impugnatura e 

immersa nella fiala di SUREPATH ® Preservative Fluid 

(conservante). La fiala viene quindi chiusa ermeticamente con il 

tappo, etichettata e inviata al laboratorio di analisi. 

2. Dopo la registrazione delle fiale dei campioni nel laboratorio, 

collocare ogni fiala nella vaschetta di analisi con una provetta 

per centrifuga etichettata preriempita con 4 ml di PREPSTAIN ® 

Density Reagent (reagente di densità) e un SUREPATH ® PreCoat 

slide (vetrino) etichettato. Per evitare una riduzione del livello di 

prestazioni, aggiungere PREPSTAIN ® Density Reagent (reagente 

di densità) nella provetta prima dell'aggiunta del campione. 

3. Mescolare energicamente su vortex ciascuna fiala di campione per 

10 - 20 secondi. 

(La SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial, fiala per il 

prelievo con conservante, contiene un volume di campione 

sufficiente a consentire il prelievo di 0,5 mL di miscela omogenea di 

cellule e liquido per le prove ausiliarie prima del pap test 

conservando ancora volume sufficiente per il pap test. 

L'aliquotazione può essere eseguita dopo la fase di agitazione su 

vortex nella procedura per il test SUREPATH ® LBC. 

• Per il trasferimento del campione, utilizzare PREPMATE 

Automated Accessory (accessorio automatico) e 

PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (pipette di erogazione). 

Per le istruzioni, consultare il manuale per l'operatore 

PREPMATE. In alternativa, 

• Rimuovere il tappo della fiala. Tenendo in una mano una 

SUREPATH ® Preservative Vial (fiala di conservante), 

inserire delicatamente una PREPSTAIN ® Syringing Pipette 

(pipetta di erogazione) nella fiala fino al suo arresto 

orientando l'estremità della PREPSTAIN ® Syringing Pipette 

(pipetta di erogazione). Capovolgere l'insieme 

fiala/PREPSTAIN ® Syringing Pipette (pipetta di erogazione) 

nella provetta con PREPSTAIN ® Density Reagent (reagente 

di densità) opportunamente numerata. Prima di procedere, 

lasciar scorrere completamente la soluzione campione fuori 

dalla PREPSTAIN ® Syringing Pipette (pipetta di 

erogazione). In alternativa, 

• Rimuovere il tappo della fiala. Versare lentamente circa 8 

ml di campione nel PREPSTAIN ® Density Reagent 

(reagente di densità). 

4. Sistemare le provette nei rack di centrifugazione secondo lo 

schema della sequenza di collocamento riportato nel manuale 

delle procedure (ciascun rack può contenere 12 provette). 

La sequenza di collocamento è fondamentale e deve essere 

controbilanciata. 

5. Controbilanciare le provette per centrifuga aggiungendo 

eventualmente del conservante, quindi centrifugare per 

2 minuti a 200 x g. 

6. Se viene utilizzato l'aspiratore Easy Aspirator, accendere il 

sistema dell'aspiratore e regolare la pressione a 225 ± 50 mmHg. 

Applicare punte pulite all'aspiratore Easy Aspirator. 

7. Rimuovere i rack delle provette dalla centrifuga. Abbassare 

lentamente le punte dell'aspiratore Easy Aspirator (o le pipette per 

trasferimento monouso) nelle provette di centrifugazione, in 

modo da aspirare il supernatante. Il dispositivo di aspirazione deve 

toccare la parte superiore delle provette. Tra un campione e l'altro, 

sciacquare le punte di aspirazione con acqua. 

8. Centrifugare le provette per 10 minuti a 800 x g per concentrare il 

componente diagnostico in un precipitato cellulare sul fondo 

della provetta. 


9. Rimuovere il rack delle provette dalla centrifuga. Far decantare 

attentamente e rapidamente nel lavello. Tenendo il rack 

capovolto, asciugare con cura le provette su carta assorbente 

assicurandosi che il precipitato cellulare rimanga nelle provette. 

10. Etichettare un SUREPATH ® PreCoat slide (vetrino) con il 

numero di ogni campione prestando attenzione a non toccare la 

superficie del SUREPATH ® PreCoat slide (vetrino). Sistemare i 

vetrini nel rack per vetrini e bloccare una PREPSTAIN ® Settling 

Chamber (camera di sedimentazione) su ciascun vetrino. La 

posizione di ciascun SUREPATH ® PreCoat Slide (vetrino) 

numerato sul piatto deve corrispondere alla posizione della 

provetta di centrifugazione corrispondente. 

11. Aggiungere 4 ml di acqua deionizzata (pH 7,5 - 8,0) a ciascuna 

provetta e miscelare su vortex. 

12. Procedendo con una provetta di campione alla volta, miscelare 

la provetta su vortex e trasferire subito 800 µl di sospensione 

cellulare nella PREPSTAIN ® Settling Chamber (camera di 

sedimentazione) numerata/SUREPATH ® PreCoat Slide (vetrino) 

numerato corrispondente. Ripetere l'operazione per ciascun 

campione. 

13. Attendere 10 minuti per consentire la sedimentazione completa. 

Al termine della sedimentazione, capovolgere con cura i piatti 

dei vetrini sul lavello per far decantare il liquido rimanente e 

asciugare l'eccesso di liquido su carta assorbente. 

14. Sciacquare ciascuna PREPSTAIN ® Settling Chamber (camera di 

sedimentazione) con 500 µl di etanolo denaturato e far 

decantare. Ripetere il risciacquo con alcool e far decantare il 

liquido residuo, quindi asciugare l'eccedenza di liquido su carta 

assorbente, lasciando le camere capovolte per almeno 

1 minuto. 

15. Rimuovere la PREPSTAIN ® Settling Chamber (camera di 

sedimentazione). 

16. Colorare i SUREPATH ® PreCoat Slide (vetrini) e montare i 

relativi coprioggetto. 

RISULTATI E INTERPRETAZIONE 

• Tutti i criteri diagnostici attualmente in uso nei laboratori di 

citologia per i Pap smear convenzionali sono applicabili ai 

preparati per pap test con base liquida TRIPATH Imaging ® , Inc. 

• L'eventuale osservazione di screening anomalo o incerto deve 

essere indirizzata a un tecnico di patologia per l'esame e la 

diagnosi. Gli eventuali mutamenti della morfologia cellulare 

sono significativi e devono essere valutati. 

BIBLIOGRAFIA 





202-204. 


Elderly Women: Another Look at Papanicolaou Smear Testing. J 

Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 



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215-219. 




Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 
















1976. 


USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

Telephone: +32 (0)53 720 673 

Fax: +32 (0)53 720 678 




Benex Limited 




Ireland 


TUTTI I DIRITTI RISERVATI 

BD, il logo BD e BD Probe Tec sono marchi di fabbrica di 



HANDMATIGE METHODE 

Een celpreparatieproces voor gynaecologische toepassingen 

REF 490529 REF 490635 

BEOOGD GEBRUIK 

Voor in-vitrodiagnostiek 

De handmatige methode is een methode voor het produceren van 

celpreparaten op vloeistofbasis (LBP’s, Liquid-Based cell 

Preparations). De handmatige methode is bedoeld als vervanging van 

de conventionele preparatiemethode voor uitstrijkjes bij het screenen 

op baarmoederhalskanker. 

SUREPATH ® Preservative Fluid (conserveervloeistof) is een geschikt 

medium voor afname en transport van gynaecologische monsters die 

worden getest met behulp van BD ProbeTec Chlamydia 

trachomatis (CT) Q x en Neisseria gonorrhea (GC) Q x 

geamplificeerde DNA-tests. Raadpleeg de bijsluiters in de 

testverpakking voor instructies voor het gebruik van SUREPATH ® 

Preservative Fluid (conserveervloeistof) bij het prepareren van 

monsters voor het gebruik met deze tests. 

SAMENVATTING EN UITLEG 

Screening op baarmoederhalskanker door middel van de Papmethode 

(Papanicolaou) omvat microscopisch onderzoek van 

celmonsters die hoofdzakelijk zijn genomen van de ecto- en 

endocervix; deze monsters worden op glazen objectglaasjes 

uitgestreken en gekleurd door middel van de Pap-procedure. 1,2,3 

Dankzij screening op baarmoederhalskanker door middel van het 

Pap-uitstrijkje is het sterftecijfer van invasieve baarmoederhalskanker 

met 50 tot 70 procent gedaald. 4 Omdat cervicale cytologie een 

screeningtest is, moeten abnormale resultaten histologisch worden 

bevestigd. 

Het verzamelen en prepareren van monsters is uitermate belangrijk 

voor de nauwkeurigheid van Pap-uitstrijkjes. Randomisatie of 

uniforme subafname is essentieel voor volledige nauwkeurigheid. De 

conventionele techniek voor uitstrijkjes voorziet niet in het mengen 

van monsters voorafgaand aan de preparatie van de objectglaasjes. 

Door het contact van cellen met slijm op het afname-instrument zijn 

de cellen die daadwerkelijk naar het objectglaasje worden 

overgebracht, niet representatief voor de totale verzamelde populatie. 

De cellen worden naar het glaasje overgebracht op basis van hun 

locatie op het afname-instrument. Veel cellen blijven achter op het 

instrument. 5 

Aangezien een typisch cervicaal monster niet homogeen is, kan een 

conventioneel uitstrijkje moeilijk te prepareren, te screenen en te 

interpreteren zijn. Vaak zijn grote delen van het conventionele 

objectglaasje bedekt met vuil, ontstekingscellen en epitheelcellen, 

waardoor waardevol diagnostisch materiaal verborgen is. Als het 

uitstrijkje na preparatie niet onmiddellijk wordt gefixeerd, kan 

bovendien de morfologie van de cellen verstoord worden bij het 

uitdrogen van het uitstrijkje (artefact als gevolg van drogen aan de 

lucht). 

De handmatige methode is een methode voor het omzetten van een 

vloeibare suspensie van een cervicaal monster in een consistent 

gekleurd, homogeen SUREPATH ® -objectglaasje waarbij de 

diagnostische celclusters bewaard blijven. 6,7,8,9 Het proces omvat 

celconservatie, randomisatie, verrijking van diagnostisch materiaal, 

pipettering en sedimentatie voor het maken van een celpreparaat. Het 

resultaat van het preparatieproces is een SUREPATH ® -objectglaasje voor 

gebruik tijdens routinematige cytologiescreening en categorisatie 

zoals gedefinieerd door het Bethesda-systeem. 10 

PRINCIPES VAN DE PROCEDURE 

De handmatige methode is een procedure voor de preparatie van 

LBP’s van baarmoederhalscellen. Gynaecologische monsters worden 

verzameld door getraind medisch personeel met behulp van 

borstelachtige instrumenten (bijvoorbeeld de Cervex-Brush ® ) of 

combinatie-instrumenten endocervicale borstel/plastic spatel 

(bijvoorbeeld de Cytobrush ® Plus GT en Pap-Perfect ® -spatel, 

MedScand (VS), Inc.) met afneembare koppen. De kop van de borstel 

wordt verwijderd van de handgreep en in een potje met SUREPATH ® 

Preservative Fluid (conserveervloeistof) geplaatst. Het potje wordt 

voorzien van een dop en etiketten en wordt voor verdere verwerking 

met de juiste documenten naar het laboratorium verstuurd. 

In het laboratorium wordt het geconserveerde monster gemengd op 

een vortexer en overgebracht naar een buisje met PREPSTAIN ® 

Density Reagent (dichtheidsreagens). Tijdens een verrijkingsstap, 

bestaande uit centrifugale sedimentatie door middel van PREPSTAIN ® 

Density Reagent (dichtheidsreagens), worden niet-diagnostisch vuil 

en overmatige ontstekingscellen gedeeltelijk uit het monster 

verwijderd. Na centrifugatie wordt het buisje met de verrijkte 

celcomponent gereconstitueerd met gedeïoniseerd water en wordt het 

celmateriaal geresuspendeerd met een pipet, waarbij gebruik wordt 

gemaakt van een aspireren/afgeven-reeks. Het monstermateriaal wordt 

vervolgens overgebracht naar een PREPSTAIN ® Settling Chamber 

(bezinkkamer) die is aangebracht op een SUREPATH ® PreCoatobjectglaasje. 

Tijdens een korte incubatieperiode vindt sedimentatie 

door zwaartekracht plaats. Overtollig materiaal wordt gedecanteerd. 

Het SUREPATH ® PreCoat-objectglaasje wordt gekleurd, gereinigd en 

afgedekt, waarbij de cellen een cirkel met een diameter van 13 mm 

vormen. Het SUREPATH ® -objectglaasje wordt onderzocht door 

getrainde cytotechnologen en pathologen in combinatie met andere 

relevante patiëntgegevens. 

BEPERKINGEN 

• Gynaecologische monsters voor preparatie met behulp van 

de handmatige methode moeten worden verzameld met een 

borstelachtig instrument conform de 

standaardmonsterafnameprocedure, die is gespecificeerd door 

de fabrikant. 

• De productie en evaluatie van TRIPATH Imaging ® , Incpreparaten 

op vloeistofbasis mogen uitsluitend worden 

uitgevoerd door personeel dat is getraind door TRIPATH of 

anderen die toestemming hebben van TRIPATH om een 

dergelijke training te geven. 

• Voor een goede werking van het instrument mogen uitsluitend 

instrumenten worden gebruikt die worden ondersteund of 

aanbevolen door TRIPATH Imaging ® , Inc. Gebruikte instrumenten 

moeten worden afgevoerd in overeenstemming met de wet- en 

regelgeving van de instelling en de overheid. 

• Alle instrumenten zijn bedoeld voor eenmalig gebruik en kunnen 

niet worden hergebruikt. 

• Er is een volume van 8,0 ± 0,5 mL van het in het SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial (monsterpotje met 

conserveervloeistof) verzamelde monster vereist voor het 

SUREPATH ® LBC-testproces. 

WAARSCHUWINGEN 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (conserveervloeistof) bevat een 

verdunde oplossing van gedenatureerd ethanol en is niet bedoeld 

voor menselijke consumptie. Het mengsel bevat kleine 

hoeveelheden methanol en isopropanol, die schadelijk kunnen 

zijn en blindheid kunnen veroorzaken bij opname door de mond. 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (dichtheidsreagens) bevat 

natriumazide. Natriumazide kan reageren met loden en koperen 

afvoerbuizen, waarbij zeer explosieve metaalaziden worden 

gevormd. Bij het afvoeren moet met ruime hoeveelheden water 

worden nagespoeld om ophoping van aziden te voorkomen. 

Voor nadere informatie raadpleegt u de Manual Guide die is 

uitgegeven door de Centers for Disease Control. 11 

VOORZORGSMAATREGELEN 

• Er moeten correcte laboratoriummethoden worden nageleefd en 

alle gebruiksprocedures van de handmatige methode moeten strikt 

in acht worden genomen. 

• Alle reagentia blijven tot de aangegeven uiterste gebruiksdatum 

stabiel, mits de aanbevolen opslagvoorwaarden worden 

opgevolgd en onderhouden. 

• Microbiële contaminatie van reagentia kan leiden tot onjuiste 

resultaten. 

• Substitutie door andere objectglaasjes dan de SUREPATH ® 

PreCoat-objectglaasjes kan leiden tot minder dan optimale 

resultaten. 

• Vermijd spatten en het creëren van aerosolen. Draag geschikte 

bescherming voor handen, ogen en kleding. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (conserveervloeistof) is 

bacteriedodend en is getest op: Escherichia coli, Pseudomonas 


Mycobacterium tuberculosis en Aspergillus niger. Universele 

voorzorgsmaatregelen voor de veilige behandeling van 

biologische vloeistoffen moeten echter te allen tijde worden 

toegepast. 

OPTIONELE VERWIJDERING VAN ALIQUOT 

Er is voldoende volume beschikbaar in het SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial (monsterpotje met conserveervloeistof) om 

maximaal 0,5 mL van een homogeen mengsel van cellen en vloeistof uit 

te nemen voor aanvullende tests, voorafgaand aan de SUREPATH ® 

Pap-test, en toch nog over voldoende volume te beschikken voor de 

Pap-test. 

Hoewel er geen bewijs is dat het verwijderen van een aliquot uit het 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (monsterpotje met 

conserveervloeistof) de kwaliteit van het monster voor cytologische 

tests beïnvloedt, kunnen zich tijdens dit proces zeldzame gevallen van 

foutieve toewijzing van relevant diagnostisch materiaal voordoen. 

Zorgverleners moeten mogelijk een nieuw monster afnemen als de 

resultaten niet aansluiten bij de klinische voorgeschiedenis van de 

patiënt. Bovendien richt cytologie zich op andere klinische kwesties 

dan SOA-tests (seksueel overdraagbare aandoeningen), wat betekent 

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dat verwijdering van een aliquot mogelijk niet geschikt is voor alle 

klinische situaties. In plaats van een aliquot uit het SUREPATH ® 


conserveervloeistof) te nemen, kan er zo nodig een afzonderlijk 

monster voor SOA-tests worden afgenomen. 

Bij verwijdering van een aliquot uit monsters met lage cellulariteit 

blijft er mogelijk onvoldoende materiaal in het SUREPATH ® 


conserveervloeistof) over voor de preparatie van een bevredigende 

SUREPATH ® Pap-test. 

Een aliquot moet worden verwijderd voordat de SUREPATH ® Pap-test 

wordt verwerkt. Er mag slechts één aliquot uit het SUREPATH ® 


conserveervloeistof) worden verwijderd voordat de Pap-test wordt 

uitgevoerd, ongeacht het volume van het aliquot. 

Procedure 

1. Om voor een homogeen mengsel te zorgen, moet het SUREPATH ® 


conserveervloeistof) 10 – 20 seconden in de vortexer worden 

geplaatst en moet het aliquot van 0,5 mL binnen één minuut na 

gebruik van de vortexer worden uitgenomen. 

2. Voor het verwijderen van het aliquot moet een pipettip van 

polypropyleen met aerosolbarrière worden gebruikt met een 

geschikte maat voor het af te nemen volume. Opmerking: er 

mogen geen serologische pipetten worden gebruikt. Er moeten 

correcte laboratoriummethoden worden toegepast om te 

vermijden dat er verontreinigingen in het SurePath ® Preservative 

Fluid Collection Vial (monsterpotje met conserveervloeistof) of 

het aliquot terechtkomen. Verwijdering van een aliquot moet 

worden uitgevoerd op een geschikte locatie buiten een zone 

waar amplificatie wordt uitgevoerd. 

3. Voer een visuele inspectie van het aliquotmateriaal in de pipet 

uit op de aanwezigheid van grote deeltjes of halfvaste stoffen. 

Als dergelijk materiaal wordt waargenomen bij het afnemen 

van het aliquotmateriaal, moet al het materiaal in het 

monsterpotje worden geretourneerd en moet het monster 

worden afgekeurd voor aanvullende tests vóór uitvoering van 

de Pap-test. 

4. Voor instructies voor het verwerken van het aliquot met de BD 

ProbeTec CT Q x en GC Q x geamplificeerde DNA-tests 

raadpleegt u de bijsluiters in de testverpakking die door de 

fabrikant zijn geleverd. 

BENODIGDE MATERIALEN 

Meegeleverde materialen 

• SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (monsterpotje 

met conserveervloeistof) 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (dichtheidsreagens) 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers (bezinkkamers) 

• SUREPATH ® PreCoat-objectglaasjes 

• Centrifugeerbuisjes 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (injectiepipetten) 

• Aspiratietips 

Benodigde materialen die niet zijn meegeleverd 


• Glaasjesrekken 

• Easy Aspirator (optioneel) 

• Verwerkingshouder (optioneel) 

• Borstelachtig afname-instrument of endocervicale 

borstel/plastic spatel met afneembare kop(pen) 

• Vortexer 

• Precisiepipetten met wegwerptip 

• Gedeïoniseerd water (pH 7,5 tot 8,5) 

• Isopropanol en alcohol van reagenskwaliteit 

• Kleurreagentia 

• Reinigingsmiddel, preparatiemedia, dekglaasjes 

OPSLAG 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (conserveervloeistof) zonder 

cytologische monsters kan maximaal 36 maanden na de 

productiedatum bij kamertemperatuur (15 °C tot 30 °C) worden 

bewaard. 

• De opslaglimiet voor SUREPATH ® Preservative Fluid 

(conserveervloeistof) met cytologische monsters is 6 maanden 

in gekoelde toestand (2 tot 10 °C) of 4 weken bij 

kamertemperatuur (15 tot 30 °C). 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (conserveervloeistof) met 

cytologische monsters, bedoeld voor gebruik met de 

BD ProbeTec CT Q x en GC Q x geamplificeerde DNA-tests, 

kan maximaal 30 dagen worden opgeslagen en getransporteerd 

bij een temperatuur van 2 – 30 °C voordat deze wordt 

overgebracht naar de LBC-verdunningsbuisjes (Liquid-Based 

Cytology) voor de BD ProbeTec Q x geamplificeerde DNAtests. 

PROCEDURES 

1. Nadat het monster is verzameld met behulp van een Rovers 

Cervex-Brush ® of een equivalent afname-instrument, wordt de 

borstelkop onmiddellijk afgespoeld in de vloeistof, van de 

handgreep genomen en in een potje met SUREPATH ® Preservative 

Fluid (conserveervloeistof) geplaatst. Het potje wordt goed 

afgesloten, voorzien van etiketten en naar het laboratorium 

verstuurd. 

2. Wanneer de monsterpotjes zijn aangekomen in het laboratorium, 

moet elk potje in de verwerkingshouder worden geplaatst met 

een gelabeld centrifugeerbuisje dat vooraf is gevuld met 4 mL 

PREPSTAIN ® Density Reagent (dichtheidsreagens) en een 

gelabeld SUREPATH ® PreCoat-objectglaasje. PREPSTAIN ® 

Density Reagent (dichtheidsreagens) moet aan het buisje 

worden toegevoegd voordat het monster wordt toegevoegd; 

anders neemt de prestatie af. 

3. Mix elk monsterpotje krachtig gedurende 10 – 20 seconden. 

(Er is voldoende volume beschikbaar in het SUREPATH ® 


conserveervloeistof) om maximaal 0,5 mL van een homogeen 

mengsel van cellen en vloeistof uit te nemen voor aanvullende 

tests, en toch nog over voldoende volume te beschikken voor de 

Pap-test. Na deze stap met de vortexer in het SUREPATH ® LBCtestproces 

kan een aliquot worden uitgenomen.) 

• Gebruik de geautomatiseerde accessoire PREPMATE en 

PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (injectiepipetten) om het 

monster over te brengen. Zie de gebruikershandleiding bij 

de PREPMATE voor instructies. Of 

• Verwijder de dop van het potje. Houd een SUREPATH ® 

Preservative Vial (conserveerpotje) in een hand en druk 

voorzichtig een PREPSTAIN ® Syringing Pipette (injectiepipet) 

in het potje totdat deze stopt, waarbij het uiteinde van de 

PREPSTAIN ® Syringing Pipette (injectiepipet) van uw 

gezicht weg wijst. Keer het geheel (potje/PREPSTAIN ® 

Syringing Pipette (injectiepipet)) om in het correct 

genummerde buisje met PREPSTAIN ® Density Reagent 

(dichtheidsreagens). Laat alle monsteroplossing uit de 

PREPSTAIN ® Syringing Pipette (injectiepipet) lopen 

voordat u verder gaat. Of 

• Verwijder de dop van het potje. Laat ongeveer 8 mL van 

het monster op het PREPSTAIN ® Density Reagent 

(dichtheidsreagens) lopen. 

4. Plaats de buisjes in de centrifugerekken aan de hand van het 

plaatsingsvolgordeschema in de procedurehandleiding (elk rek 

heeft plaats voor 12 buisjes). De plaatsingsvolgorde is uitermate 

belangrijk en moet uitgebalanceerd zijn. 

5. Breng de centrifugeerbuisjes in evenwicht door, indien nodig, 

conserveervloeistof toe te voegen en centrifugeer de monsters 

gedurende 2 minuten bij 200 x g. 

6. Als de Easy Aspirator wordt gebruikt, moet het Easy Aspiratorsysteem 

worden ingeschakeld en moet de druk worden ingesteld 

op 9 ± 2 inHg (230 ± 50 mmHg). Plaats schone tips op de Easy 

Aspirator. 

7. Neem de rekken met de centrifugeerbuisjes uit de centrifuge. 

Laat de Easy Aspirator-tips (of wegwerppipetten) langzaam in 

de centrifugeerbuisjes zakken om het supernatant te aspireren. 

Het aspiratie-instrument moet bij voltooiing de bovenzijde van 

de buisjes raken. Spoel de aspiratortips tussen monsters af met 

water. 

8. Centrifugeer de buisjes gedurende 10 minuten bij 800 x g om 

de diagnostische component te concentreren tot een celpellet 

onder in het buisje. 

9. Neem het rek met de buisjes uit de centrifuge. Decanteer de 

vloeistof voorzichtig en snel in de wasbak. Houd het rek 

omgekeerd en droog de buisjes voorzichtig op absorberend 

papier, maar zorg ervoor dat de celpellet in het buisje blijft. 

10. Voorzie SUREPATH ® PreCoat-objectglaasjes van de 

monsternummers en raak daarbij het oppervlak van de 

SUREPATH ® PreCoat-objectglaasjes niet aan. Plaats de 

objectglaasjes in een objectglaasjesrek en bevestig een 

PREPSTAIN ® Settling Chamber (bezinkkamer) op elk van de 

glaasjes. De positie van elk genummerd SUREPATH ® PreCoatobjectglaasje 

op de plaat moet overeenkomen met de positie 

van het bijbehorende centrifugeerbuisje. 

11. Voeg 4 mL gedeïoniseerd water (pH 7,5 – 8,0) toe aan elk 

monsterbuisje en meng dit goed met behulp van een vortexer. 


12. Werk met één monsterbuisje tegelijkertijd, meng het buisje met 

behulp van een vortexer en breng onmiddellijk 800 µL 

celsuspensie over naar de PREPSTAIN ® Settling Chamber 

(bezinkkamer)/het SUREPATH ® PreCoat-objectglaasje met het 

juiste nummer. Herhaal dit voor elk monster. 

13. Neem 10 minuten de tijd om een volledige sedimentatie te laten 

plaatsvinden. Keer de plaat met objectglaasjes na de 

sedimentatie om boven de wasbak om de resterende vloeistof te 

decanteren en laat het teveel aan vloeistof wegvloeien op 

absorberend papier. 

14. Spoel elke PREPSTAIN ® Settling Chamber (bezinkkamer) af met 

500 µL gedenatureerd ethanol en decanteer de vloeistof. 

Herhaal het spoelen met alcohol en het decanteren van de 

resterende vloeistof en laat het teveel aan vloeistof wegvloeien 

op absorberend papier; laat de bezinkkamers minstens 1 minuut 

omgekeerd staan. 

15. Verwijder de PREPSTAIN ® Settling Chamber (bezinkkamer). 

16. Kleur de SUREPATH ® PreCoat-objectglaasjes en voorzie deze 

van afdekglaasjes. 

RESULTATEN EN INTERPRETATIE 

• Alle diagnostische criteria die momenteel worden gebruikt in 

cytologielaboratoria voor conventionele uitstrijkjes, zijn van 

toepassing op TRIPATH Imaging ® , Inc.-preparaten op 

vloeistofbasis. 

• Alle abnormale of twijfelachtige screeningresultaten moeten 

worden doorgestuurd naar een patholoog voor verdere analyse 

en diagnose. Alle cellulaire morfologische wijzigingen zijn van 

belang en moeten worden vermeld. 

LITERATUURLIJST 





202-204. 



J Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 



743. 




Using the ThinPrep® Processor. Am J Clin Pathol 1994; 

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Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 
















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MANUEL METODE 

En proces til cellepræparation ved gynækologiske 

applikationer 

REF 490529 REF 490635 

TILSIGTET BRUG 

In vitro-diagnostik 

Manual Method er en metode til frembringelse af væskebaserede 

cellepræparater (LBP'er). Manual Method er beregnet som en 

erstatning for den konventionelle Pap smear-præparationsmetode til 

brug ved screening for cervikal cancer. 

SUREPATH ® Preservative Fluid (konserveringsvæske) er et egnet 

indsamlings- og transportmedium til gynækologiske prøver, der er 

testet med BD ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q x og 

Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x amplificeret DNA-analyser. Se 

indlægssedlerne til analyserne for at få oplysninger om, hvordan 

SurePath ® Preservative Fluid (konserveringsvæske) bruges til at 

klargøre prøver til brug med disse analyser. 

RESUME OG FORKLARING 

Cervikal cytologisk screening efter Papanicolaou-metoden (Pap) 

omfatter mikroskopisk undersøgelse af celleprøver, der er blevet taget 

primært fra ecto- og endocervix, strøget ud på objektglas og farvet 

ved brug af Pap-proceduren. 1,2,3 Cervikal cytologisk screening med 

Pap smear har nedbragt mortalitetsgraden ved invasiv, cervikal 

carcinoma med 50 til 70 %. 4 Da cervikal cytologi er en 

screeningstest, skal unormale fund bekræftes histologisk. 

Prøvetagning og præparation er yderst vigtig for nøjagtigheden ved 

Pap smears. Randomisering eller ensartet underprøvetagning er 

væsentlig for fuldstændig nøjagtighed. Den konventionelle teknik ved 

Pap smear giver ikke mulighed for blanding af prøven forud for 

udstrygning. På grund af sammenfiltringen af celler i mucus på 

prøvetagningsanordningen er de celler, der faktisk overføres til 

objektglasset, ikke nødvendigvis repræsentative for den totale 

opsamlede population. Cellerne overføres til objektglasset i forhold 

til, hvor de tilfældigvis befinder sig på prøvetagningsanordningen. 

Mange celler bliver tilbage på anordningen. 5 

Den manglende homogenitet ved en typisk cervikal prøve kan gøre 

konventionelle udstrygninger vanskelige at præparere, screene og 

fortolke. Store områder på et konventionelt objektglas er ofte dækket 

med debris, inflammatoriske celler og strøg af epitelceller, der kan 

dække over værdifuldt, diagnostisk materiale. Derudover kan cellulær 

morfologi blive forvansket, efterhånden som udstrygningen tørrer 

(lufttørringsartefakt), hvis udstrygningen ikke bliver fikseret 

umiddelbart efter præparation. 

Manual Method er en metode til konvertering af en flydende 

suspension af en cervical prøve til et ensartet farvet, homogent 

SUREPATH ® -objektglas, medens diagnostiske celleklynger 

bibeholdes. 6,7,8,9 Processen omfatter cellefiksering, randomisering, 

berigelse af diagnostisk materiale, pipettering og sedimentering for at 

skabe et cellulært præparat. Resultatet af præparationsprocessen er et 

SUREPATH ® -objektglas til brug ved rutinemæssig cytologisk 

screening og kategorisering som defineret af Bethesda System. 10 

PROCEDURENS PRINCIPPER 

Manual Method er en procedure til præparation af LBP'er i cervikale 

celler. Gynækologiske prøver tages af uddannet medicinsk personale 

ved brug af anordninger af børstetypen (f.eks. Cervex-Brush ® ) eller 

en endocervikal børste/plastspatel (f.eks. Cytobrush ® Plus GT og Pap- 

Perfect ® -spatel fra MedScand (USA), Inc.) med aftageligt hoved. 

Hovedet på børsten fjernes fra håndtaget og anbringes i et hætteglas 

med SUREPATH ® Preservative Fluid (konserveringsvæske). Der sættes 

låg og etiket på hætteglasset, hvorefter det sendes med tilhørende 

dokumenter til laboratoriet til behandling. 

På laboratoriet blandes den fikserede prøve efter vortex-metoden og 

overføres til et reagensglas indeholdende PREPSTAIN ® Density 

Reagent (densitetsreagens). Et berigelsestrin, bestående af centrifugal 

sedimentering gennem PREPSTAIN ® Density Reagent 

(densitetsreagens), fjerner delvis ikke-diagnostisk debris og 

overskydende inflammatoriske celler fra prøven. Efter centrifugering 

bliver reagensglasset, der indeholder den berigede cellulære 

komponent, rekonstitueret med deioniseret vand, og det cellulære 

materiale resuspenderes med en pipette ved brug af en en aspirerings- 

/dispenseringssekvens. Prøvematerialet overføres derefter til et 

PREPSTAIN ® Settling Chamber (bundfældningskammer) monteret på et 

SUREPATH ® PreCoat-objektglas. Tyngdekraftsedimentering 

forekommer under en kort inkubation. Overskydende materiale 

dekanteres. SUREPATH ® 

PreCoat-objektglasset farves, renses og får dækglas på, med cellerne 

anbragt i en cirkel på 13 mm i diameter. SUREPATH ® -objektglasset 

undersøges af uddannede cytoteknikere og patologer i forbindelse 

med anden relevant patientinformation. 

BEGRÆNSNINGER 

• Gynækologiske prøver til præparation med Manual Method bør 

tages ved hjælp af en anordning af børstetypen i henhold til 

producentens standardprøvetagningsprocedure. 

• Fremstillingen og evalueringen af væskebaserede præparater fra 

TRIPATH Imaging ® , Inc bør kun udføres af personale, der er 

blevet uddannet af TRIPATH eller andre, der er autoriserede af 

TRIPATH til at give en sådan uddannelse. 

• Korrekt ydeevne af anordningen kræver, at der udelukkende 

bruges de artikler, der understøttes af TRIPATH Imaging ® , Inc eller 

anbefales af TRIPATH Imaging ® , Inc. Brugte artikler skal bortskaffes 

korrekt i henhold til institutionelle eller statslige regler. 

• Alle artikler er kun til engangsbrug og kan ikke genanvendes. 

• Der kræves en mængde på 8,0 ± 0,5 mL af den prøve, som er 

indsamlet i SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial 

(opsamlingshætteglas til konserveringsvæske), til behandling af 

SUREPATH ® -LBC-testen. 

ADVARSLER 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (konserveringsvæske) 

indeholder en fortyndet opløsning af denatureret ethanol og er 

ikke beregnet til human fortæring. Blandingen indeholder små 

mængder methanol og isopropanol, hvilke kan være skadelige 

og medføre blindhed, hvis de indtages. 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (densitetsreagens) indeholder 

natriumazid. Natriumazid kan reagere med bly- eller kobberrør og 

danne yderst eksplosive metalazider. Ved bortskaffelsen skylles 

med store mængder vand for at forhindre ophobning af azid. 

For yderligere information henvises der til Manual Guide 

udgivet af Centers for Disease Control 11 . 

FORHOLDSREGLER 

• Det forventes, at god laboratoriepraksis overholdes, og at alle 

procedurer ved brug af Manual Method vil blive nøje overholdt. 

• Alle reagenser er stabile indtil den angivne udløbsdato, hvis de 

anbefalede opbevaringsbetingelser følges og opretholdes. 

• Mikrobiel kontaminering af reagenser kan give ukorrekte 

resultater. 

• Substitution af andre end SUREPATH ® PreCoat-objektglas kan 

resultere i mindre end optimale resultater. 

• Undgå plasken eller generering af aerosoler. Anvend passende 

hånd-, øjen- og beklædningsbeskyttelse. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (konserveringsvæske) er 

baktericidt og er blevet testet overfor: Escherichia coli, 


albicans, Mycobacterium tubculosis og Aspergillus niger. 

Universelle forsigtighedsregler for sikker håndtering af 

biologiske væsker skal imidlertid altid overholdes. 

VALGFRI UDTAGNING AF ALIQUOT 

Der er en tilstrækkelig mængde i SurePath ® Preservative Fluid 

Collection Vial (opsamlingshætteglas til konserveringsvæske) til, at 

man kan udtage op til 0,5 mL homogen blanding af celler og væske 

til ekstra test inden udførelse af SurePath ® -PapTesten og stadig have 

en tilstrækkelig mængde tilbage til være i stand til at foretage en 

PapTest. 

Der er ingen beviser for, at udtagning af en aliquot fra SurePath ® 

Preservative Fluid Collection Vial (opsamlingshætteglas til 

konserveringsvæske) påvirker kvaliteten af prøven til cytologisk test, 

men der kan i sjældne tilfælde forekomme fejlallokering af vigtigt 

diagnostisk materiale i forbindelse med denne proces. 

Sundhedspersonalet kan være nødt til at tage en ny prøve, hvis 

resultaterne ikke korrelerer med patientens kliniske baggrund. 

Derudover omfatter cytologi andre kliniske områder end test for 

seksuelt overførte sygdomme, hvilket betyder, at aliquotudtagning 

ikke nødvendigvis er velegnet i forbindelse med alle kliniske 

situationer. Om nødvendigt kan der udtages en separat prøve til test 

for seksuelt overførte sygdomme i stedet for at udtage en aliquot fra 

SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial (opsamlingshætteglas til 

konserveringsvæske). 

Udtagning af aliquoter fra prøver med lav celleholdighed kan betyde, at 

der er for lidt materiale i SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial til 

klargøring af en tilfredsstillende SurePath ® -PapTest. 

Aliquot skal udtages, inden SUREPATH ® -PapTesten behandles. Der 

må kun udtages én aliquot fra SUREPATH ® Preservative Fluid 

Collection Vial (opsamlingshætteglas til konserveringsvæske), inden 

PapTest-processen udføres, uanset hvor stor en mængde aliquoten 

indeholder. 

779-07083-00 Rev G Dansk Page 19

Procedure 

1. For at sikre en homogen blanding skal SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial (opsamlingshætteglas til 

konserveringsvæske) omrystes i 10-20 sekunder, og aliquoten 

på 0,5 mL skal udtages inden for ét minut efter omrystningen. 

2. Til udtagningen af aliquoten skal der anvendes en 

polypropylenpipettespids med aerosolfilter, som har en 

passende størrelse i forhold til den mængde, der skal udtages. 

Bemærk: Der må ikke anvendes serologiske pipetter. God 

laboratoriepraksis skal følges for at forhindre, at der indføres 

forurenende stoffer i SUREPATH ® Preservative Fluid Collection 

Vial (opsamlingshætteglas til konserveringsvæske) eller i 

aliquoten. Udtagning af aliquoten skal udføres på et passende 

sted uden for et område, hvor der udføres amplifikation. 

3. Undersøg aliquotmaterialet visuelt i pipetten for tegn på store 

partikler eller halvfaste stoffer. Hvis der findes tegn på sådanne 

materialer under udtagning af aliquoten, bør alt materialet 

returneres til prøvehætteglasset, og prøven diskvalificeres til 

ekstra test inden udførelsen af PapTest. 

4. Oplysninger om behandling af aliquoten ved hjælp af BD 

ProbeTec CT Q x og GC Q x amplificeret DNA-analyse findes 

på indlægssedlerne fra producenten af analysen. 

NØDVENDIGE MATERIALER 

Vedlagte materialer 


(opsamlingshætteglas til konserveringsvæske) 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (densitetsreagens) 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers (bundfældningskamre) 

• SUREPATH ® PreCoat-objektglas 

• Centrifugeglas 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (sprøjtepipetter) 

• Sugespidser 

Nødvendige materialer, der ikke er vedlagt 


• Objektglasstativer 

• Easy Aspirator (ekstraudstyr) 

• Behandlingsbakke (ekstraudstyr) 

• Børstelignende prøvetagningsanordning eller endocervikal 

børste/plastspatel med aftageligt hoved. 

• Vortex Mixer 

• Præcisionspipetter med engangsspidser 

• Deioniseret vand (pH 7,5 til 8,5) 

• Isopropanol og alkohol af reagenstype 

• Farvningsreagenser 

• Rensemiddel, monteringsmedia, dækglas 

OPBEVARING 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (konserveringsvæske) uden 

cytologiske prøver kan opbevares ved stuetemperatur (15 °C til 

30 °C) i op til 36 måneder fra fremstillingsdatoen. 

• Opbevaringsgrænsen for SUREPATH ® Preservative Fluid 

(konserveringsvæske) med cytologiske prøver er 6 måneder ved 

køleskabstemperatur (2 °C til 10 °C) eller 4 uger ved 

stuetemperatur (15 °C til 30 °C). 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (konserveringsvæske) 

indeholdende cytologiske prøver, der er beregnet til brug med 

BD ProbeTec CT Q x og GC Q x amplificeret DNA-analyser, 

kan opbevares og transporteres i op til 30 dage ved 2 °C – 30 °C, 

inden de overføres til fortyndingsglassene til væskebaserede 

cytologiske prøve (LBC) til BD ProbeTec Q x amplificeret 

DNA-analyser. 

PROCEDURER 

1. Efter at prøven er taget ved anvendelse af en Rovers 

Cervex-Brush ® eller tilsvarende prøvetagningsanordning, 

skylles børstehovedet direkte ned i væsken, fjernes fra 

håndtaget og anbringes i et SUREPATH ® Preservative Fluid 

Collection Vial (opsamlingshætteglas til konserveringsvæske). 

Der sættes låg og etiket på hætteglasset, hvorefter det sendes til 

laboratoriet. 

2. Når hætteglas med prøver har fået adgang til laboratoriet, 

anbringes hvert hætteglas i behandlingsbakken med et 

centrifugeglas med etiket, der på forhånd er fyldt med 4 ml 

PREPSTAIN ® Density Reagent (densitetsreagens) og et 

SUREPATH ® PreCoat-objektglas med etiket. PREPSTAIN ® 

Density Reagent (densitetsreagens) skal tilsættes glasset, inden 

prøven bliver tilsat, ellers forringes ydeevnen. 

3. Hvert prøveglas vortexes kraftigt i 10-20 sekunder. 

(Der er en tilstrækkelig mængde i SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial (opsamlingshætteglas til 

konserveringsvæske) til, at man kan udtage op til 0,5 mL 

homogen blanding af celler og væske til ekstra test og stadig 

være i stand til at foretage en PapTest. Udtagningen af 

aliquoten kan foretages efter dette omrystningstrin i 

SUREPATH ® LBC-testprocessen). 

• Anvend PREPMATE Automated Accessory og 

PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (sprøjtepipetter) til at 

overføre prøven. Se PREPMATE-brugervejledningen for 

at få instruktioner. eller 

• Fjern hætten på hætteglasset. Hold et SUREPATH ® 

Preservative Vial (konserverende hætteglas) i den ene 

hånd, og skub forsigtigt en PREPSTAIN ® Syringing Pipette 

(sprøjtepipette) ind i hætteglasset, indtil det stopper, idet 

enden af PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (sprøjtepipetter) 

skal pege væk fra ansigtet. Invertér samlingen af hætteglas 

og PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (sprøjtepipetter) i de 

dertil nummererede PREPSTAIN ® Density Reagent-glas 

(densitetsreagensglas). Lad hele prøveopløsningen løbe ud 

af PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (sprøjtepipetter), inden 

der fortsættes. eller 

• Fjern hætten på hætteglasset. Hæld langsomt cirka 8 mL 

af prøven på PREPSTAIN ® Density Reagent 

(densitetsreagens). 

4. Anbring glassene i centrifugestativerne i henhold til 

diagrammet for placeringssekvensen i procedurevejledningen 

(hvert glasstativ har en kapacitet på 12 glas). 

Placeringssekvensen er afgørende og skal være afbalanceret. 

5. Centrifugeglassene afbalanceres om nødvendigt ved tilsætning af 

konserveringsvæske. Centrifuger prøverne i 2 minutter ved 200 

x g. 

6. Hvis Easy Aspirator anvendes, tændes der for Easy Aspiratorsystemet, 

og trykket justeres til 9 ± 2 i Hg. Anbring rene spidser 

på Easy Aspirator-aspiratoren. 

7. Fjern stativerne med centrifugeglas fra centrifugen. Sænk 

langsomt Easy Aspirator-spidserne (eller engangspipetterne) 

ned i centrifugeglassene for at aspirere supernatant. 

Aspirationsanordningen skal berøre toppen af glassene, når du 

er færdig. Skyl aspiratorspidserne med vand mellem prøver. 

8. Centrifuger glassene i 10 minutter ved 800 x g for at koncentrere den 

diagnostiske komponent til en lille cellekugle i bunden af 

glasset. 

9. Fjern glasstativet fra centrifugen. Dekanter forsigtigt og hurtigt 

ned i vasken. Mens stativet holdes omvendt, aftrykkes glassene 

omhyggeligt på absorberende papir, idet du sikrer dig, at den 

lille cellekugle bliver i glasset. 

10. Et SUREPATH ® PreCoat-objektglas etiketteres med hvert 

prøvenummer, idet man passer på ikke at berøre overfladen på 

SUREPATH ® PreCoat-objektglasset. Anbring objektglassene i 

holderen og lås et PREPSTAIN ® Settling Chamber 

(bundfældningskammer) på hvert objektglas. Positionen af 

hvert nummereret SUREPATH ® PreCoat-objektglas på pladen 

skal passe sammen med positionen af det tilsvarende 

centrifugeglas. 

11. Tilsæt 4 mL deioniseret vand (pH 7,5-8,0) til hvert prøveglas, 

og bland grundigt ved hjælp af vortexing. 

12. Arbejd med ét prøveglas ad gangen, vortex glasset og overfør 

med det samme 800 µl cellesuspension til det tilsvarende 

nummererede PREPSTAIN ® Settling Chamber 

(bundfældningskammer)/SUREPATH ® PreCoat-objektglas. Dette 

gentages for hver prøve. 

13. Vent i 10 minutter, for at der kan ske fuld sedimentering. Efter 

sedimentering vendes objektglaspladen(erne) over vasken for at 

dekantere den resterende væske. Aftryk overskydende væske på 

absorberende papir. 

14. Skyl hvert PREPSTAIN ® Settling Chamber (bundfældningsglas) 

med 500 µl denatureret ethanol, og dekantér. Gentag 

alkoholskylningen, dekantér den tilbageblevne væske, og aftryk 

overskydende væske på absorberende papir, idet de forbliver 

omvendte i mindst 1 minut. 

15. Fjern PREPSTAIN ® Settling Chamber (bundfældningskammer). 

16. Farv og kom dækglas på SUREPATH ® -objektglassene. 

RESULTATER OG FORTOLKNING 

• Alle diagnostiske kriterier, der for øjeblikket anvendes på 

cytologiske laboratorier til konventionelle Pap smears, er 

gældende for TRIPATH Imaging ® , Inc. væskebaserede 

præparationer. 

• Alle unormale eller tvivlsomme screeningsobservationer bør 

henvises til en patolog til gennemsyn og diagnose. Enhver 

ændring i cellulær morfologi er signifikant og bør noteres. 


BIBLIOGRAFI 





202-204. 



J Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 



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MÉTODO MANUAL 

Um processo de preparação de células para aplicações 

ginecológicas 

REF 490529 REF 490635 

UTILIZAÇÃO PRETENDIDA 

Para Utilização em Diagnóstico In Vitro 

O Manual Method é um método para produzir preparações de células 

em base líquida (LBPs). Este método vem substituir o método de 

preparação de esfregaço convencional utilizado no rastreio do cancro 

do colo do útero. 

O SUREPATH ® Preservative Fluid (Fluido Conservante) constitui um 

meio de colheita e transporte adequado a amostras ginecológicas 

testadas com Testes de ADN Amplificados BD ProbeTec Chlamydia 

trachomatis (CT) Q x e Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x . Consulte os 

folhetos informáticos dos testes para obter instruções sobre a utilização 

do SUREPATH ® Preservative Fluid na preparação de amostras para 

utilização com estes testes. 

RESUMO E EXPLICAÇÃO 

O rastreio citológico do colo do útero através do método de 

Papanicolaou consiste na análise microscópica de amostras de células 

retiradas principalmente das regiões ectocervical e endocervical, e 

com as quais se efectuou um esfregaço em lâmina de vidro com 

posterior coloração de Papanicolaou. 1,2,3 O rastreio citológico do colo 

do útero permitiu reduzir 50 a 70 porcento as taxas de mortalidade 

devido a carcinoma cervical invasivo. 4 Uma vez que a citologia cervical 

constitui um exame de rastreio, quaisquer resultados anormais devem 

ser confirmados histologicamente. 

A colheita e a preparação das amostras são de extrema importância 

para a qualidade dos esfregaços citológicos. A amostragem aleatória 

ou a sub-amostragem uniforme é essencial para uma exactidão máxima. A 

técnica de esfregaço citológico convencional não permite a 

homogeneização da amostra antes da preparação das lâminas. As 

células transferidas para a lâmina podem não ser representativas da 

população total colhida, pois muitas células ficam “presas” no muco 

no dispositivo amostragem. As células são transferidas para a lâmina em 

relação ao local onde se encontram no dispositivo de amostragem. 

Muitas células ficam no dispositivo. 5 

A falta de homogeneidade de uma amostra cervical típica pode 

dificultar a preparação, leitura e interpretação dos esfregaços 

convencionais. Grandes áreas da lâmina convencional estão 

frequentemente cobertas por detritos, células inflamatórias e camadas 

de células epiteliais que podem ocultar material de diagnóstico valioso. 

Além disso, se o esfregaço não for imediatamente fixado após a 

preparação, a morfologia celular pode ficar distorcida à medida que a 

lâmina vai secando (artefacto da secagem ao ar). 

O Manual Method é um método que permite converter uma 

suspensão líquida de uma amostra cervical numa lâmina SUREPATH ® 

homogénea com uma coloração consistente, que preserva os 

agrupamentos celulares para diagnóstico. 6,7,8,9 O processo inclui a 

conservação das células, amostragem aleatória, enriquecimento do 

material de diagnóstico, pipetagem e sedimentação para a criação de uma 

preparação celular. O resultado deste procedimento é uma lâmina 

SUREPATH ® , para utilização no rastreio citológico de rotina e 

classificação por categorias, 

de acordo com a classificação do sistema Bethesda. 10 

PRINCÍPIOS DO PROCEDIMENTO 

O Manual Method é um procedimento para a preparação de células 

cervicais em base líquida (LBPs). As amostras ginecológicas são 

recolhidas por pessoal médico qualificado utilizando dispositivos tipo 

escova (por ex., Cervex-Brush ® ) ou uma combinação de dispositivos 

de espátula plástica e escovas endocervicais (por ex., Cytobrush ® Plus 

GT e espátula Pap-Perfect ® , MedScand (USA), Inc.) com cabeças 

amovíveis. A cabeça da escova é destacada e colocada num frasco de 

SUREPATH ® Preservative Fluid (Fluido Conservante). O frasco é 

tapado, etiquetado e enviado com os documentos necessários para 

processamento no laboratório. 

No laboratório, a amostra preservada é homogeneizada por meio de 

vórtex e depois transferida para um tubo contendo PREPSTAIN ® 

Density Reagent (Reagente de Densidade). Um passo de enriquecimento 

celular, que consiste na sedimentação centrífuga através do reagente 

PREPSTAIN ® Density Reagent (Reagente de Densidade), remove 

parcialmente da amostra os resíduos sem valor diagnóstico e as 

células inflamatórias em excesso. Após a centrifugação, o tubo que 

contém o componente celular enriquecido é reconstituído com água 

desionizada e o material celular é novamente colocado em suspensão 

com um pipetador, empregando uma sequência de aspiração/distribuição. 

A amostra é então transferida para uma câmara de incubação 

PREPSTAIN ® Settling Chamber (Câmara de Incubação) montada sobre 

uma lâmina previamente revestida SUREPATH ® PreCoat (Previamente 

Revestida). A sedimentação por gravidade ocorre durante um curto 

período de incubação. O material em excesso é decantado. A lâmina 

BD SurePath ® PreCoat (Previamente Revestida) é corada, limpa e 

protegida com uma lamela, ficando as células dispostas num círculo 

de 13 mm de diâmetro. A lâmina SUREPATH ® Slide é examinada por 

técnicos de citologia e patologistas experientes e analisada juntamente 

com outras informações relevantes da paciente. 

LIMITAÇÕES 

• As amostras ginecológicas para preparação utilizando o Manual 

Method devem ser colhidas utilizando um dispositivo tipo 

escova de acordo com o procedimento de colheita normal 

indicado pelo fabricante. 

• A produção e avaliação das preparações de base líquida 

TRIPATH Imaging ® , Inc devem ser realizadas apenas por 

pessoal com formação ministrada pela TriPath ou por outros 

agentes autorizados pela TriPath a dar essa formação. 

• O correcto funcionamento do dispositivo requer a utilização 

exclusiva de material fornecido pela TRIPATH Imaging ® , Inc, ou 

recomendado pela TRIPATH Imaging ® , Inc. O material utilizado 

deve ser correctamente descartado em conformidade com as 

regulamentações institucionais e governamentais. 

• Todo o material se destina a uma única utilização e não pode 

ser reutilizado. 

• Um volume de 8,0 ± 0,5 mL da amostra recolhida no SurePath ® 

Preservative Fluid Collection Vial (Frasco de Colheita de 

Fluidos Conservantes) é necessário para o processamento do 

teste SUREPATH ® LBC. 

ADVERTÊNCIAS 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (Fluido Conservante) contém 

uma solução diluída de etanol desnaturado e não se destina ao 

consumo humano. A mistura contém pequenas quantidades de 

metanol e isopropanol que pode ser prejudicial e causar 

cegueira quando ingerido. 

• O reagente PREPSTAIN ® Density Reagent (Reagente de Densidade) 

contém azida de sódio. A azida de sódio pode reagir com as 

canalizações de chumbo ou de cobre, formando azidas metálicas 

altamente explosivas. Ao eliminar o produto, adicionar água 

abundante para evitar a acumulação de azidas. Para obter mais 

informações, consulte o Manual Guide publicado pelos Centers 

for Disease Control 11 . 

PRECAUÇÕES 

• Devem ser adoptadas boas práticas laboratoriais e todos os 

procedimentos para utilização do Manual Method devem ser 

rigorosamente respeitados. 

• Todos os reagentes permanecem estáveis até aos prazos de 

validade indicados, desde que as condições de armazenamento 

recomendadas sejam respeitadas e mantidas. 

• A contaminação microbiana dos reagentes pode dar origem a 

resultados falseados. 

• A substituição por outras lâminas que não as lâminas SUREPATH ® 

PreCoat (Previamente Revestida) pode reduzir a qualidade dos 

resultados. 

• Evite salpicar ou gerar aerossóis. Utilizar equipamento protector 

adequado para as mãos, olhos e vestuário. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (Fluido Conservante) é bactericida e 

foi testada para verificar a existência de: Escherichia coli, 


albicans, Mycobacterium tubculosis, and Aspergillus niger. 

Contudo, devem ser sempre adoptadas precauções universais 

para o manuseamento seguro de fluidos biológicos. 

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REMOÇÃO OPCIONAL DE ALÍQUOTAS 

O frasco de colheita SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial 

(Frasco de Colheita de Fluidos Conservantes) dispõe de um volume 

suficiente para permitir a remoção de até 0,5 mL de mistura homogénea de 

células e fluidos para testes auxiliares, que antecedem o teste Pap 

SUREPATH ® Pap Test, ao mesmo tempo que o volume restante é 

suficiente para a execução do teste Pap. 

Não havendo evidência de que a remoção de uma alíquota a partir do 

SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial (Frasco de Colheita de 

Fluidos Conservantes) afecta a qualidade da amostra para o teste 

citológico, poderão ocorrer raros casos de atribuição incorrecta de 

material de diagnóstico pertinente durante o processo. Os prestadores de 

cuidados de saúde poderão ter de adquirir uma nova amostra se os 

resultados não estiverem correlacionados com a história clínica do 

paciente. Além disso, a citologia aborda diferentes questões clínicas 

diferentes dos testes a doenças sexualmente transmitidas (DST); 

assim, a remoção da alíquota pode não ser adequada a todas as 

situações clínicas. Se necessário, deve ser recolhida uma amostra 

separada para testes de DST em vez de retirar uma alíquota do 

SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial (Frasco de Colheita de 

Fluidos Conservantes). 

A remoção da alíquota de amostras de baixa celularidade poderá 

deixar material insuficiente no SurePath ® Preservative Fluid 

Collection Vial (Frasco de Colheita de Fluidos Conservantes) para 

preparação de um teste Pap SurePath ® satisfatório. 

A alíquota deve ser removida antes de processar o teste Pap 

SurePath ® . Apenas uma alíquota pode ser removida do SurePath ® 

Preservative Fluid Collection Vial (Frasco de Colheita de Fluidos 

Conservantes) antes de executar o teste Pap, independentemente do 

volume da alíquota. 

Procedimento 

1. Para garantir uma mistura homogénea, o SurePath ® Preservative 

Fluid Collection Vial (Frasco de Colheita de Fluidos 

Conservantes) deve ser misturado por meio de vórtex durante 

10-20 segundos e a alíquota de 0,5 mL deve ser removida no 

máximo um minuto depois de ser misturada no vórtex. 

2. Uma ponta de pipeta com barreira para aerossóis em polipropileno 

com o tamanho correcto para o volume que está a ser retirado 

deve ser utilizada para a remoção da alíquota. Nota: Não devem 

ser utilizadas pipetas serológicas. As boas práticas laboratoriais 

devem ser seguidas para evitar a introdução de contaminantes 

no frasco de colheita SurePath ® Preservative Fluid collection vial 

(Frasco de Colheita de Fluidos Conservantes) ou na alíquota. A 

remoção da alíquota devem ser executadas numa localização 

adequada fora de uma área em que a amplificação é executada. 

3. Verificar visualmente o material da alíquota na pipeta se 

existem partículas ou semi-sólidas de grandes dimensões. 

A evidência deste material encontrado durante a remoção do 

material da alíquota deve implicar a devolução de todo o 

material para o frasco da amostra e desqualificar a amostra para 

testes auxiliares antes de executar o teste Pap. 

4. Para obter instruções sobre o processamento da alíquota 

utilizando os Testes de ADN Amplificado BD ProbeTec CT 

Q x e GC Q x Amplified DNA Assays, consulte os Folhetos 

Informativos dos testes fornecidos pelo fabricante. 

MATERIAIS NECESSÁRIOS 

Material Fornecido 

• Frasco de colheita SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial 

• Reagente PREPSTAIN ® Density Reagent (Reagente de 

Densidade) 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers (Câmaras de Incubação) 

• Lâminas SUREPATH ® PreCoat (Previamente Revestidas) 

• Tubos de Centrifugação 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (Pipetas com Efeito de Seringa) 

• Pontas de Aspiração 

Material Necessário Mas Não Fornecido 

• Centrífuga 

• Suportes de lâminas 

• Aspirador Easy Aspirator (opcional) 

• Tabuleiro de processamento (opcional) 

• Dispositivo de amostragem do tipo escova ou escova/espátula 

plástica endocervical com cabeça(s) amovível(eis) 

• Agitador vórtex 

• Pipetas de precisão com pontas descartáveis 

• Água desionizada (pH 7,5 a 8,5) 

• Isopropanol e álcool com grau adequado para reagente 

• Reagentes de coloração 

• Agente de limpeza, meio de montagem, lamelas 

CONSERVAÇÃO 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (Fluido Conservante) sem 

amostras citológicas pode ser conservado à temperatura 

ambiente (15 °C a 30 °C) até 36 meses, a contar da data de 

fabrico. 

• O limite de conservação do SUREPATH ® Preservative Fluid 

(Fluido Conservante) com amostras citológicas é de 6 meses 

refrigerado (2 °C a 10 °C) ou 4 semanas à temperatura 

ambiente (15 °C a 30 °C). 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (Fluido Conservante) que 

contém uma amostra citológica destinada a utilização com os 

Testes de ADN Amplificado BD ProbeTec CT Q x e GC Q x 

Amplified DNA Assays podem ser conservados e transportados 

durante um máximo de 30 dias a temperaturas entre 2° 

– 30° C antes de serem transferidas para os Tubos de Diluição 

de Amostras Citológicas de Base Líquida (LBC) para os testes 

de ADN BD ProbeTec Q x Amplified DNA Assays. 

PROCEDIMENTOS 

1. Uma vez colhida a amostra utilizando uma Rovers 

Cervex-Brush ® ou um dispositivo de amostragem equivalente, a 

cabeça da escova é lavada directamente no fluido, retirada do 

cabo e deitada num frasco de conservante SUREPATH ® 

Preservative Fluid vial (Frasco de Fluido Conservante). Em 

seguida, o frasco é fechado, etiquetado e enviado para o laboratório. 

2. Quando os frascos com amostra derem entrada no laboratório, 

coloque cada um deles no tabuleiro de processamento com um 

tubo de centrifugação etiquetado previamente cheio com 4 ml de 

PREPSTAIN ® Density Reagent (Reagente de Densidade) e uma 

lâmina etiquetada SUREPATH ® PreCoat (Previamente 

Revestida). O reagente PREPSTAIN ® Density Reagent (Reagente 

de Densidade) deve ser adicionado ao tubo antes de adicionar a 

amostra, sob pena de reduzir o desempenho da técnica. 

3. Cada um dos frascos deve ser vigorosamente agitado num vórtex 

durante 10 a 20 segundos. 

(O frasco de colheita SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial 

(Frasco de Colheita de Fluidos Conservantes) dispõe de um 

volume suficiente para permitir a remoção de até 0,5 mL de 

mistura homogénea de células e fluidos para testes auxiliares, ao 

mesmo tempo que o volume restante é suficiente para a execução do 

teste Pap. A remoção de alíquotas pode ser executada após a 

passagem pelo vórtex no processo do teste SUREPATH ® LBC.) 

• Utilize o acessório PREPMATE Automated Accessory 

(Acessório Automatizado) e as pipetas PREPSTAIN ® 

Syringing Pipettes (Pipetas com Efeito de Seringa) para 

transferir a amostra. Para instruções, consulte o PREPMATE 

Operators Manual (Manual de Instruções). Ou 

• Retire a tampa do frasco. Segure num frasco de 

SUREPATH ® Preservative Vial com uma das mãos, 

introduza cuidadosamente as pipetas PREPSTAIN ® 

Syringing Pipettes (Pipetas com Efeito de Seringa) no 

frasco até parar, apontando a extremidade das PREPSTAIN ® 

Syringing Pipettes (Pipetas com Efeito de Seringa) na 

direcção contrária à sua cara. Inverta o conjunto 

frasco/PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (Pipetas com 

Efeito de Seringa) para dentro do tubo de PREPSTAIN ® 

Density Reagent (Reagente de Densidade) devidamente 

numerado. Deixe escoar completamente toda a solução de 

amostra das PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (Pipetas com 

Efeito de Seringa) antes de prosseguir. Ou 

• Retire a tampa do frasco. Deite lentamente cerca de 8 ml 

de amostra sobre o PREPSTAIN ® Density Reagent 

(Reagente de Densidade). 

4. Coloque os tubos nos suportes da centrífuga de acordo com o 

diagrama da sequência de colocação no Manual de Procedimento 

(cada suporte para tubos tem capacidade para 12 tubos). A 

sequência de colocação é essencial e tem de ser equilibrada. 

5. Equilibre os tubos de centrifugação acrescentando Preservative 

Fluid se for necessário, e centrifugue as amostras durante 

2 minutos a 200 x g. 

6. Se o Easy Aspirator for utilizado, ligue este sistema e regule a 

pressão para 9 ± 2 em Hg. Coloque pontas limpas no aspirador 

Easy Aspirator. 

7. Retire os suportes dos tubos de centrifugação da centrífuga. 

Desça lentamente as pontas do Easy Aspirator (ou pipetas de 

transferência descartáveis) para dentro dos tubos de centrifugação 

para aspirar o sobrenadante. O dispositivo de aspiração deve 

tocar no topo dos tubos quando acabar. Passe por água as 

Pontas do aspirador entre amostras. 

8. Centrifugue os tubos durante 10 minutos a 800 x g de modo a 

concentrar o componente de diagnóstico num aglomerado de 

células no fundo do tubo. 


9. Retire o suporte de tubos da centrífuga. Decante de forma 

rápida e cuidadosa para o lavatório. Mantenha o suporte 

invertido, empape os tubos cuidadosamente com papel 

absorvente, certificando-se de que o aglomerado de células se 

mantém no tubo. 

10. Rotule uma lâmina SUREPATH ® PreCoat (Previamente Revestida) 

com o número da amostra, tendo o cuidado de não tocar na 

superfície da mesma. Coloque as lâminas no Suporte de 

Lâminas e prenda uma câmara PREPSTAIN ® Settling Chamber 

(Câmara de Incubação) a cada lâmina. A posição de cada 

lâmina SUREPATH ® PreCoat (Previamente Revestida) numerada 

na bandeja deve corresponder à posição do tubo de centrifugação 

correspondente. 

11. Adicione 4 ml de água desionizada (pH 7,5-8,0) a cada tubo de 

amostra e misture bem utilizando para isso um vórtex. 

12. Trabalhando com um tubo de amostra de cada vez, coloque o 

tubo em vórtex e transfira imediatamente 800 µl de suspensão 

celular para a câmara PREPSTAIN ® Settling Chamber (Câmara 

de Incubação)/lâmina SUREPATH ® PreCoat (Previamente 

Revestida) com a numeração correspondente. Repita o 

procedimento para cada uma das amostras. 

13. Deixe passar 10 minutos para permitir a sedimentação completa. 

Após a sedimentação, inverta cuidadosamente a(s) bandeja(s) 

de lâminas sobre o lavatório para decantar o fluido remanescente e 

empape o líquido em excesso com papel absorvente. 

14. Lave cada uma das câmaras PREPSTAIN ® Settling Chamber 

(Câmara de Incubação) com 500 µl de etanol desnaturado e 

decante. Repita a lavagem com álcool, decante o fluido 

remanescente e empape o líquido em excesso com papel 

absorvente, mantendo-as invertidas durante pelo menos um 

minuto. 

15. Retire as câmaras de incubação PREPSTAIN ® Settling Chamber 

(Câmara de Incubação). 

16. Proceda à coloração das lâminas SUREPATH ® Slides. 

RESULTADOS E INTERPRETAÇÃO 

• Todos os critérios de diagnóstico actualmente utilizados nos 

laboratórios de citologia para os esfregaços citológicos 

convencionais se aplicam às preparações de base líquida 

TRIPATH Imaging ® , Inc. 

• Quaisquer observações de rastreio anómalas ou questionáveis 

devem ser comunicadas a um patologista para análise e 

diagnóstico. Quaisquer alterações morfológicas celulares são 

significativas e devem ser anotadas. 

BIBLIOGRAFIA 





202-204. 



Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 


A Triumph and a Tragedy. J Am Med Assoc 1989; 261: 737-743. 





215-219. 




Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 







9. Grohs HK, Zahniser DJ, Geyer JW: Standardization of Specimen 

Preparation Through Mono/Thin-Layer Technology in Automated 

Cervical Cancer Screening. Edited by HK Grohs, OAN Husain. 

New York, Igaku-shoin, 1994, pp 176-185. 





Salts, Center for Disease Control, Atlanta, Georgia, April 30, 1976. 


USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

Telephone: +32 (0)53 720 673 

Fax: +32 (0)53 720 678 




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Registro ANVISA nº 10033430534 

Centro de Relacionamento com o Cliente: 0800 0555654 


ΧΕΙΡΟΚΙΝΗΤΗ ΜΕΘΟ∆ΟΣ 

Μια διαδικασία κυτταρικών παρασκευασµάτων για 

γυναικολογική εφαρµογή 

REF 490529 REF 490635 

ΧΡΗΣΗ ΓΙΑ ΤΗΝ ΟΠΟΙΑ ΠΡΟΟΡΙΖΟΝΤΑΙ 

Για in vitro διαγνωστική χρήση 

Η χειροκίνητη µέθοδος αποτελεί µια µέθοδο παραγωγής κυτταρικών 

παρασκευασµάτων µε υγρή βάση (LBP). 

Η χειροκίνητη µέθοδος προορίζεται για αντικατάσταση της 

παραδοσιακής µεθόδου προετοιµασίας επιχρίσµατος Παπανικολάου 

για χρήση στην προληπτική εξέταση για καρκίνο του τραχήλου της 

µήτρας. 

Το SUREPATH ® Preservative Fluid (Υγρό συντήρησης) είναι ένα 

κατάλληλο µέσο συλλογής και µεταφοράς για γυναικολογικά 

δείγµατα που ελέγχονται µε τις δοκιµασίες ενισχυµένου DNA BD 

ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q x και Neisseria 

gonorrhoeae (GC) Q x . Ανατρέξτε στα ένθετα της συσκευασίας της 

δοκιµασίας για οδηγίες σχετικά µε τη χρήση του SUREPATH ® 

Preservative Fluid (Υγρό συντήρησης) για την προετοιµασία 

δειγµάτων που θα χρησιµοποιηθούν µε αυτές τις δοκιµασίες. 

ΠΕΡΙΛΗΨΗ ΚΑΙ ΕΠΕΞΗΓΗΣΗ 

Η κυτταρολογική εξέταση του τραχήλου της µήτρας µε τη µέθοδο 

Παπανικολάου (τεστ ΠΑΠ) περιλαµβάνει τη µικροσκοπική εξέταση 

δειγµάτων από κυτταρικό υλικό που έχει ληφθεί κυρίως από τον 

έξω- και ενδο-τράχηλο, έχει επιστρωθεί σε γυάλινες 

αντικειµενοφόρους πλάκες και έχει υποστεί χρώση µε τη διαδικασία 

κατά Παπανικολάου. 1,2,3 Ο µαζικός προσυµπτωµατικός έλεγχος για 

το καρκίνο του τραχήλου της µήτρας µε το επίχρισµα Παπανικολάου, 

έχει µειώσει τα ποσοστά θνησιµότητας των διηθητικών καρκινωµάτων 

του τραχήλου κατά 50 ως 70%. 4 Καθώς η κυτταρολογική εξέταση 

του τραχήλου αποτελεί µορφή προσυµπτωµατικού ελέγχου, τα µη 

φυσιολογικά ευρήµατα θα πρέπει να επιβεβαιώνονται ιστολογικά. 

Η συλλογή και η προετοιµασία δειγµάτων είναι εξαιρετικά 

σηµαντικές για την διαγνωστική ακρίβεια στα επιχρίσµατα 

Παπανικολάου. Για πλήρη διαγνωστική ακρίβεια, είναι απαραίτητη η 

τυχαιοποίηση ή η οµοιοµορφία στην υπο-δειγµατοληψία του υλικού. Η 

παραδοσιακή τεχνική επιχρίσµατος Παπανικολάου δεν επιτρέπει την 

ανάµειξη του δείγµατος πριν την προετοιµασία της 

αντικειµενοφόρου πλάκας. Λόγω της ανάµειξης των κυττάρων µε 

βλέννα πάνω στη συσκευή δειγµατοληψίας, τα κύτταρα που 

ουσιαστικά µεταφέρονται στην αντικειµενοφόρο πλάκα ενδέχεται να 

µην είναι αντιπροσωπευτικά για το σύνολο του κυτταρικού 

πληθυσµού που συλλέχθηκε. Η θέση επί της αντικειµενοφόρου 

πλάκας όπου µεταφέρονται τα κύτταρα είναι ανάλογη της θέσης που 

έτυχε να βρίσκονται επί της συσκευής δειγµατοληψίας. 

Πολλά κύτταρα παραµένουν στη συσκευή. 5 

Η ανοµοιογένεια του συνήθους τραχηλικού δείγµατος µπορεί να 

καταστήσει δύσκολη την προετοιµασία και την ανάλυση των 

παραδοσιακών επιχρισµάτων, καθώς και την ερµηνεία των 

αποτελεσµάτων της εξέτασης. Μεγάλες περιοχές της παραδοσιακής 

αντικειµενοφόρου πλάκας συχνά καλύπτονται από υπολείµµατα, 

φλεγµονώδη κύτταρα και επιθηλιακά φύλλα, που µπορούν να 

αποκρύψουν πολύτιµο διαγνωστικό υλικό. Επιπλέον, αν το επίχρισµα 

δεν σταθεροποιηθεί αµέσως µετά την προετοιµασία, η κυτταρική 

µορφολογία ενδέχεται να παραµορφωθεί κατά την ξήρανση του 

επιχρίσµατος (τεχνούργηµα από ξήρανση στον αέρα). 

Η χειροκίνητη µέθοδος αποτελεί µέθοδο µετατροπής ενός υγρού 

εναιωρήµατος του τραχηλικού δείγµατος σε οµοιόµορφα 

χρωµατισµένη, οµοιογενή αντικειµενοφόρο πλάκα SUREPATH ® , 

ενώ διατηρεί τα διαγνωστικά κυτταρικά σµήνη. 6,7,8,9 Η διαδικασία 

περιλαµβάνει συντήρηση των κυττάρων, τυχαιοποίηση, εµπλουτισµό 

του διαγνωστικού υλικού, δειγµατοληψία µε πιπέτα και καθίζηση µε 

σκοπό τη δηµιουργία του κυτταρικού παρασκευάσµατος. Το 

αποτέλεσµα της διαδικασίας παρασκευής είναι η δηµιουργία µιας 

αντικειµενοφόρου πλάκας SUREPATH ® , η οποία προορίζεται για 

χρήση στο µαζικό προσυµπτωµατικό έλεγχο της κυτταρολογίας του 

τραχήλου και για κατηγοριοποίηση των αποτελεσµάτων, όπως 

ορίζεται από το Σύστηµα Bethesda. 10 

ΑΡΧΕΣ ΤΗΣ ∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΑΣ 

Η χειροκίνητη µέθοδος αποτελεί διαδικασία για την προετοιµασία 

LBP τραχηλικών κυττάρων. Η συλλογή των γυναικολογικών 

δειγµάτων γίνεται από εξειδικευµένο ιατρικό προσωπικό, µε τη 

χρήση συσκευών δειγµατοληψίας τύπου σκούπας (π.χ. 

Cervex Brush ® ) ή συνδυασµού πλαστικής σπάτουλας και συσκευών 

ενδοτραχηλικής ψήκτρας (π.χ. Cytobrush ® Plus GT και σπάτουλα 

Pap Perfect ® , MedScand (ΗΠΑ), Inc.) µε αποσπώµενες κεφαλές. 

Η κεφαλή της βούρτσας αφαιρείται από τη λαβή και τοποθετείται σε 

φιαλίδιο µε υγρό συντήρησης SUREPATH ® Preservative Fluid. 

Το φιαλίδιο πωµατίζεται, σηµαίνεται και αποστέλλεται µε τα 

κατάλληλα συνοδευτικά έγγραφα στο εργαστήριο για επεξεργασία. 

Στο εργαστήριο, το διατηρηµένο δείγµα αναµιγνύεται µε στροβιλισµό 

και µεταφέρεται σε δοκιµαστικό σωλήνα που περιέχει PREPSTAIN ® 

Density Reagent (Αντιδραστήριο πυκνότητας). Ένα βήµα 

εµπλουτισµού που συνίσταται από φυγοκεντρική καθίζηση µέσω του 

PREPSTAIN ® Density Reagent (Αντιδραστήριο πυκνότητας), αφαιρεί 

εν µέρει τα µη διαγνωστικά υπολείµµατα και την περίσσεια 

φλεγµονωδών κυττάρων από το δείγµα. Μετά τη φυγοκέντρηση, ο 

σωλήνας που περιέχει το εµπλουτισµένο κυτταρικό στοιχείο 

ανασυντίθεται µε απιονισµένο νερό και το κυτταρικό υλικό 

υφίσταται επαναιώρηση µε διαδοχή αναρρόφησης/αποβολής ή µε 

χρήση πιπέτας. Το υλικό του δείγµατος στη συνέχεια µεταφέρεται 

σε PREPSTAIN ® Settling Chamber (Θάλαµος καθίζησης) στερεωµένο 

σε SUREPATH ® PreCoat (Αντικειµενοφόρος πλάκα). Κατά τη 

διάρκεια σύντοµης επώασης προκύπτει καθίζηση λόγω βαρύτητας. 

Η περίσσεια του υλικού απορρίπτεται. Η πλάκα SUREPATH ® PreCoat 

(Αντικειµενοφόρος πλάκα) χρωµατίζεται, διαυγάζεται και 

καλύπτεται µε καλυπτρίδα, µε τα κύτταρα σε σχήµα κύκλου, 

διαµέτρου 13 mm. Η αντικειµενοφόρος πλάκα SUREPATH ® Slide 

εξετάζεται από εκπαιδευµένους κυτταροτεχνολόγους και 

παθολόγους σε συνδυασµό µε άλλες σχετικές πληροφορίες που 

αφορούν τον ασθενή. 

ΠΕΡΙΟΡΙΣΜΟΙ 

• Τα γυναικολογικά δείγµατα για προετοιµασία µε χρήση της 

χειροκίνητης µεθόδου πρέπει να συλλέγονται µε συσκευή 

τύπου βούρτσας σύµφωνα µε την τυπική διαδικασία συλλογής 

που περιγράφεται από τον κατασκευαστή. 

• Η παραγωγή και αξιολόγηση των υγρών παρασκευασµάτων 

της TRIPATH Imaging ® , Inc πρέπει να εκτελείται µόνο από 

προσωπικό που έχει εκπαιδευτεί από την TRIPATH ή από 

τρίτους που έχουν εξουσιοδοτηθεί από την TRIPATH να 

παρέχουν τέτοιου είδους εκπαίδευση. 

• Η σωστή απόδοση της συσκευής προϋποθέτει τη χρήση µόνο 

εκείνων των αναλώσιµων που υποστηρίζονται από την 

TRIPATH Imaging ® , Inc, ή που συνιστώνται από την 

TRIPATH Imaging ® , Inc. Τα αναλώσιµα που έχουν 

χρησιµοποιηθεί πρέπει να απορρίπτονται κατά τα δέοντα 

σύµφωνα µε τους θεσµικούς και κυβερνητικούς κανονισµούς. 

• Όλα τα υλικά είναι µόνο µίας χρήσης και δεν µπορούν να 

χρησιµοποιηθούν ξανά. 

• Για τη διαδικασία ελέγχου LBC SUREPATH ® απαιτείται όγκος 

8,0 ± 0,5 mL του δείγµατος που έχει συλλεχθεί στο 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (Φιαλίδιο 

συλλογής υγρού συντήρησης). 

ΠΡΟΕΙ∆ΟΠΟΙΗΣΕΙΣ 

• Το SUREPATH ® Preservative Fluid (Υγρό συντήρησης) περιέχει 

αραιωτικό διάλυµα µετουσιωµένης αιθανόλης και δεν προορίζεται 

για ανθρώπινη κατανάλωση. Το µίγµα περιέχει µικρές ποσότητες 

µεθανόλης και ισοπροπανόλης που ενδέχεται να είναι επιβλαβείς 

και να προκαλέσουν τύφλωση σε περίπτωση κατάποσης. 

• Το PREPSTAIN ® Density Reagent (Αντιδραστήριο πυκνότητας) 

περιέχει νατραζίδιο. Το νατραζίδιο ενδέχεται να αντιδρά µε 

µολύβδινες ή χάλκινες υδραυλικές εγκαταστάσεις και να 

σχηµατίζει πολύ εκρηκτικά µεταλλικά αζωτίδια. Κατά την 

απόρριψη, ξεπλύνετε µε µεγάλες ποσότητες νερού για να 

εµποδίσετε τη συσσώρευση αζωτιδίων. Για περισσότερες 

πληροφορίες, ανατρέξτε στο Manual Guide που εκδίδεται από 

τα Κέντρα Ελέγχου και Πρόληψης Ασθενειών 11 . 

ΠΡΟΦΥΛΑΞΕΙΣ 

• Εξυπακούεται ότι εφαρµόζονται οι ενδεδειγµένες εργαστηριακές 

πρακτικές και τηρούνται αυστηρά όλες οι διαδικασίες χρήσης 

της χειροκίνητης µεθόδου. 

• Όλα τα αντιδραστήρια παραµένουν σταθερά µέχρι την 

αναγραφόµενη ηµεροµηνία λήξης, υπό τον όρο ότι 

ακολουθούνται και διατηρούνται οι συνιστώµενες συνθήκες 

αποθήκευσης. 

• Η µικροβιακή µόλυνση των αντιδραστηρίων ενδέχεται να έχει 

ως αποτέλεσµα λανθασµένα αποτελέσµατα. 

• Η αντικατάσταση των πλακών SUREPATH ® PreCoat 

(Αντικειµενοφόροι πλάκες) µε άλλες ενδέχεται να οδηγήσει σε 

υποδεέστερα αποτελέσµατα από τα βέλτιστα. 

• Αποφεύγετε τους πλαταγισµούς ή τη δηµιουργία αερολυµάτων. 

Χρησιµοποιείτε την κατάλληλη προστασία για τα χέρια, τα 

µάτια και το ρουχισµό. 

• Το SUREPATH ® Preservative Fluid (Υγρό συντήρησης) είναι 

βακτηριοκτόνο και έχει δοκιµαστεί έναντι: Escherichia coli, 


albicans, Mycobacterium tubculosis, και Aspergillus niger. 

Ωστόσο, πρέπει να τηρούνται πάντα οι γενικές προφυλάξεις 

για τον ασφαλή χειρισµό βιολογικών υγρών. 

ΠΡΟΑΙΡΕΤΙΚΗ ΑΦΑΙΡΕΣΗ ΚΛΑΣΜΑΤΟΣ 

Στο SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial (Φιαλίδιο συλλογής 

υγρού συντήρησης) υπάρχει αρκετή ποσότητα όγκος ώστε να είναι 

δυνατή η αφαίρεση έως και 0,5 mL οµογενούς µίγµατος κυττάρων 

και υγρού για συµπληρωµατικό έλεγχο πριν από το SurePath ® Pap 

Test (Τεστ Παπανικολάου) ενώ εξακολουθεί να υπάρχει επαρκή 

ποσότητα για τεστ Παπανικολάου. 

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Παρόλο που δεν υπάρχουν στοιχεία ότι η αφαίρεση ενός κλάσµατος 

από το SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (Φιαλίδιο 

συλλογής υγρού συντήρησης) επηρεάζει την ποιότητα του δείγµατος 

για κυτταρολογικό έλεγχο, ενδέχεται να παρουσιαστούν κατά τη 

διαδικασία αυτή σπάνια περιστατικά λανθασµένης κατανοµής του 

σχετικού διαγνωστικού υλικού. 

Οι παροχείς υγειονοµικής περίθαλψης ενδεχοµένως να πρέπει να 

λάβουν νέο δείγµα εάν τα αποτελέσµατα δεν σχετίζονται µε το 

κλινικό ιστορικό του ασθενή. Επίσης, η κυτταρολογία ασχολείται µε 

διαφορετικά κλινικά ερωτήµατα από ό,τι η εξέταση για σεξουαλικά 

µεταδιδόµενα νοσήµατα (ΣΜΝ), συνεπώς η αφαίρεση κλάσµατος 

ενδεχοµένως να µην είναι κατάλληλο για όλες τις κλινικές 

περιπτώσεις. Εάν είναι απαραίτητο, είναι δυνατή η συλλογή ενός 

ξεχωριστού δείγµατος για έλεγχο ΣΜΝ αντί για λήψη κλάσµατος 

από το SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial (Φιαλίδιο 

συλλογής υγρού συντήρησης). 

Η αφαίρεση κλάσµατος από δείγµατα χαµηλής κυτταροβρίθειας 

ενδέχεται να αφήνουν ανεπαρκές υλικό στο SurePath ® Preservative 

Fluid Collection Vial (Φιαλίδιο συλλογής υγρού συντήρησης) για την 

ικανοποιητική προετοιµασία ενός SUREPATH ® Pap test (Τεστ 

Παπανικολάου). 

Το κλάσµα θα πρέπει να αφαιρεθεί πριν από τη διαδικασία του τεστ 

Παπανικολάου SurePath ® Pap Test. Μόνο ένα κλάσµα του δείγµατος 

µπορεί να αφαιρεθεί από το SurePath ® Preservative Fluid Collection 

Vial (Φιαλίδιο συλλογής υγρού συντήρησης) πριν από την εκτέλεση 

του τεστ Παπανικολάου, ανεξάρτητα από τον όγκο του κλάσµατος. 

∆ιαδικασία 

1. Για να εξασφαλιστεί οµογενές µίγµα, το SurePath ® Preservative 

Fluid Collection Vial (Φιαλίδιο συλλογής υγρού συντήρησης) 

θα πρέπει να υποστεί περιδίνηση για 10 - 20 δευτερόλεπτα 

και το κλάσµα των 0,5 mL θα πρέπει να αφαιρεθεί µέσα σε 

διάστηµα ενός λεπτού από την περιδίνηση. 

2. Για την αφαίρεση του κλάσµατος θα πρέπει να χρησιµοποιηθεί 

ρύγχος πιπέτας φράγµατος αερολύµατος πολυπροπυλενίου µε 

µέγεθος κατάλληλο για τον όγκο που αφαιρείται. Σηµείωση: 

∆εν επιτρέπεται η χρήση ορολογικών πιπετών. Για την 

αποφυγή επιµόλυνσης στο SurePath ® Preservative Fluid 

(Φιαλίδιο συλλογής υγρού συντήρησης) ή στο κλάσµα θα 

πρέπει να εφαρµόζονται οι ενδεδειγµένες εργαστηριακές 

πρακτικές. Η αφαίρεση κλάσµατος θα πρέπει να 

πραγµατοποιείται σε κατάλληλο µέρος έξω από την περιοχή 

όπου εκτελείται η ενίσχυση. 

3. Πραγµατοποιήστε οπτικό έλεγχο στο υλικό κλάσµατος στην 

πιπέτα για ενδείξεις µεγάλων συσσωµατωµάτων ή ηµιστερεών. 

Εάν υπάρχουν ενδείξεις παρουσίας τέτοιου υλικού κατά την 

αφαίρεση του υλικού κλάσµατος, όλο το υλικό θα πρέπει να 

επιστραφεί στο φιαλίδιο δείγµατος και το δείγµα να 

χαρακτηριστεί ακατάλληλο για συµπληρωµατικό έλεγχο πριν 

από την εκτέλεση του τεστ Παπανικολάου. 

4. Για οδηγίες σχετικά µε την επεξεργασία του κλάσµατος µε 

χρήση των δοκιµασιών ενισχυµένου DNA BD ProbeTec 

CT Q x και GC Q x , ανατρέξτε στα Ένθετα συσκευασίας που 

παρέχονται από τον κατασκευαστή της δοκιµασίας. 

ΑΠΑΙΤΟΥΜΕΝΑ ΥΛΙΚΑ 

Παρεχόµενα υλικά 

• SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (Φιαλίδιο 

συλλογής υγρού συντήρησης) 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (Αντιδραστήριο πυκνότητας) 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers (Θάλαµοι καθίζησης) 

• SUREPATH ® PreCoat (Αντικειµενοφόροι πλάκες) 

• ∆οκιµαστικοί σωλήνες φυγοκέντρησης 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (Πιπέτες - σύριγγες) 

• Μύτες αναρρόφησης 

Υλικά που απαιτούνται αλλά δεν παρέχονται 

• Φυγοκεντρητής 

• Στατήρες αντικειµενοφόρων πλακών 

• Πιπέτα µεταφοράς (προαιρετικά) 

• ∆ίσκος επεξεργασίας (προαιρετικά) 

• Συσκευή δειγµατοληψίας τύπου σκούπας ή ενδοτραχηλική 

ψήκτρα/πλαστική σπάτουλα µε αποσπώµενη κεφαλή(ές) 

• Στροβιλιστής 

• Πιπέτες ακριβείας µε µύτες µιας χρήσης 

• Απιονισµένο νερό (pH 7,5 έως 8,5) 

• Ισοπροπανόλη και αλκοόλη βαθµού αντιδραστηρίου 

• Αντιδραστήρια χρώσης 

• Παράγοντας διαύγασης, υλικά κάλυψης, καλυπτρίδες 

ΑΠΟΘΗΚΕΥΣΗ 

• Το χρονικό όριο αποθήκευσης για το SUREPATH ® Preservative 

Fluid (Υγρό συντήρησης) χωρίς κυτταρολογικά δείγµατα είναι 

36 µήνες από την ηµεροµηνία παραγωγής, σε θερµοκρασία 

δωµατίου (15 ° ως 30 °C). 

• Το όριο αποθήκευσης για το SUREPATH ® Preservative Fluid 

(Υγρό συντήρησης) µε κυτταρολογικά δείγµατα είναι 6 µήνες σε 

θερµοκρασίες ψύξης (2 ° έως 10 °C) ή 4 εβδοµάδες σε 

θερµοκρασία δωµατίου (15 ° έως 30 °C). 

• Το SurePath ® Preservative Fluid (Υγρό συντήρησης) που 

περιέχει κυτταρολογικό δείγµα που προορίζεται για χρήση µε 

τις ∆οκιµασίες ενισχυµένου DNA BD ProbeTec CT Q x και 

GC Q x µπορεί να αποθηκευτεί και να µεταφερθεί για διάστηµα 

έως και 30 ηµερών στους 2 ° – 30 °C πριν από τη µεταφορά 

του σε σωλήνες αραίωσης κυτταρολογικού δείγµατος υγρής 

βάσης (LBC) για τις ∆οκιµασίες ενισχυµένου DNA BD 

ProbeTec Q x . 

∆ΙΑ∆ΙΚΑΣΙΕΣ 

1. Μετά τη συλλογή του δείγµατος χρησιµοποιώντας Rovers 

Cervex-Brush ® ή παρόµοια συσκευή δειγµατοληψίας, η 

κεφαλή της βούρτσας ξεπλένεται απευθείας στο υγρό, 

αφαιρείται από τη λαβή και τοποθετείται σε φιαλίδιο µε 

SUREPATH ® Preservative Fluid (Υγρό συντήρησης). Το 

φιαλίδιο, εν συνεχεία, πωµατίζεται σφικτά, σηµαίνεται και 

αποστέλλεται στο εργαστήριο. 

2. Όταν τα φιαλίδια του δείγµατος φθάσουν στο εργαστήριο, 

τοποθετήστε κάθε φιαλίδιο στο δίσκο επεξεργασίας µε έναν 

προσηµασµένο σωλήνα φυγοκέντρησης που περιέχει 4 ml 

PREPSTAIN ® Density Reagent (Αντιδραστήριο πυκνότητας) 

και µια προσηµασµένη πλάκα SUREPATH ® PreCoat 

(Αντικειµενοφόρος πλάκα). Το PREPSTAIN ® Density Reagent 

(Αντιδραστήριο πυκνότητας) πρέπει να προστεθεί στο 

σωλήνα πριν το δείγµα, αλλιώς θα µειωθεί η απόδοση. 

3. Περιδινήστε ζωηρά κάθε φιαλίδιο δείγµατος επί 10 – 20 

δευτερόλεπτα. (Στο SUREPATH ® Preservative Fluid Collection 

Vial (Φιαλίδιο συλλογής υγρού συντήρησης) υπάρχει αρκετή 

ποσότητα ώστε να είναι δυνατή η αφαίρεση έως και 0,5 mL 

οµογενούς µίγµατος κυττάρων και υγρού για συµπληρωµατικό 

έλεγχο, ενώ εξακολουθεί να υπάρχει επαρκής ποσότητα για 

τεστ Παπανικολάου. Η λήψη του κλάσµατος µπορεί να 

πραγµατοποιηθεί µετά από αυτό το βήµα περιδίνησης στη 

διαδικασία ελέγχου LBC SurePath ® LBC Test.) 

• Χρησιµοποιήστε το PREPMATE Automated Accessory 

(Αυτοµατοποιηµένο παρελκόµενο) και τις PREPSTAIN ® 

Syringing Pipettes (Πιπέτες - σύριγγες) για να 

µεταφέρετε το δείγµα. Βλ. Εγχειρίδιο χειριστή του 

PREPMATE για οδηγίες. Ή 

• Αφαιρέστε το πώµα του φιαλιδίου. Κρατήστε ένα 

SUREPATH ® Preservative Vial (Φιαλίδιο συντήρησης) µε 

το ένα χέρι και σπρώξτε απαλά µία από τις PREPSTAIN ® 

Syringing Pipettes (Πιπέτες – σύριγγες) εντός του 

φιαλιδίου ώσπου να σταµατήσει, ενώ το άκρο των 

PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (Πιπέτες – σύριγγες) θα 

είναι στραµµένο µακριά από το πρόσωπό σας. 

Αναποδογυρίστε τη διάταξη φιαλιδίου / PREPSTAIN ® 

Syringing Pipettes (Πιπέτες – σύριγγες) στον κατάλληλα 

αριθµηµένο δοκιµαστικό σωλήνα του PREPSTAIN ® 

Density Reagent (Αντιδραστήριο πυκνότητας). Αφήστε 

όλο το διάλυµα δείγµατος να αποµακρυνθεί εντελώς από 

τις PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (Πιπέτες – σύριγγες) 

πριν να συνεχίσετε. Ή 

• Αφαιρέστε το πώµα του φιαλιδίου. Αδειάστε αργά 

περίπου 8 ml δείγµατος πάνω στο PREPSTAIN ® Density 

Reagent (Αντιδραστήριο πυκνότητας). 

4. Τοποθετήστε τους δοκιµαστικούς σωλήνες στους στατήρες 

του φυγοκεντρητή σύµφωνα µε το διάγραµµα της ακολουθίας 

τοποθέτησης στο εγχειρίδιο διαδικασίας (κάθε στατήρας 

σωλήνων έχει χωρητικότητα για 12 σωλήνες). Η ακολουθία 

τοποθέτησης έχει κρίσιµη σηµασία και οι σωλήνες πρέπει να 

τοποθετηθούν ισόρροπα. 

5. Εξισορροπήστε τους σωλήνες φυγοκέντρησης προσθέτοντας 

υγρό συντήρησης, εάν είναι απαραίτητο και εν συνεχεία 

φυγοκεντρήστε τα δείγµατα επί 2 λεπτά στα 200 x g. 

6. Εάν χρησιµοποιείτε την πιπέτα µεταφοράς, ανοίξτε το 

σύστηµα της πιπέτας µεταφοράς (Easy Apsirator) και 

ρυθµίστε την πίεση στα 9 ± 2 σε Hg. Τοποθετήστε καθαρές 

µύτες στην πιπέτα µεταφοράς. 

7. Αφαιρέστε τους στατήρες των σωλήνων φυγοκέντρησης από 

το φυγοκεντρητή. Κατεβάστε αργά τις µύτες της πιπέτας 

µεταφοράς (ή τις πιπέτες µεταφοράς µίας χρήσεως) µέσα 

στους σωλήνες φυγοκέντρησης για να αναρροφήσετε το 

υπερκείµενο. Η συσκευή αναρρόφησης θα πρέπει να αγγίζει 

το πάνω µέρος των σωλήνων κατά την ολοκλήρωση της 

διαδικασίας. Ξεπλύνετε µε νερό τις µύτες αναρρόφησης 

µεταξύ των δειγµάτων. 

8. Φυγοκεντρήστε τους σωλήνες επί 10 λεπτά στα 800 x g για 

να συγκεντρωθεί το διαγνωστικό στοιχείο εντός κυτταρικού 

ιζήµατος στον πυθµένα του σωλήνα. 


9. Αφαιρέστε το στατήρα των σωλήνων από το φυγοκεντρητή. 

Απορρίψτε στο νεροχύτη ήρεµα και γρήγορα. Κρατώντας το 

στατήρα αναποδογυρισµένο, στυπώστε προσεκτικά τους 

σωλήνες µε απορροφητικό χαρτί, επιβεβαιώνοντας ότι το 

κυτταρικό ίζηµα παραµένει εντός του σωλήνα. 

10. Επισηµάνετε κάθε πλάκα SUREPATH ® PreCoat 

(Αντικειµενοφόρος πλάκα) µε έναν αριθµό δείγµατος, 

προσέχοντας να µην αγγίξετε την επιφάνεια της πλάκας 

SUREPATH ® PreCoat. Τοποθετήστε τις αντικειµενοφόρους 

πλάκες σε στατήρα αντικειµενοφόρων πλακών και ασφαλίστε 

έναν PREPSTAIN ® Settling Chamber (Θάλαµος καθίζησης) σε 

κάθε αντικειµενοφόρο πλάκα. Η θέση κάθε αριθµηµένης 

πλάκας SUREPATH ® PreCoat (Αντικειµενοφόρος πλάκα) στην 

πλάκα πρέπει να αντιστοιχεί στη θέση του αντίστοιχου σωλήνα 

φυγοκέντρησης. 

11. Προσθέστε 4 ml απιονισµένου νερού (pH 7,5 - 8,0) σε κάθε 

σωλήνα δείγµατος και αναµείξτε καλά µε περιδίνηση. 

12. Εργαζόµενοι µε ένα σωλήνα δείγµατος κάθε φορά, 

περιδινήστε το σωλήνα και αµέσως µεταφέρετε 800 µl του 

κυτταρικού εναιωρήµατος στον αντίστοιχα αριθµηµένο 

PREPSTAIN ® Settling Chamber (Θάλαµος καθίζησης)/ πλάκα 

SUREPATH ® PreCoat (Αντικειµενοφόρος πλάκα). 

Επαναλάβατε για κάθε δείγµα. 

13. Αφήστε να περάσουν 10 λεπτά για την ολοκλήρωση της 

πλήρους καθίζησης. Μετά την καθίζηση, αναποδογυρίστε 

απαλά το(ους) δίσκο(ους) µε τις αντικειµενοφόρους πλάκες 

πάνω από το νεροχύτη για να απορριφθεί το υπόλοιπο υγρό 

και στυπώστε την περίσσεια υγρού µε απορροφητικό χαρτί. 

14. Ξεπλύνετε κάθε PREPSTAIN ® Settling Chamber (Θάλαµος 

καθίζησης) µε 500 µl µετουσιωµένης αιθανόλης και 

απορρίψτε. Επαναλάβατε την έκπλυση µε αλκοόλη, 

απορρίψτε το υγρό που αποµένει και στυπώστε την 

περίσσεια υγρού µε απορροφητικό χαρτί, αφήνοντάς τους 

θαλάµους αναποδογυρισµένους για τουλάχιστον 1 λεπτό. 

15. Αφαιρέστε τον PREPSTAIN ® Settling Chamber (Θάλαµος 

καθίζησης). 

16. Χρωµατίστε και καλύψτε τις πλάκες SUREPATH ® Slides 

(Αντικειµενοφόροι πλάκες). 

ΑΠΟΤΕΛΕΣΜΑΤΑ ΚΑΙ ΕΡΜΗΝΕΙΑ 

• Όλα τα διαγνωστικά κριτήρια που χρησιµοποιούνται επί του 

παρόντος στα κυτταρολογικά εργαστήρια για τα παραδοσιακά 

επιχρίσµατα Παπανικολάου ισχύουν και για τα υγρά 

παρασκευάσµατα της TRIPATH Imaging ® , Inc. 

• Οποιεσδήποτε µη φυσιολογικές ή αµφισβητούµενες 

παρατηρήσεις κατά την διάρκεια της εξέτασης του 

προσυµπτωµατικού ελέγχου θα πρέπει να παραπέµπονται σε 

παθολογοανατόµο για επανεξέταση και διάγνωση. 

Οποιεσδήποτε αλλαγές συµβούν στη κυτταρική µορφολογία 

είναι σηµαντικές και θα πρέπει να σηµειώνονται. 

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΑ 





202-204. 



J Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 



743. 





215-219. 




Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 
















1976. 


USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

Telephone: +32 (0)53 720 673 

Fax: +32 (0)53 720 678 




Benex Limited 




Ireland 


ΜΕ ΕΠΙΦΥΛΑΞΗ ΠΑΝΤΟΣ ∆ΙΚΑΙΩΜΑΤΟΣ. 

Η ονοµασία BD, το λογότυπο BD και η ονοµασία BD ProbeTec είναι σήµατα κατατεθέντα 

της εταιρίας Becton, Dickerson and Company. © 2011 BD 


MANUEL YÖNTEM 

Jinekolojik uygulamalar için hücre hazırlama işlemi 

REF 490529 REF 490635 

KULLANIM AMACI 

İn Vitro Diyagnostik Kullanım içindir 

Manuel Yöntem, sıvı bazlı hücre preparatları (LBP’ler) üretmek için 

kullanılan bir yöntemdir. Manuel Yöntem, servikal kanser 

taramalarında geleneksel Pap smiri preparatının yerine kullanılabilir. 

SUREPATH ® Preservative Fluid (Koruyucu Sıvı), BD ProbeTec 

Chlamydia trachomatis (CT) Q x ve Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x 

Yükseltilmiş DNA Dizileri kullanılarak test edilen jinekolojik 

numuneler için uygun bir toplama ve taşıma ortamıdır. Bu dizilerle 

kullanmak üzere numune hazırlamak için SUREPATH ® Preservative 

Fluid’in (Koruyucu Sıvı) kullanımı hakkındaki talimatlar için dizi 

paketi belgelerine bakın. 

ÖZET VE AÇIKLAMA 

Papanicolaou (Pap) yöntemiyle servikal sitoloji taramasında, önceden 

ektoserviks ve endoserviksten alınan hücre numuneleri cam slaytlara 

yayılarak ve Pap prosedürüyle boyanarak mikroskobik açıdan 

incelenir. 1,2,3 Pap smiriyle servikal sitoloji taraması, invaziv servikal 

karsinomunun mortalite oranını yüzde 50 ila 70 düşürmüştür. 4 Servikal 

sitoloji bir tarama testi olduğu için, anormal bulgular histolojik olarak 

doğrulanmalıdır. 

Numune toplama ve hazırlama, Pap smirlerinin doğruluğunda büyük 

bir öneme sahiptir. Randomizasyon veya tekdüze alt numune alma, tam 

doğruluk için gereklidir. Geleneksel Pap smiri tekniği, slaytın 

hazırlanmasından önce numunenin karıştırılmasına izin vermez. 

Numune alma cihazındaki mukusta hücrelerin karışması nedeniyle 

slayta aktarılan hücreler alınan popülasyonun tümünü temsil 

etmeyebilir. Hücreler, numune alma cihazında bulundukları yere göre 

slayta aktarılırlar. Çoğu hücre cihazda bırakılır. 5 

Tipik bir servikal numunenin homojen olmayışı, geleneksel smirlerin 

hazırlanmasını, taranmasını ve yorumlanmasını zorlaştırabilir. Büyük 

geleneksel slayt alanları çoğu zaman değerli diyagnostik materyalleri 

engelleyen debris, enflamatuvar hücreler ve epitelyal hücrelerle dolar. 

Ayrıca smir hazırlıktan sonra hemen sabitlenmezse, smir kurudukça 

hücre morfolojisi bozulabilir (havayla kuruyan yapı). 

Manuel Yöntem, servikal numunenin sıvı süspansiyonunu 

diyagnostik hücre grupları sağlayarak uygun şekilde boyalı, homojen 

SUREPATH ® slaytına dönüştüren bir yöntemdir. 6,7,8,9 Proses, bir hücre 

preparatı oluşturulması için hücre koruma, randomizasyon, diyagnostik 

materyalin yoğunlaştırılması, pipetleme ve sedimantasyon işlemlerini 

kapsar. Hazırlama sürecinin sonucu, Bethesda Sistemi tarafından 

tanımlanan şekilde rutin sitoloji taramasında ve kategorizasyonda 

kullanılan SUREPATH ® slaytıdır. 10 

PROSEDÜR İLKELERİ 

Manuel Yöntem, servikal hücrelerin LBP’lerini hazırlamak için 

kullanılan bir prosedürdür. Jinekolojik numuneler, kalifiye sağlık 

personeli tarafından çıkarılabilen başlıklı süpürgeye benzeyen 

cihazlar (örn. Cervex-Brush ® ) veya plastik spatül ve endoservikal 

fırça cihazları kombinasyonu (örn. Cytobrush ® Plus GT ve 

Pap-Perfect ® spatül, MedScand (ABD), Inc.) kullanılarak toplanır. 

Fırçanın başlığı koldan çıkarılır ve SUREPATH ® Koruyucu Sıvının 

flakonuna yerleştirilir. Flakonun kapağı kapatılır, etiketlenir ve ilgili 

belgelerle birlikte işlenmek üzere laboratuara gönderilir. 

Laboratuarda, korunan numune vorteks cihazıyla karıştırılır ve 

PREPSTAİN ® Dansite Reaktifi içeren bir tüpe aktarılır. PREPSTAİN ® 

Dansite Reaktifiyle santrifüjlü sedimantasyondan oluşan 

yoğunlaştırma adımında, diyagnostik olmayan debris ve fazla 

enflamatuvar hücreler numuneden kısmen uzaklaştırılır. Santrifüj 

işleminden sonra, yoğunlaştırılmış hücre bileşenini içeren tüp D.I. 

suyla sulandırılarak hazırlanır ve hücre materyali aspirasyon/boşaltma 

sekansı kullanılarak bir pipetör ile tekrar süspansiyona alınır. Daha 

sonra numune materyal SurePath ® PreCoat slaytına monte edilmiş 

PREPSTAİN ® Durultma Odasına aktarılır. Kısa inkübasyon sırasında 

ağırlık sedimantasyonu oluşur. Fazla materyal dökülür. SUREPATH ® 

PreCoat slaytı boyanır, temizlenir ve lamele yerleştirilir; hücreler 

13 mm çapında bir daire içinde sunulur. SUREPATH ® Slaytı, diğer 

ilgili hasta bilgileriyle bağlantılı olarak eğitimli sitoteknologlar ve 

patologlar tarafından incelenir. 

KISITLAMALAR 

• Manuel Yöntem kullanarak hazırlamaya yönelik jinekolojik 

numuneler, imalatçı tarafından sağlanan standart toplama 

prosedürüne göre süpürge tipi bir cihazla toplanmalıdır. 

• TRİPATH Imaging ® , Inc sıvı bazlı preparatların üretimini ve 

değerlendirmesini yalnızca TRİPATH tarafından eğitilmiş veya 

böyle bir eğitimi vermek için TRİPATH’in görevlendirdiği kişiler 

tarafından eğitilen personel yapmalıdır. 

• Cihazın uygun performans göstermesi, yalnızca 

TRİPATH Imaging, Inc ® tarafından desteklenen veya 

TRİPATH Imaging, Inc ® tarafından tavsiye edilen malzemelerin 

kullanılmasını gerektirir. Kullanılan malzemeler kurumsal ve 

resmi düzenlemelere uygun olarak doğru şekilde atılmalıdır. 

• Tüm malzemeler tek kullanımlıktır ve tekrar kullanılamaz. 

• SurePath ® LBC Test işlemini gerçekleştirmek için SurePath ® 

Preservative Fluid Collection Vial’de (Koruyucu Sıvı Toplama 

Flakonu) 8,0 ± 0,5 mL’lik bir numune toplanması gerekir. 

UYARILAR 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (Koruyucu Sıvı) seyreltilmiş 

denatüre etanol çözeltisi içerir ve insan tüketimi için değildir. 

Karışım, zararlı olabilecek ve yutulduğu takdirde körlüğe yol 

açabilecek az miktarda metanol ve izopropanol içerir. 

• PREPSTAİN ® Density Reagent (Dansite Reaktifi) sodyum azit 

içerir. Sodyum azit, kurşun veya bakır tesisat ile reaksiyona 

girerek son derece patlayıcı metal azitler oluşturabilir. Atmadan 

önce azitlerin birikmesini önlemek için bol suyla yıkayın. Daha 

fazla bilgi için, Centers for Disease Control (Hastalık Kontrol 

Merkezleri) tarafından yayınlanan Kullanım Kılavuzu’na 

bakın. 11 

ÖNLEMLER 

• İyi laboratuar uygulamaları izlenmelidir ve Manuel Yöntemin 

kullanımı için tüm prosedürlere uyulmalıdır. 

• Tüm reaktifler, önerilen saklama koşulları izlendiği ve 

uygulandığı sürece belirtilen son kullanma tarihlerine kadar 

stabildir. 

• Reaktiflerin mikrobik kontaminasyonu yanlış sonuçlar verebilir. 

• SUREPATH ® PreCoat slaytlarından başka bir ikame, en iyi 

sonuçların altında sonuçlara yol açabilir. 

• Sıçramasını veya aerosollerin oluşumunu önleyin. Uygun el, 

göz ve giysi koruması kullanın. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (Koruyucu Sıvı), bakterisittir ve 

şunlara karşı test edilmiştir: Escherichia coli, Pseudomonas 


Mycobacterium tubculosis ve Aspergillus niger. Ancak, 

biyolojik sıvıların güvenli kullanımına yönelik genel önlemler 

her zaman uygulanmalıdır. 

İSTEĞE BAĞLI PARÇA ÇIKARMA 

SUREPATH ® Pap Testi yapılmadan önce, SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial’de (Koruyucu Sıvı Toplama Flakonu), Pap testi 

için yeterli hacmin yanında yardımcı testler için 0,5 mL’ye kadar 

homojen hücre karışımı ve sıvısı çıkarılmasına yetecek hacim 

mevcuttur. 

Bir parçanın SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial’den 

(Koruyucu Sıvı Toplama Flakonu) çıkarılmasının sitoloji testleri 

açısından numunenin kalitesini etkilediğine dair hiçbir kanıt 

olmamasına rağmen, bu işlem sırasında uygun diyagnostik materyalin 

yanlış tahsis edilmesinin nadir örnekleri meydana gelebilir. Sağlık 

hizmeti sağlayıcıları, sonuçlar hastanın klinik geçmişi ile bağıntılı 

değilse yeni bir numune almaya ihtiyaç duyabilir. Ayrıca sitoloji 

cinsel yolla bulaşan hastalık (CYBH) testlerinden farklı sorulara yanıt 

verir; bu nedenle parça çıkarma tüm klinik durumlar için uygun 

olmayabilir. Gerekirse, SUREPATH ® Preservative Fluid Collection 

Vial’den (Koruyucu Sıvı Toplama Flakonu) bir parça almak yerine 

CYBH testleri için ayrı bir numune alınabilir. 

Düşük hücreli numunelerden parça alınması, tatmin edici bir SurePath ® 

Pap testinin hazırlanması açısından SurePath ® Preservative Fluid 

Collection Vial’de (Koruyucu Sıvı Toplama Flakonu) yetersiz materyal 

bırakabilir. 

Parça SUREPATH ® Pap testini gerçekleştirmeden önce çıkarılmalıdır. 

Parçanın hacminden bağımsız olarak, Pap Testini yapmadan önce 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial’den (Koruyucu Sıvı 

Toplama Flakonu) yalnızca bir numune parçası çıkarılabilir. 

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Prosedür 

1. Homojen bir karışım elde edilebilmesi için SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial (Koruyucu Sıvı Toplama 

Flakonu) 10-20 saniye boyunca vortekse tabi tutulmalı ve 

0,5 mL’lik parça vortekse tabi tutulduktan sonra bir dakika 

içinde çıkarılmalıdır. 

2. Parça çıkarma için çekilmekte olan hacme uygun boyuttaki bir 

polipropilen aerosol bariyer pipeti kullanılmalıdır. Not: 

Serolojik pipetler kullanılmamalıdır. SUREPATH ® Preservative 

Fluid (Koruyucu Sıvı) toplama flakonuna veya parçaya 

kirleticilerin girmesini önlemek için iyi laboratuar uygulamaları 

kullanılmalıdır. Parça çıkarma işlemi yükseltme yapılan bir 

alanın dışında uygun bir konumda yapılmalıdır. 

3. Pipetteki parça materyalini büyük sulu partiküllerin veya yarı 

katıların varlığını belirlemek üzere görsel olarak kontrol edin. 

Parça materyalini çekerken bu tür materyallerin varlığına ilişkin 

kanıtlarla karşılaşılması tüm materyalin numune flakonuna geri 

gönderilmesini ve numunenin Pap testi yapmadan önce 

yardımcı testler açısından reddedilmesini gerektirir. 

4. BD ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q x ve Neisseria 

gonorrhoeae (GC) Q x Yükseltilmiş DNA Dizileri kullanılarak 

yapılan parça işleme hakkındaki talimatlar için dizi üreticisi 

tarafından sağlanan Paket Belgelerine bakın. 

GEREKLİ MALZEMELER 

Sağlanan Malzemeler 

• SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (Koruyucu Sıvı 

Toplama Flakonu) 

• PREPSTAİN ® Density Reagent (Dansite Reaktifi) 

• PREPSTAİN ® Durultma Odaları 

• SUREPATH ® PreCoat slaytları 

• Santrifüj Tüpleri 

• PREPSTAİN ® Syringing Pipettes (Şırınga Pipetleri) 

• Aspiratör Uçları 

Gerekli fakat sağlanmamış malzemeler 

• Santrifüj 

• Slayt Rafları 

• Easy Aspirator (isteğe bağlı) 

• İşleme Tepsisi (isteğe bağlı) 

• Çıkarılabilen başlıklı süpürge türü numune alma cihazı veya 

endoservikal fırça/plastik spatül 

• Vorteks Karıştırıcı 

• Atılabilir Uçlu Hassas Pipetler 

• Deiyonize Su (pH 7,5 ila 8,5) 

• İzopropanol ve Reaktif Sınıfı Alkol 

• Boyama Reaktifleri 

• Temizlik Ajanı, Sabitleme Ortamı, Lameller 

SAKLAMA 

• İçinde sitolojik numuneler bulunmayan SUREPATH ® Preservative 

Fluid (Koruyucu Sıvı) imal tarihinden itibaren oda sıcaklığında 

(15 ° ila 30 °C) 36 aya kadar saklanabilir. 

• Sitolojik numuneler içeren SUREPATH ® Preservative Fluid 

(Koruyucu Sıvı) için saklama sınırı soğutucu koşullarında 

(2 ° ila 10 °C) 6 ay veya oda sıcaklığında (15 ° ila 30 °C) 

4 haftadır. 

• BD ProbeTec CT Q x ve GC Q x Yükseltilmiş DNA Dizileri ile 

kullanılması amaçlanan sitolojik numune içeren SUREPATH ® 

Preservative Fluid (Koruyucu Sıvı) depolanabilir ve BD 

ProbeTec CT Q x ve GC Q x Yükseltilmiş DNA Dizileri için 

kullanılan Sıvı Bazlı Sitoloji Numunesi (LBC) Sulandırma 

Tüplerine taşımadan önce 2 ° – 30 °C’de 30 güne kadar 

saklanabilir. 

PROSEDÜRLER 

1. Rovers Cervex-Brush ® veya benzeri numune alma cihazı 

kullanılarak numune alındıktan sonra, fırça başlığı doğrudan 

sıvıyla yıkanır, koldan çıkarılır ve SUREPATH ® Preservative 

Fluid (Koruyucu Sıvı) flakonuna atılır. Flakonun kapağı sıkıca 

kapatılır, etiketlenir ve laboratuara gönderilir. 

2. Numune flakonları laboratuara ulaştığında, her flakonu önceden 

4 ml PREPSTAİN ® Density Reagent (Dansite Reaktifi) ve etiketli 

SUREPATH ® PreCoat slaytıyla doldurulmuş etiketli santrifüj 

tüpüyle beraber işleme tepsisine yerleştirin. Numune 

eklenmeden önce PREPSTAİN ® Density Reagent (Dansite 

Reaktifi) tüpe eklenmelidir aksi halde performans düşebilir. 

3. Her numune flakonunu 10 – 20 saniye kuvvetli bir şekilde 

vortekse tabi tutun. (SurePath ® Preservative Fluid Collection 

Vial’de (Koruyucu Sıvı Toplama Flakonu) Pap testleri için hala 

yeterli hacim varken, yardımcı testler için homojen hücre 

karışımı ve sıvısından en çok 0,5 mL çıkarılabilecek yeterli 

hacim mevcuttur. Parça çıkarma işlemi SurePath ® LBC Test 

işlemindeki bu vortekse tabi tutma işleminden sonra 

yapılabilir.) 

• Numuneyi aktarmak için PREPMATE Otomatik 

Aksesuarını ve PREPSTAİN ® Syringing Pipettes’i (Şırınga 

Pipetleri) kullanın. Talimatlar için PREPMATE Kullanıcı 

Kılavuzu’na bakın. Veya 

• Flakon kapağını çıkarın. SUREPATH ® Preservative Vial’i 

(Koruyucu Flakon) bir elinizde tutun, PREPSTAİN ® 

Syringing Pipettes’in (Şırınga Pipetleri) ucu artık 

yüzünüzden uzakta olmayacak duruma gelene kadar 

PREPSTAİN ® Syringing Pipettes’i (Şırınga Pipetleri) 

hafifçe flakona itin. Flakonu / PREPSTAİN ® Syringing 

Pipettes (Şırınga Pipetleri) tertibatını uygun numaralı 

PREPSTAİN ® Density Reagent (Dansite Reaktifi) tüpüne 

ters çevirin. Devam etmeden önce tüm numune 

çözeltisinin PREPSTAİN ® Syringing Pipettes’ten (Şırınga 

Pipetleri) tamamen akmasını sağlayın. Veya 

• Flakon kapağını çıkarın. Yaklaşık 8 ml numuneyi 

PREPSTAİN ® Density Reagent’a (Dansite Reaktifi) 

yavaşça dökün. 

4. Prosedür Kılavuzundaki yerleştirme sırası şemasına göre tüpleri 

santrifüj raflarına yerleştirin (her tüp rafının kapasitesi 12 

tüptür). Yerleştirme sırası önemlidir ve dengeli olmalıdır. 

5. Gerekirse Koruyucu Sıvı ekleyerek santrifüj tüplerini dengeleyin ve 

numuneleri 2 dakika boyunca 200 x g ile santrifüjleyin. 

6. Easy Aspirator kullanılıyorsa, Easy Aspirator sistemini açın ve 

basıncı Hg cinsinden 9 ± 2’ye ayarlayın. Easy Aspirator 

aspiratörüne temiz uçlar yerleştirin. 

7. Santrifüj tüpü raflarını santrifüjden çıkarın. Üst fazı aspire 

etmek için Easy Aspirator uçlarını (veya atılabilir aktarma 

pipetlerini) yavaşça santrifüj tüplerine indirin. Sonunda 

aspiratör cihazı, tüplerin ucuna temas etmelidir. Numuneler 

arasında Aspiratör Uçlarını suyla yıkayın. 

8. Diyagnostik bileşenleri konsantre hale getirerek tüpün dibinde 

hücre pelleti oluşturmak için tüpleri 800 x g ile 10 dakika 

santrifüjleyin. 

9. Tüp rafını santrifüjden çıkarın. Hafif ve hızlı bir hareketle 

havuza dökün. Rafı ters çevrili halde tutun, hücre pelletini tüpte 

bırakarak tüpleri dikkatli bir şekilde emici kağıtta kurutun. 

10. Her numune numarasıyla bir SUREPATH ® PreCoat slaytı 

etiketleyin, SUREPATH ® PreCoat slaytının yüzeyine 

dokunmamaya dikkat edin. Slaytları Slayt Rafına yerleştirin ve 

her slayt üzerine bir PREPSTAİN ® Durultma Odası kilitleyin. 

Plaktaki numaralı her SUREPATH ® PreCoat slaytının konumu 

ilgili santrifüj tüpünün konumuyla eşleşmelidir. 

11. Her numune tüpüne 4 mL Deiyonize Su (pH 7,5 – 8,0) ekleyin ve 

vorteksleyerek iyice karıştırın. 

12. Bir kerede bir numune tüpüyle çalışarak tüpü vorteksleyin ve 

hemen 800 µl hücre süspansiyonunu aynı numaralı PREPSTAİN ® 

Durultma Odasına/ SUREPATH ® PreCoat slaytına aktarın. Her 

numune için işlemi tekrar edin. 

13. Tam sedimantasyonun oluşması için 10 dakika bekletin. 

Sedimantasyondan sonra, kalan sıvıyı dökmek ve fazla sıvıyı 

emici kağıtta kurutmak için slayt plağını/plaklarını havuzun 

üzerinde yavaşça ters çevirin. 

14. Her PREPSTAİN ® Durultma Odasını 500 µl denatüre etanol ile 

yıkayın ve boşaltın. Alkolle yıkamayı tekrar edin, kalan sıvıyı 

dökün ve en az 1 dakika ters çevrili halde bırakarak fazla sıvıyı 

emici kağıtta kurutun. 

15. PREPSTAİN ® Durultma Odasını çıkarın. 

16. SUREPATH ® Slaytlarını boyayın ve lamele yerleştirin. 

SONUÇLAR VE YORUMLAMA 

• Sitoloji laboratuarlarında geleneksel Pap smirleri için kullanılan 

mevcut tüm diyagnostik kriterler, TRİPATH Imaging ® , Inc. sıvı 

bazlı preparatları için de geçerlidir. 

• Her türlü anormal veya şüpheli tarama gözlemleri yeniden 

inceleme ve tanı için patologa gönderilmelidir. Tüm hücresel 

morfolojik değişimler önemlidir ve bildirilmelidir. 


BİBLİYOGRAFYA 





202-204. 



Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 


A Triumph and a Tragedy. J Am Med Assoc 1989; 261: 

737-743. 





215-219. 




Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 








Preparation Through Mono/Thin-Layer Technology in 








1976. 


USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

Telephone: +32 (0)53 720 673 

Fax: +32 (0)53 720 678 




Benex Limited 




Ireland 


TÜM HAKLARI SAKLIDIR. 

BD, BD Logosu ve BD ProbeTec Becton, Dickinson and Company’nin ticari 

markalarıdır. © 2011 BD 


MANUELL METOD 

En cellberedningsprocess för gynekologiska applikationer 

REF 490529 REF 490635 

AVSEDD ANVÄNDNING 

För in vitro-diagnostik 

Den manuella metoden är en metod som används för att producera 

vätskebaserade cellpreparat (LBP). Den manuella metoden är avsedd 

som ersättning för den konventionella cellutstrykningsmetoden för 

användning vid screening av cervixcancer. 

SUREPATH ® Preservative Fluid (konserveringsmedelvätska) är ett 

lämpligt insamlings- och transportmedium för gynekologiska prover 

som testas med DNA-amplifieringstesterna BD ProbeTec 

Chlamydia trachomatis (CT) Q x och Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x . 

Se analysens bipacksedel för anvisningar om användning av 

SUREPATH ® Preservative Fluid (konserveringsmedelvätska) för 

preparering av prover för användning med dessa tester. 

SAMMANFATTNING OCH FÖRKLARING 

Cytologisk screening med Papanicolaou-metoden (Pap) involverar 

mikroskopisk undersökning av cellprover som har tagits främst från 

ekto- och endocervix, utstrukna på objektglas och färgade med 

användning av Pap-proceduren. 1,2,3 Cervikal cytologisk screening med Paputstryk 

har minskat dödligheten vid invasivt cervixkarcinom med 50 

till 70 procent. 4 Eftersom cervixcytologi är ett screeningtest, måste 

onormala upptäckter bekräftas histologiskt. 

Provtagning och beredning är mycket viktiga för noggrannhet i 

cellutstryk. Randomisering eller enhetlig subprovtagning är viktig för 

fullständig noggrannhet. Med den vanliga Pap-utstrykningsmetoden kan 

proverna inte blandas före objektglasberedning. På grund av cellernas 

hoptrasslande i slemhinnan på provtagningsenheten är de celler som 

överförts till objektglaset eventuellt inte representativa för den totala 

cellpopulationen. Cellerna överförs till objektglaset i förhållande till 

var de råkar befinna sig på provtagningsenheten. Många celler blir 

kvar på enheten. 5 

Icke-homogeniteten hos ett typiskt cervixprov kan göra konventionella 

utstryk svåra att bereda, screena och tolka. Stora områden av det 

konventionella objektglaset är ofta täckta av rester, inflammatoriska 

celler och epitelceller som kan skymma värdefullt diagnostiskt 

material. Om utstryket dessutom inte fixeras direkt efter beredning, 

kan den cellulära morfologin förvrängas när utstryket torkar 

(lufttorkningsartefakt). 

Den manuella metoden är en metod för att omvandla en vätskesuspension 

av ett cervixprov till ett jämnt färgat, homogent SUREPATH ® -objektglas, 

samtidigt som diagnostiska cellkluster bibehålls. 6,7,8,9 Processen 

omfattar cellkonservering, randomisering, berikning av diagnostiskt 

material, pipettering och sedimentering för att skapa ett cellulärt preparat. 

Resultatet av beredningsprocessen är ett SUREPATH ® -objektglas för 

användning i rutinmässig cytologisk screening och kategorisering 

enligt Bethesda System. 10 

PRINCIPER FÖR METODEN 

Den manuella metoden är en procedur för beredning av vätskebaserade 

preparat (LBP) av cervixceller. Gynekologiska prover samlas in av 

kvalificerad medicinsk personal med borstliknande enheter (t.ex. 

Cervex-Brush ® ) eller en kombinerad endocervikal borste/plastspatel (t.ex. 

Cytobrush ® Plus GT och Pap-Perfect ® -spatel, MedScand (USA), Inc.) 

med löstagbara huvuden. Borstens huvud tas bort från handtaget och 

placeras i en flaska med SUREPATH ® Preservative Fluid 

(konserveringsmedelvätska). Flaskan förses med lock, märks och 

skickas med lämpliga dokument till laboratoriet för bearbetning. 

I laboratoriet blandas det konserverade provet genom vortexing och 

överförs sedan till ett provrör med PREPSTAIN ® Density Reagent 

(densitetsreagens). Ett berikningssteg, som består av 

centrifugsedimentering genom PREPSTAIN ® Density Reagent 

(densitetsreagens), avlägsnar delvis icke-diagnostiska rester och 

överflödiga inflammatoriska celler från provet. Efter centrifugering 

rekonstitueras provröret som innehåller den berikade cellulära 

komponenten med avjoniserat vatten och det cellulära materialet 

återsuspenderas med en pipett genom en aspirerings- 

/dispenseringssekvens. Provmaterialet överförs därefter till en 

PREPSTAIN ® Settling Chamber (stagnationskammare) monterad på ett 

SUREPATH ® PreCoat (förbeläggning) objektglas. Sedimentering 

genom gravitation sker under en kort inkubation. Överskottsmaterial 

dekanteras. SUREPATH ® PreCoat (förbeläggning) objektglaset färgas, 

klargörs och förses med täckglas, med cellerna placerade i en cirkel 

på 13 mm i diameter. SUREPATH ® objektglaset undersöks av utbildade 

cytotekniker och patologer tillsammans med annan relevant 

patientinformation. 

BEGRÄNSNINGAR 

• Gynekologiska prover för beredning med den manuella 

metoden skall tas med en enhet av borsttyp i enlighet med den 

standardprocedur för provtagning som tillverkaren 

tillhandahåller. 

• Proceduren och utvärderingen av TRIPATH Imaging ® , Inc. 

vätskebaserade cellpreparat skall endast utföras av personal som 

utbildats av TRIPATH eller av andra som godkänts av TRIPATH 

att utföra detta. 

• För att enheten skall fungera rätt får endast de material som 

godkänts av TRIPATH Imaging ® , Inc. eller som rekommenderats 

av TRIPATH Imaging ® , Inc. användas. Använt material skall 

bortskaffas i enlighet med institutionella och kommunala 

föreskrifter. 

• Allt material är avsett för engångsbruk och får inte 

återanvändas. 

• För att processa SUREPATH ® LBC-test krävs en volym på 

8,0 ± 0,5 ml av provet som samlats i SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial (provtagningsvial med 

konserveringsmedel). 

VARNINGAR 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (konserveringsmedelvätska) 

innehåller en utspädd vätska av denaturerad etanol och är inte 

avsedd för förtäring. Blandningen innehåller små mängder 

metanol och isopropanol, som kan vara skadliga och orsaka 

blindhet vid förtäring. 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (densitetsreagens) innehåller 

natriumazid. Natriumazid kan reagera med bly- eller kopparrör 

och bilda högexplosiva metallazider. Vid bortskaffning spolar 

man med stora mängder vatten för att förhindra aziduppbyggnad. 

För vidare information, se den handbok som utfärdats av 

Centers for Disease Control (den centrala myndigheten i USA 

för kontroll och förebyggande av sjukdomar) 11 . 

FÖRSIKTIGHETSBEAKTANDEN 

• God laboratoriepraxis bör iakttas och alla procedurer där den 

manuella metoden används noggrant följas. 

• Alla reagenser är stabila till det utgångsdatum som angivits vid 

rekommenderade förvaringsvillkor. 

• Mikrobiell kontamination av reagenser kan ge felaktiga resultat. 

• Användning av andra än SUREPATH ® PreCoat (förbeläggning) 

objektglas kan ge sämre resultat. 

• Undvik stänk och aerosolbildning. Använd lämpliga 

skyddshandskar, ögonskydd och skyddsrockar. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (konserveringsmedelvätska) är 

bakteriedödande och har testats mot: Escherichia coli, 


albicans, Mycobacterium tubculosis och Aspergillus niger. 

Vidta ändå alltid allmänna försiktighetsbeaktanden för säker 

hantering av biologiska vätskor. 

ALTERNATIVT ALIKVOTUTTAG 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (provtagningsvial med 

konserveringsmedel) innehåller tillräckligt stor volym för att medge 

att upp till 0,5 ml av en homogen blandning av celler och vätska tas 

ut för patientnära testning före SUREPATH ® Pap-testet och en tillräcklig 

volym ändå finns kvar för Pap-testet. 

Det finns inga bevis för att uttagande av en alikvot från SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial (provtagningsvial med 

konserveringsmedel) påverkar provets kvalitet för cytologitestning. I 

ovanliga fall kan dock felfördelning av relevant diagnostiskt material ske 

under denna process. Vårdpersonalen kan behöva ta ett nytt prov om 

resultaten inte korrelerar med patientens anamnes. Cytologi riktar 

dessutom in sig på andra kliniska frågor än testning för sexuellt 

överförbara sjukdomar (STD). Därför kanske det inte är lämpligt att 

ta ut en alikvot i alla kliniska situationer. Om det behövs kan ett separat 

prov tas för STD-testning, hellre än att ta ut en alikvot från SUREPATH ® 


konserveringsmedel). 

En alikvot från prover med låg cellularitet kan ge en otillräcklig 

mängd material i SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial 

(provtagningsvial med konserveringsmedel) för att kunna preparera 

ett tillfredsställande SUREPATH ® Pap-test. 

Alikvoten måste tas ut innan SUREPATH ® Pap-test utförs. Endast en 

alikvot kan tas ut från SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial 

(provtagningsvial med konserveringsmedel) innan Pap-testet utförs, 

oavsett alikvotens volym. 

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Procedur 

1. För att säkerställa att blandningen är homogen måste SUREPATH ® 


konserveringsmedel) vortexas i 10-20 sekunder. Alikvoten på 

0,5 ml måste tas ut inom en minut efter vortexningen. 

2. Alikvoten måste tas ut med en pipettspets med 

polypropylenaerosolbarriär av lämplig storlek för den aktuella 

volymen. Obs! Serologipipetter ska inte användas. God 

laboratoriesed måste följas för att undvika att kontaminanter 

förs in i SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial 

(provtagningsvial med konserveringsmedel) eller i alikvoten. 

Alikvoten ska tas ut på en lämplig plats utanför områden där 

amplifiering utförs. 

3. Kontrollera alikvotmaterialet i pipetten visuellt med avseende 

på stora, grova partiklar och halvfast material. Om sådant 

material hittas när alikvoten tas ut material ska allt material 

genast föras tillbaka till provtagningsflaskan igen och provet 

diskvalificeras från patientnära testning innan Pap-testet utförs. 

4. För anvisningar om processning av alikvoten med hjälp av 

DNA-amplifieringstesterna BD ProbeTec CT Q x och GC Q x , 

se analystillverkarens bipacksedel. 

TILLHANDAHÅLLET MATERIAL 

Material som medföljer 


(provtagningsvial med konserveringsmedel) 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (densitetsreagens) 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers (stagnationskammare) 

• SUREPATH ® PreCoat (förbeläggning) objektglas 

• Centrifugrör 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (sprutpipetter) 

• Aspiratorspetsar 

Material som krävs men ej medföljer 

• Centrifug 

• Objektglasställ 

• Easy Aspirator (valfritt) 

• Bearbetningsbricka (valfritt) 

• Provtagningsenhet av borsttyp eller endocervikal 

borste/plastspatel med löstagbart huvud 

• Vortexblandare 

• Precisionspipetter med engångsspetsar 

• Avjoniserat vatten (pH 7,5 till 8,5) 

• Isopropanol och reagensalkohol 

• Färgningsreagenser 

• Klarningsmedel, monteringsmedium, täckglas 

FÖRVARING 


utan cytologiska prover kan förvaras upp i rumstemperatur 

(15 till 30 °C) till 36 månader från tillverkningsdatum. 


med cytologiska prover kan förvaras i 6 månader i kylskåp (2 

till 10 °C) eller 4 veckor i rumstemperatur (15 till 30 °C). 


som innehåller ett cytologiskt prov avsett för användning med 

DNA-amplifieringstesterna BD ProbeTec CT Q x och GC Q x 

kan förvaras och transporteras i upp till 30 dagar vid 2°–30°C 

innan de överförs till spädningsrör för prover för vätskebaserad 

cytologi (LBC), för DNA-amplifieringstesterna 

BD ProbeTec Q x . 

PROCEDURER 

1. När provet har tagits med en Rovers Cervex-Brush ® eller 

liknande anordning, skall borsthuvudet sköljas direkt i vätskan, 

tas bort från handtaget och läggas i SUREPATH ® Preservative 

Fluid (konserveringsmedelvätska) vial. Flaskan förses med 

tättslutande lock, märks och skickas till laboratoriet. 

2. När provflaskorna har kommit till laboratoriet, skall varje flaska 

placeras på bearbetningsbrickan med ett märkt centrifugrör fyllt 

med 4 ml PREPSTAIN ® Density Reagent (densitetsreagens) och 

ett märkt SUREPATH ® PreCoat (förbeläggning) objektglas. 

PREPSTAIN ® Density Reagent (densitetsreagens) måste tillsättas 

till röret innan provet tillsätts, annars nedsätts prestandan. 

3. Skaka kraftigt varje provflaska i 10 – 20 sekunder. (SurePath ® 


konserveringsmedel) innehåller tillräckligt stor volym för att 

medge att upp till 0,5 ml av en homogen blandning av celler och 

vätska tas ut för patientnära testning och en tillräcklig volym 

ändå finns kvar för Pap-testet. Alikvoteringen kan utföras efter 

detta vortexningssteg i SurePath ® LBC-testprocessen.) 

• Använd PREPMATE automatiserade tillbehör och 

PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (sprutpipetter) för överföring av 

provet. Se PREPMATE användarhandbok för 

instruktioner. Eller 

• Ta av flasklocket. Håll en SUREPATH ® Preservative Vial 

(konserveringsvial) i en hand, skjut försiktigt ned en 

PREPSTAIN ® Syringing Pipette (sprutpipett) i flaskan tills 

det tar stopp, med änden på PREPSTAIN ® Syringing Pipette 

(sprutpipett) vänd bort från ditt ansikte. Vänd flaskan och 

PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (sprutpipetter) upp och ned i 

det korrekt numrerade PREPSTAIN ® Density Reagent 

(densitetsreagens)-röret. Låt all provvätska rinna ut ur 

PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (sprutpipetter) innan du 

går vidare. Eller 

• Ta av flasklocket. Häll sakta ca 8 ml av provet på 

PREPSTAIN ® Density Reagent (densitetsreagens). 

4. Placera rören i centrifugställen enligt 

placeringssekvensdiagrammet i procedurhandboken (varje 

rörställ har plats för 12 rör). Placeringen är viktig och måste 

vara balanserad. 

5. Balansera centrifugrören genom att vid behov tillsätta 

konserveringsvätska och centrifugera proverna i 2 minuter vid 

200 x g. 

6. Om Easy Aspirator används, slå på Easy Aspirator-systemet 

och justera trycket till 9 ± 2 in Hg. Sätt rena spetsar på Easy 

Aspiratorns aspirator. 

7. Ta bort rörställen från centrifugen. Sänk sakta ned Easy 

Aspirator-spetsarna (eller överföringspipetter för engångsbruk) i 

centrifugrören för att aspirera supernatant. Aspireringsenheten 

skall vidröra rörens översta kant när det är klart. Skölj 

aspiratorspetsarna med vatten mellan proverna. 

8. Centrifugera rören i 10 minuter vid 800 x g för att koncentrera 

den diagnostiska komponenten till en cellpellet på rörets botten. 

9. Ta bort rörstället från centrifugen. Dekantera försiktigt och 

snabbt i vasken. Håll stället upp och ned och torka försiktigt 

rören mot absorberande papper och se samtidigt till att cellpelleten 

stannar kvar i röret. 

10. Märk ett SUREPATH ® PreCoat (förbeläggning) objektglas med 

varje provnummer. Se till att inte vidröra ytan på SUREPATH ® 

PreCoat (förbeläggning) objektglas. Placera objektglasen i 

objektglasställ och sätt fast en REPSTAIN Settling Chamber 

(stagnationskammare) på varje objektglas. Positionen på varje 

numrerat SUREPATH ® PreCoat (förbeläggning) objektglas på 

plattan måste matcha positionen på motsvarande centrifugrör. 

11. Tillsätt 4 ml avjoniserat vatten (pH 7,5-8,0) till varje provrör 

och blanda väl genom vortexblandning. 

12. Arbeta med ett provrör i taget, vortexblanda röret och överför 

genast 800 µl cellsuspension till motsvarande numrerade 

PREPSTAIN ® Settling Chamber (stagnationskammare)/SUREPATH ® 

PreCoat (förbeläggning) objektglas. Upprepa för varje prov. 

13. Beräkna 10 minuter för fullständig sedimentering. Efter 

sedimentering, vänd försiktigt objektglasplattan (-plattorna) upp 

och ned över vasken för att dekantera återstående vätska och 

torka överskottsvätska mot ett absorberande papper. 

14. Skölj varje PREPSTAIN ® Settling Chamber (stagnationskammare) 

med 500 µl denaturerad etanol och dekantera. Upprepa 

alkoholsköljningen, dekantera återstående vätska och torka 

överskottsvätska mot ett absorberande papper. Lämna 

stagnationskammarna upp- och nedvända i minst 1 minut. 

15. Ta bort PREPSTAIN ® Settling Chamber (stagnationskammare). 

16. Färga och förse SUREPATH ® objektglas med täckglas. 

RESULTAT OCH TOLKNING 

• Alla diagnostiska kriterier i aktuell cytologisk 

laboratorieanvändning för konventionella cellutstryk är 

tillämpliga för TRIPATH Imaging ® , Inc. vätskebaserade preparat. 

• Alla onormala eller tveksamma observationer vid screeningen 

skall remitteras till en patolog för granskning och diagnos. 

Cellulära morfologiska förändringar är viktiga och skall noteras. 


LITTERATURFÖRTECKNING 





202-204. 



J Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 







215-219. 




Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 















Salts, Center for Disease Control, Atlanta, Georgia, April 30, 1976. 


USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

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Fax: +32 (0)53 720 678 




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Ireland 


ALLA RÄTTIGHETER FÖRBEHÅLLES. 

BD, BD-logotypen och BD ProbeTec är varumärken tillhör 



РУЧНОЙ МЕТОД 

Процесс подготовки клеток для гинекологических 

исследований 

REF 490529 REF 490635 

НАЗНАЧЕНИЕ 

Для диагностики in vitro 

Ручной метод представляет собой процесс приготовления 

клеточных препаратов на жидкой основе. Ручной метод призван 

заменить традиционный метод приготовления микропрепаратов 

мазков по Папаниколау, применяющихся в скрининговом 

исследовании для выявления рака шейки матки. 

SUREPATH ® Preservative Fluid (жидкий консервант) является 

средой для сбора и транспортировки гинекологических 

образцов, тестируемых в анализах амплифицированных ДНК BD 

ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q x и Neisseria 

gonorrhoeae (GC) Q x . Инструкции по использованию SurePath ® 

Preservative Fluid (жидкого консерванта) для подготовки 

образцов, используемых в этих анализах, см. на листкахвкладышах 

в упаковках наборов для анализа. 

КРАТКИЙ ОБЗОР И ОПИСАНИЕ 

Скрининговое исследование для выявления рака шейки матки с 

использованием метода Папаниколау (Pap) включает 

микроскопическое исследование экто- и эндоцервикальных 

клеточных образцов, нанесенных на предметные стекла и 

окрашенных по методу Папаниколау 1,2,3 . Цервикальное 

цитологическое скрининговое исследование с помощью мазка по 

Папаниколау позволило сократить уровень смертности от 

инвазивной карциномы шейки матки на 50 – 70 % 4 . Поскольку 

цервикальное цитологическое исследование представляет собой 

скрининговое исследование, все обнаруженные патологии 

должны подтверждаться гистологическим исследованием. 

Для точности диагноза по мазкам Папаниколау крайне важно 

соблюдать процедуры отбора и приготовления образцов. Для 

полной точности чрезвычайно важна рандомизация и 

равномерный отбор части образца. Традиционная процедура 

взятия мазка по Папаниколау не предусматривает 

перемешивания образца перед приготовлением микропрепарата. 

Поскольку клетки на устройстве для взятия проб погружены в 

слизь, те клетки, которые переносятся на микропрепарат, могут 

не быть репрезентативной выборкой всех клеток взятого мазка. 

Клетки переносятся на предметное стекло в зависимости от того, 

в каком месте устройства для взятия проб они находились. 

Много клеток остается на устройстве для забора проб 5 . 

Неоднородность типичного образца цервикального мазка ведет к 

тому, что мазки, приготовленные традиционным способом, 

трудно готовить, исследовать и интерпретировать. Часто 

большие области микропрепаратов, приготовленных 

традиционным способом, покрыты примесями, клетками 

воспаления и пластинами эпителиальных клеток, которые могут 

скрывать ценный диагностический материал. Кроме того, если 

мазок не зафиксирован немедленно после приготовления, 

клеточная морфология может исказиться по мере высыхания 

(воздушные артефакты). 

Ручной метод представляет собой метод для превращения 

жидкой суспензии взятого мазка цервикальных клеток в 

равномерно окрашенный гомогенный микропрепарат 

SUREPATH ® без разрушения скоплений клеток, необходимых для 

диагностики 6,7,8,9 . Процесс включает консервацию клеток, их 

рандомизацию, обогащение диагностического материала, 

пипетирование и осаждение для создания клеточного препарата. 

Полученный в результате этого процесса микропрепарат 

SurePath ® может использоваться для обычного цитологического 

скринингового исследования и категоризации по классификации 

Бетесда 10 . 

ПРИНЦИПЫ МЕТОДИКИ 

Ручной метод представляет собой процесс приготовления 

клеточных препаратов цервикальных клеток на жидкой основе. 

Гинекологические образцы собираются квалифицированным 

медицинским персоналом с помощью приспособления типа 

«метелка» (например, Cervex Brush ® ) или эндоцервикального 

комбинированного устройства типа щеточки-шпателя 

(например, Cytobrush ® Plus GT или Pap Perfect ® компании 

MedScand (USA) Inc.) со съемными головками. Головку 

устройства снимают с ручки и помещают во флакон с SUREPATH ® 

Preservative Fluid (жидким консервантом). Флакон закрывают 

пробкой, прикрепляют этикетку и отправляют в сопровождении 

соответствующих документов в лабораторию для обработки. 

В лаборатории законсервированный образец перемешивают 

путем встряхивания, а затем переносят в пробирку с PREPSTAIN ® 

Density Reagent (плотным реагентом). Стадия обогащения, 

состоящая из осаждения препарата на центрифуге через 

PREPSTAIN ® Density Reagent (плотный реагент), частично удаляет 

из препарата ненужные для диагностики примеси и избыточные 

клетки воспаления. После центрифугирования пробирку с 

обогащенным клеточным компонентом восстанавливают 

деионизированной водой, и клеточный материал 

ресуспендируют с помощью пипеточного дозатора путем 

последовательного отбора и выпуска жидкости. Затем материал 

образца переносится в PREPSTAIN ® Settling Chamber (осадочную 

камеру), помещенную на предметное стекло SUREPATH ® PreCoat. 

Клетки осаждаются под действием силы тяжести в течение 

короткого периода инкубации. Избыточный материал сливают. 

Микропрепарат SUREPATH ® PreCoat окрашивают, осветляют и 

накрывают покровным стеклом. Клетки располагаются в круге 

диаметром 13 мм. Микропрепарат SUREPATH ® изучается под 

микроскопом квалифицированным цитотехнологом или 

патологом, с учетом другой информации о пациенте. 

ОГРАНИЧЕНИЯ 

• Гинекологические образцы для приготовления препаратов, 

получаемых с помощью ручного метода, должны 

собираться с помощью одобренного устройства типа 

«метелка» в соответствии со стандартной процедурой 

взятия мазка, определенной производителем. 

• Приготовлением и исследованием препаратов 

TRIPATH Imaging ® , Inc на жидкой основе могут заниматься 

только лица, прошедшие обучение в компании TRIPATH 

или иных организациях, уполномоченных компанией 

TRIPATH на проведение подобного обучения. 

• Для обеспечения требуемой эффективности устройства 

следует использовать только материалы, поставляемые или 

рекомендуемые компанией TRIPATH Imaging ® , Inc. 

Использованные материалы должны быть надлежащим 

образом утилизированы в соответствии с нормативами 

организации и действующим законодательством. 

• Все материалы предназначены для одноразового 

использования и не могут быть использованы повторно. 

• Для выполнения цитологического исследования 

SUREPATH ® на жидкостной основе требуется 8,0 ± 0,5 мл 

образца, собранного в SUREPATH ® Preservative Fluid 

Collection Vial (флакон для забора мазка с жидким 

консервантом). 

ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (жидкий консервант) 

содержит водный раствор денатурированного этилового 

спирта и не предназначен для употребления внутрь. Смесь 

содержит небольшие доли метилового и изопропилового 

спиртов, которые при приеме внутрь могут быть опасны 

для здоровья и привести к слепоте. 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (плотный реагент) содержит 

азид натрия. Азид натрия может реагировать с медными и 

свинцовыми трубами, образуя высоковзрывчатые азиды 

металлов. При утилизации смойте большим количеством 

воды, чтобы предотвратить накопление азида. 

Дополнительную информацию см. в руководстве, 

выпускаемом Центрами контроля заболеваний 11 . 

МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ 

• Следует соблюдать указания по надлежащей лабораторной 

практике, а также все процедуры, рекомендованные при 

использовании ручного метода. 

• Все реагенты стабильны до истечения указанного срока 

годности при условии соблюдения рекомендованных 

условий хранения. 

• Бактериальная контаминация реагентов может привести к 

неправильным результатам. 

• Замена SUREPATH ® PreCoat Slides (предметных стекол 

PreCoat) на другие может привести к неоптимальным 

результатам. 

• Избегайте расплескивания и распыления жидкостей. 

Используйте соответствующие средства защиты рук и глаз, 

а также защитную одежду. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (жидкий консервант) 

обладает бактерицидным действием и был проверен на 

действие против следующих микробов: Escherichia coli, 


albicans, Mycobacterium tuberculosis и Aspergillus niger. 

Однако следует постоянно соблюдать универсальные меры 

предосторожности по обращению с биологическими 

жидкостями. 

779-07083-00 Rev G Русский Page 34

ОТБОР ДОПОЛНИТЕЛЬНОЙ АЛИКВОТЫ 

В SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (флаконе для 

забора мазка с жидким консервантом) доступен объем, 

достаточный для отбора до 0,5 мл однородной смеси клеток и 

жидкости для дополнительного тестирования перед 

выполнением теста SurePath ® Pap (теста по Папаниколау). 

Оставшийся после отбора объем достаточен для теста по 

Папаниколау. 

Несмотря на отсутствие свидетельств о влиянии отбора 

аликвоты из SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial 

(флакона для забора мазка с жидким консервантом) на качество 

образца для цитологического исследования, в редких случаях в 

ходе этого процесса возможно неравномерное распределение 

соответствующего диагностического материала. Если результаты 

исследования не соответствуют истории болезни пациента, 

медицинским работникам может потребоваться забор нового 

образца. Более того, цитологическое исследование решает 

клинические задачи, отличные от тестирования на заболевания, 

передающиеся половым путем (ЗППП), таким образом, отбор 

аликвоты может быть неприемлемым для некоторых 

клинических ситуаций. При необходимости можно отобрать 

отдельный образец для тестирования на ЗППП вместо отбора 

аликвоты из SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (флакона 

для забора мазка с жидким консервантом). 

При отборе аликвоты из образцов с низкой насыщенностью 

клетками в SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (флаконе 

для забора мазка с жидким консервантом) может остаться объем 

материала, недостаточный для выполнения теста SUREPATH ® Pap 

(тест по Папаниколау). 

Аликвоту следует отбирать перед выполнением теста SUREPATH ® 

Pap (теста по Папаниколау). Допускается отбор только одной 

аликвоты из SUREPATH ® Perservative Fluid Collection Vial 

(флакона для забора мазка с жидким консервантом) до 

выполнения теста по Папаниколау, независимо от объема 

аликвоты. 

Методика 

1. Для обеспечения однородности смеси необходимо 

встряхивать SurePath ® Preservative Fluid Collection Vial 

(флакон для забора мазка с жидким консервантом) в 

течение 10 – 20 с. Затем в течение одной минуты следует 

отобрать аликвоту 0,5 мл. 

2. Наконечник пипетки для отбора аликвоты должен иметь 

аэрозольный барьер, а объем пипетки должен 

соответствовать объему отбираемой аликвоты. 

Примечание. Не следует использовать серологические 

пипетки. Во избежание попадания загрязнений в SurePath ® 

Preservative Fluid Collection Vial (флакон для забора мазка с 

жидким консервантом) или в аликвоту необходимо 

соблюдать требования надлежащей лабораторной 

практики. Отбор аликвоты должен выполняться в 

соответствующем месте за пределами помещения, в 

котором выполняется амплификация. 

3. Визуально проверьте материал аликвоты в пипетке на 

наличие крупных твердых или полутвердых частиц. При 

обнаружении таких примесей в ходе забора аликвоты 

следует немедленно вернуть всю отобранную жидкость во 

флакон с образцом и отбраковать образец для 

дополнительного тестирования перед тестом по 

Папаниколау. 

4. Инструкции по обработке аликвоты в анализах 

амплифицированных ДНК BD ProbeTec CT Q x и GC Q x 

см. на листках-вкладышах в упаковках наборов для 

анализа, предоставленных их производителями. 

НЕОБХОДИМЫЕ МАТЕРИАЛЫ 

Предоставляемые материалы 

• SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (флакон для 

забора мазка с жидким консервантом) 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (плотный реагент) 

• PREPSTAIN ® Settling Chambers (осадочные камеры) 

• SUREPATH ® PreCoat Slides (предметные стекла PreCoat) 

• Центрифужные пробирки 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (шприц-пипетки) 

• Наконечники аспиратора 

Необходимые, но не предоставленные материалы 

• Центрифуга 

• Штативы для микропрепаратов 

• Модульный аспиратор (необязательно) 

• Лоток для обработки (необязательно) 

• Приспособление типа «метелка» или эндоцервикальное 

комбинированное устройство типа щеточки-шпателя со 

съемной головкой (головками) для взятия мазка 

• Устройство для встряхивания 

• Точные пипетки со съемными наконечниками 

• Деионизированная вода (pH 7,5 – 8,5) 

• Изопропиловый спирт и химически чистый этиловый спирт 

• Реагенты для окрашивания 

• Осветляющее средство, среда для заливки и покровные 

стекла 

ХРАНЕНИЕ 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (жидкий консервант) без 

цитологических образцов может храниться при комнатной 

температуре (от 15 до 30 °C) до 36 месяцев со дня 

изготовления. 

• Срок хранения SUREPATH ® Preservative Fluid (жидкого 

консерванта) с цитологическими образцами — до 6 месяцев в 

холодильнике (от 2 до 10 °C) или 4 недели при комнатной 

температуре (от 15 до 30 °C). 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (жидкий консервант), 

содержащий цитологический образец для использования в 

анализах амплифицированных ДНК BD ProbeTec CT Q x 

и GC Q x может храниться и транспортироваться до 30 дней 

при температуре от 2 до 30 °C перед переносом в пробирки для 

разбавления образца с целью проведения цитологических 

исследований на жидкостной основе в анализах 

амплифицированных ДНК BD ProbeTec Q x . 

ПРОЦЕДУРЫ 

1. После взятия мазка с помощью Cervex-Brush ® компании 

Rovers или аналогичного устройства для взятия мазка 

снимите головку устройства с ручки и поместите во флакон 

с SUREPATH ® Preservative Fluid (жидким консервантом). 

Закройте флакон пробкой, прикрепите этикетку и отправьте 

в лабораторию. 

2. После регистрации флаконов с образцами в лаборатории 

поместите каждый флакон в штатив для обработки в 

комплекте с маркированной центрифужной пробиркой, 

в которую заранее помещено 4 мл PREPSTAIN ® Density 

Reagent (плотного реагента) и маркированного SUREPATH ® 

PreCoat Slide (микропрепарата PreCoat). PREPSTAIN ® 

Density Reagent (плотный реагент) следует добавить в 

пробирку до того, как туда будет добавлен образец, иначе 

качество процедуры снизится. 

3. Энергично встряхните каждый флакон с образцом в 

течение 10 – 20 секунд. 

(В SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (флаконе для 

забора мазка с жидким консервантом) доступен объем, 

достаточный для отбора до 0,5 мл однородной смеси клеток и 

жидкости для дополнительного тестирования. Оставшийся 

после отбора объем достаточен для теста по Папаниколау. 

Отбор аликвоты может производиться после встряхивания в 

ходе теста с жидким консервантом SUREPATH ® .) 

• Перенесите образец с помощью PREPMATE 

Automated Accessory (дополнительного 

автоматического устройства) и PREPSTAIN ® Syringing 

Pipettes (шприц-пипеток). См. инструкции в 

руководстве по эксплуатации устройства PREPMATE. 

ИЛИ 

• Снимите крышку с флакона. Держа SUREPATH ® 

Preservative Vial (флакон с консервантом) в одной 

руке, аккуратно введите PREPSTAIN ® Syringing Pipettes 

(шприц-пипетки) во флакон до упора. При этом конец 

PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (шприц-пипеток) 

следует направлять в противоположную сторону от 

собственного лица. Переверните флакон вместе с 

PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (шприц-пипетками) в 

пронумерованную соответствующим образом 

пробирку с PREPSTAIN ® Density Reagent (плотным 

реагентом). Дождитесь, пока раствор образца 

полностью вытечет из PREPSTAIN ® Syringing Pipettes 

(шприц-пипеток), прежде чем продолжить работу. 

ИЛИ 

• Снимите крышку с флакона. Медленно вылейте 

примерно 8 мл образца на PREPSTAIN ® Density Reagent 

(плотный реагент). 

4. Поместите пробирки в штативы центрифуги в порядке, 

указанном на диаграмме последовательности расположения 

в руководстве по эксплуатации (каждый штатив вмещает 

до 12 пробирок). Последовательность размещения 

пробирок очень важна. Должен соблюдаться баланс. 

5. При необходимости сбалансируйте центрифужные 

пробирки добавлением консервирующей жидкости и 

центрифугируйте образцы в течение 2 минут при 200 g. 


6. При использовании модульного аспиратора включите 

систему Easy Aspirator и установите давление 230 ± 50 мм 

рт. ст. Наденьте на аспиратор системы Easy Aspirator 

чистые наконечники. 

7. Извлеките штативы центрифужных пробирок из 

центрифуги. Медленно опустите наконечники системы 

Easy Aspirator (или одноразовые пипетки для переноса) в 

центрифужные пробирки для удаления надосадочной 

фракции. По завершении устройство аспирации должно 

касаться верха пробирки. Между образцами промывайте 

наконечники аспиратора водой. 

8. Центрифугируйте пробирки в течение 10 минут при 800 g, 

чтобы сконцентрировать диагностический компонент в 

клеточный осадок на дне пробирки. 

9. Извлеките штатив с пробирками из центрифуги. 

Осторожно и быстро слейте жидкость в раковину. Держа 

штатив перевернутым, осторожно промокните пробирки 

фильтровальной бумагой так, чтобы клеточный осадок 

остался в пробирке. 

10. Пометьте SUREPATH ® PreCoat Slide (предметное стекло 

PreCoat) номером каждого образца, стараясь не касаться 

поверхности SUREPATH ® PreCoat Slide (предметного стекла 

PreCoat). Поместите предметные стекла в штатив и 

установите на каждое предметное стекло PREPSTAIN ® 

Settling Chamber (осадочную камеру). Положение каждого 

нумерованного SUREPATH ® PreCoat Slide (предметного 

стекла PreCoat) должно соответствовать положению 

соответствующей центрифужной пробирки. 

11. Добавьте 4 мл деионизированной воды (pH 7,5 – 8,0) в 

каждую пробирку и хорошо перемешайте встряхиванием. 

12. Обрабатывая пробирки с образцами по одной, 

перемешивайте их встряхиванием и немедленно перенесите 

800 мкл клеточной суспензии в соответственно 

пронумерованную PREPSTAIN ® Settling Chamber (осадочную 

камеру) на SUREPATH ® PreCoat Slide (предметном стекле 

PreCoat). Повторите операцию для каждого образца. 

13. Подождите 10 минут, чтобы произошло полное осаждение. 

После осаждения осторожно переверните лотки с 

предметными стеклами над раковиной, чтобы слить 

оставшуюся жидкость, и промокните лишнюю жидкость 

фильтровальной бумагой. 

14. Промойте каждую PREPSTAIN ® Settling Chamber (осадочную 

камеру) 500 мкл денатурированного этилового спирта и 

слейте жидкость. Повторите промывание спиртом, слейте 

лишнюю жидкость и промокните фильтровальной бумагой, 

держа образцы перевернутыми не менее 1 минуты. 

15. Удалите PREPSTAIN ® Settling Chamber (осадочную камеру). 

16. Окрасьте микропрепараты SUREPATH ® и закройте их 

покровными стеклами. 

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИНТЕРПРЕТАЦИЯ 

• К препаратам на жидкой основе, приготовленным по 

методу компании TriPath Imaging ® , Inc., можно применять 

все диагностические критерии, применяемые в настоящее 

время в цитологических лабораториях для традиционных 

мазков по Папаниколау. 

• Любые патологические или сомнительные явления, 

обнаруженные при скрининговом исследовании, должны 

быть направлены патологу для ознакомления и диагноза. 

Любые морфологические изменения клеток важны и 

должны быть отмечены. 

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 





202-204. 



Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 



743. 





215-219. 




Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 










OAN Husain. New York, Igaku-shoin, 1994, 

pp 176-185. 






1976. 


USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

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ВСЕ ПРАВА ЗАЩИЩЕНЫ. 

BD, логотип BD и BD ProbeTec являются товарными знаками компании 

Becton, Dickinson and Company. © BD, 2011 


METODA MANUALNA 

Proces przygotowywania komórek do zastosowań 

ginekologicznych 

REF 490529 REF 490635 

PRZEZNACZENIE 

Do stosowania w diagnostyce in vitro 

Metoda manualna to metoda wytwarzania płynnych preparatów 

komórkowych (ang. liquid-based cell preparations — LBP). Metoda 

manualna ma zastąpić w badaniach przesiewowych raka szyjki 

macicy konwencjonalną metodę przygotowywania rozmazu. 

SUREPATH ® Preservative Fluid (płyn konserwujący) to podłoże 

odpowiednie do pobierania i przenoszenia próbek ginekologicznych 

badanych za pomocą BD ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) 

Q x oraz Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x wykorzystujących 

amplifikację DNA. Należy zapoznać się z ulotkami dotyczącymi 

przygotowania próbek do ww. oznaczeń z zastosowaniem 

SUREPATH ® Preservative Fluid (płynu konserwującego). 

STRESZCZENIE I OBJAŚNIENIE 

Badania przesiewowe cytologii szyjki macicy metodą Papanicolaou 

(Pap) obejmują mikroskopowe badanie próbek komórek pobranych 

głównie z części pochwowej szyjki macicy oraz z szyjki macicy, 

wykonywanie rozmazu na szklanym szkiełku podstawowym oraz 

barwienie przy użyciu procedury Pap. 1,2,3 Badanie przesiewowej cytologii 

szyjki macicy przy użyciu rozmazów metodą Pap zmniejszyło o 50 do 

70 procent śmiertelność wywołaną inwazyjnym rakiem szyjki 

macicy. 4 Ponieważ cytologia szyjki macicy jest badaniem 

przesiewowym, wyniki nieprawidłowe należy potwierdzić 

histologicznie. 

W przypadku rozmazów Pap niezwykle istotne jest pobieranie oraz 

preparatyka próbek. Do uzyskania pełnej dokładności niezbędna jest 

randomizacja lub prawidłowe pobranie podrób (ang. sub-sampling) – 

wyodrębnionych z jednej, całkowitej próby. Konwencjonalna 

technika rozmazów Pap nie wymaga mieszania próbki przed 

przygotowaniem szkiełka podstawowego. Ze względu na przyleganie 

komórek do śluzu w przyrządzie do pobierania próbek, komórki 

przeniesione na szkiełko podstawowe mogą nie być reprezentatywne 

dla ogółu pobranej populacji. Komórki są przenoszone na szkiełko 

podstawowe w zależności od miejsca, 

w którym się znajdowały na przyrządzie do pobierania próbek. Wiele 

komórek pozostaje na przyrządzie. 5 

Brak jednorodności typowej próbki komórek szyjki macicy może 

utrudnić przygotowywanie, ocenę oraz interpretację rozmazu. Duże 

powierzchnie konwencjonalnego szkiełka podstawowego są często 

pokryte zanieczyszczeniami, komórkami zapalnymi oraz płatami 

komórek nabłonka, które mogą zaciemnić materiał wartościowy 

diagnostycznie. Jeżeli ponadto rozmazy nie zostaną utrwalone 

natychmiast po przygotowaniu, morfologię komórek może zaburzyć 

wysychanie rozmazu (artefakty wywołane suszeniem na powietrzu). 

Metoda manualna ma na celu przekształcenie płynnej zawiesiny 

próbki komórek szyjki macicy w równomiernie zabarwione, 

jednorodne szkiełko podstawowe SUREPATH ® zachowujące 

diagnostyczne gniazda komórek. 6,7,8,9 Obróbka obejmuje konserwację 

komórek, randomizację, wzbogacanie materiału diagnostycznego, 

pipetowanie oraz sedymentację w celu utworzenia preparatu 

komórkowego. Rezultatem procesu preparatyki jest szkiełko 

podstawowe SUREPATH ® stosowane w rutynowych cytologicznych 

badaniach przesiewowych oraz kategoryzacjach zdefiniowanych 

przez system Betesda. 10 

ZASADY PROCEDURY 

Metoda manualna to procedura przygotowywania LBP komórek 

szyjki macicy. Próbki ginekologiczne są pobierane przez 

wykwalifikowany personel medyczny przy użyciu przyrządów typu 

miotełka (np. Cervex-Brush ® ) lub przyrządów będących połączeniem 

plastikowej szpatułki oraz szczoteczki (np. Cytobrush ® Plus GT i 

szpatułka Pap-Perfect ® , MedScand (USA), Inc.) 

z odłączanymi główkami. Główka szczoteczki jest zdejmowana 

z uchwytu i umieszczana w fiolce z SUREPATH ® Preservative Fluid 

(płynem konserwującym). Fiolka jest zamykana, opisywana i wraz 

z odpowiednią dokumentacją wysyłana do laboratorium w celu 

obróbki. 

W laboratorium zakonserwowane próbki są mieszane na wytrząsarce 

i przenoszone do probówek zawierających PREPSTAIN ® Density 

Reagent (odczynnik do wirowania 

w gradiencie stężenia). Podczas etapu wzbogacania obejmującego 

sedymentację podczas wirowania przez PREPSTAIN ® Density Reagent 

(odczynnik do wirowania w gradiencie stężenia) z próbki częściowo 

usuwane są zanieczyszczenia oraz nadmiar komórek zapalnych. Po 

odwirowaniu probówka zawierająca wzbogacone komórki jest 

rekonstytuowana w wodzie dejonizowanej (DI), 

a materiał komórkowy jest resuspendowany przy użyciu pipety 

i sekwencji odsysania / dozowania. Następnie materiał próbki jest 

przenoszony do komory osadczej PREPSTAIN ® zamontowanej na 

SUREPATH ® PreCoat (szkiełku podstawowym). Podczas krótkiego 

okresu inkubacji ma miejsce sedymentacja grawitacyjna. Nadmiar 

materiału jest dekantowany. SUREPATH ® PreCoat (szkiełko 

podstawowe) jest barwione, przemywane i nakrywane szkiełkiem 

nakrywkowym. Komórki znajdują się w krążku o średnicy 13 mm. 

Szkiełko podstawowe SUREPATH ® jest oceniane przez przeszkolonych 

diagnostów (cytologów i patologów) w połączeniu z odpowiednimi 

informacjami na temat pacjentki. 

OGRANICZENIA 

• Próbki ginekologiczne do przygotowywania w metodzie 

manualnej należy pobierać przy użyciu przyrządu typu miotełki 

zgodnie z dostarczoną przez producenta standardową procedurą 

pobierania próbek. 

• Produkcja oraz ocena płynnych preparatów przy użyciu 

wyposażenia firmy TRIPATH Imaging ® , Inc powinna być 

wykonywana wyłącznie przez personel przeszkolony przez 

firmę TRIPATH lub inne organizacje upoważnione przez firmę 

TRIPATH do prowadzenia takich szkoleń. 

• W celu uzyskania prawidłowych wyników należy stosować 

wyłącznie materiały dostarczane lub zalecane przez firmę 

TRIPATH Imaging ® , Inc. Zużyte materiały należy poddać 

odpowiedniej utylizacji zgodnie z przepisami danej instytucji 

oraz kraju. 

• Wszystkie materiały są przeznaczone do jednorazowego użytku 

i nie należy ich używać ponownie. 

• Przeprowadzenie testu SUREPATH ® LBC wymaga próbki 

o objętości 8,0 ± 0,5 mL pobranej do SUREPATH ® Preservative 

Fluid Collection Vial (fiolki z płynem konserwującym). 

OSTRZEŻENIA 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (płyn konserwujący) zawiera 

roztwór denaturowanego etanolu i nie jest przeznaczony do 

spożycia przez ludzi. Mieszanina zawiera niewielkie ilości 

metanolu oraz izopropanolu, które w przypadku spożycia mogą 

być szkodliwe oraz powodować ślepotę. 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (odczynnik do wirowania 

w gradiencie stężenia) zawiera azydek sodu. Azydek sodu może 

reagować z ołowiem lub miedzią zawartymi w instalacjach 

wodociągowych, tworząc bardzo wybuchowe azydki metali. 

Podczas utylizacji mieszaninę należy spłukać dużą ilością 

wody, aby zapobiec osadzaniu się azydku. Dodatkowe 

informacje znajdują się w broszurach wydawanych przez 

Centers for Disease Control. 11 

ŚRODKI OSTROŻNOŚCI 

• Oczekuje się, że przestrzegane będą zasady dobrej praktyki 

laboratoryjnej oraz wszystkie procedury stosowania metody 

manualnej. 

• Wszystkie odczynniki są stabilne do czasu upływu ich terminów 

przydatności pod warunkiem przestrzegania 

i zachowywania zalecanych warunków przechowywania. 

• Mikrobiologiczne skażenie odczynników może dawać wyniki 

nieprawidłowe. 

• Zastosowanie szkiełek podstawowych innych niż SUREPATH ® 

PreCoat może dawać wyniki poniżej optymalnych. 

• Unikać chlapania oraz wytwarzania aerozoli. Stosować 

odpowiednie środki ochrony rąk, oczu oraz odzież ochronną. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (płyn konserwujący) ma 

działanie bakteriobójcze i został przetestowany wobec: 

Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Staphylococcus 

aureus, Candida albicans, Mycobacterium tuberculosis oraz 

Aspergillus niger. Jednak przez cały czas należy stosować 

powszechne środki ostrożności dotyczące bezpiecznej pracy z 

płynami biologicznymi. 

779-07083-00 Rev G Polski Page 37

OPCJONALNE POBRANIE PORCJI ROZTWORU 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (fiolka z płynem 

konserwującym) zapewnia wystarczającą objętość, aby można było 

pobrać z niej do 0,5 mL jednorodnej mieszaniny komórek 

i płynu w celu przeprowadzenia dodatkowych badań przed testem 

SUREPATH ® Pap przy zachowaniu objętości wystarczającej do 

wykonania testu Pap. 

Chociaż brak dowodów na to, że pobranie porcji roztworu 

z SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (fiolki z płynem 

konserwującym) wpływa na jakość próbki do badań cytologicznych, 

rzadkie przypadki nieprawidłowego podziału materiału 

diagnostycznego mogą wystąpić podczas tego procesu. Jeżeli wyniki 

badania nie zgadzają się z historią kliniczną pacjenta, wówczas może 

wystąpić konieczność pobrania nowej próbki do badań przez 

pracowników opieki zdrowotnej. Ponadto badanie cytologiczne 

odpowiada na inne pytania kliniczne niż te dotyczące chorób 

przenoszonych drogą płciową. Dlatego pobieranie porcji roztworu 

może nie być odpowiednie we wszystkich sytuacjach klinicznych. W 

razie potrzeby przeprowadzenia badań pod kątem chorób 

przenoszonych drogą płciową, można pobrać oddzielną próbkę 

zamiast pobierania porcji roztworu z SUREPATH ® Preservative Fluid 

Collection Vial (fiolki z płynem konserwującym). 

Pobieranie porcji próbek roztworu o niskiej komórkowości może 

doprowadzić do nieodpowiedniego przygotowania testu SurePath ® 

Pap z powodu niewystarczającej ilości materiału w SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial (fiolce z płynem konserwującym). 

Porcję należy pobrać przed wykonaniem testu SUREPATH ® Pap. Przed 

wykonaniem testu Pap można pobrać tylko jedną porcję preparatu z 

fiolki z płynem konserwującym SurePath ® , niezależnie od jej 

objętości. 

Procedura 

1. W celu uzyskania jednorodnej mieszaniny, SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial (fiolkę z płynem 

konserwującym) należy wytrząsać przez 10 – 20 sekund, 

a porcję o objętości 0,5 mL należy pobrać w przeciągu 1 minuty od 

wytrząsania. 

2. Do pobierania próbki należy użyć polipropylenowej końcówki 

pipety z barierą dla aerozolu o objętości odpowiedniej do 

pobieranej objętości. Uwaga: Nie należy stosować pipet 

serologicznych. Aby uniknąć zanieczyszczenia SUREPATH ® 

Preservative Fluid Collection Vial (fiolki z płynem 

konserwującym) lub pobranej porcji roztworu, należy 

przestrzegać zasad dobrej praktyki laboratoryjnej. Pobieranie 

porcji roztworu powinno odbywać się w odpowiednim miejscu 

poza obszarem wykonywania amplifikacji. 

3. Należy wizualnie skontrolować pobraną porcję roztworu 

w pipecie pod kątem obecności dużych cząstek lub elementów 

półstałych. Obecność wyżej wymienionych cząstek oznacza 

natychmiastowe przeniesienie pobranej porcji roztworu do 

fiolki z próbką i jej dyskwalifikację do badań dodatkowych 

przed wykonaniem testu Pap. 

4. Instrukcje dotyczące przetwarzania pobranej porcji roztworu za 

pomocą BD ProbeTec CT Q x i GC Q x wykorzystujących 

amplifikację DNA znajdują się w ulotkach dołączonych do 

pakietu przez producenta. 

MATERIAŁY WYMAGANE 

Dostarczane materiały 

• SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (fiolka 

z płynem konserwującym) 

• PREPSTAIN ® Density Reagent (odczynnik do wirowania 

w gradiencie stężenia) 

• Komory osadcze PREPSTAIN ® 

• SUREPATH ® PreCoat (szkiełka podstawowe ) 

• Probówki do wirowania 

• PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (pipety strzykawkowe) 

• Końcówki aspiratora 

Materiały wymagane, ale niedostarczane 

• Wirówka 

• Statywy szkiełek podstawowych 

• Przyrząd „Easy Aspirator” (opcja) 

• Podajnik do obróbki (opcja) 

• Przyrząd do pobierania próbek typu miotełki lub 

szczoteczka/plastikowa szpatułka z odłączanymi główkami 

• Wytrząsarka 

• Precyzyjne pipety z końcówkami jednorazowymi 

• Woda dejonizowana (pH 7,5 do 8,5) 

• Izopropanol oraz alkohol o czystości do analiz 

• Odczynniki do barwienia 

• Środek czyszczący, medium do zatapiania oraz szklane szkiełka 

nakrywkowe 

PRZECHOWYWANIE 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (płyn konserwujący) bez próbek 

cytologicznych można przechowywać w temperaturze pokojowej (15° 

do 30°C) przez okres do 36 miesięcy od daty produkcji. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (płyn konserwujący) z próbkami 

cytologicznymi można przechowywać w chłodni (od 2° do 10°C) 

przez 6 miesięcy, natomiast w temperaturze pokojowej (od 15° do 

30°C) przez okres do 4 tygodni. 

• SUREPATH ® Preservative Fluid (płyn konserwujący) zawierający 

próbki cytologiczne przeznaczone do użycia z wykorzystującymi 

amplifikację DNA oznaczeniami BD ProbeTec CT Q x i GC 

Q x można przechowywać i transportować w temperaturze 2 – 30°C 

przez okres do 30 dni przed przeniesieniem do probówek do 

rozcieńczania próbek cytologii płynnej (ang. Liquid-Based 

Cytology, LBC) dla wykorzystujących amplifikację DNA oznaczeń 

ProbeTec Q x . 

PROCEDURY 

1. Po pobraniu próbki przyrządem Rovers Cervex-Brush ® lub 

podobnym, główka szczoteczki jest zmywana bezpośrednio do 

płynu, uchwyt jest zdejmowany, a główka wpada do fiolki z 

SUREPATH ® Preservative Fluid (płynem konserwującym). 

Fiolka jest zamykana, opisywana i wysyłana do laboratorium. 

2. Po dotarciu próbek do laboratorium każda fiolka jest 

umieszczana na podajniku obróbki wraz z odpowiednio 

opisanymi probówkami do wirowania zawierającymi 4 mL 

PREPSTAIN ® Density Reagent (odczynnika do wirowania 

w gradiencie stężenia) oraz SUREPATH ® PreCoat (szkiełkami 

podstawowymi). PREPSTAIN ® Density Reagent (odczynnik do 

wirowania w gradiencie stężenia) musi być dodany do 

probówki przed umieszczeniem tam próbki lub nastąpi spadek 

wydajności metody. 

3. Fiolki z próbkami należy wytrząsać przez 10 – 20 sekund. 

SUREPATH ® Preservative Fluid Collection Vial (fiolka z płynem 

konserwującym) zapewnia wystarczającą objętość, aby można było 

pobrać z niej do 0,5 mL jednorodnej mieszaniny komórek 

i płynu w celu przeprowadzenia dodatkowych badań przy 

zachowaniu objętości wystarczającej do wykonania testu Pap. 

Pobierania porcji roztworu można wykonać po etapie mieszania na 

wytrząsarce podczas procesu testu SUREPATH ® LBC. 

• Do przenoszenia próbki należy użyć automatycznego 

urządzenia PREPMATE oraz PREPSTAIN ® Syringing 

Pipettes (pipet strzykawkowych). Szczegółowe instrukcje 

postępowania znajdują się w podręczniku operatora 

PREPMATE. Lub 

• Zdjąć zatyczkę fiolki. Trzymając w jednej ręce 

SUREPATH ® Preservative Vial (fiolkę), delikatnie wsunąć 

do fiolki PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (pipetę 

strzykawkową), kierując koniec PREPSTAIN ® Syringing 

Pipettes (pipety strzykawkowej) z dala od twarzy. 

Przenieść zawartość fiolki / PREPSTAIN ® Syringing 

Pipettes (pipety strzykawkowej) do odpowiednio 

ponumerowanej probówki z PREPSTAIN ® Density Reagent 

(odczynnikiem do wirowania w gradiencie stężenia). 

Przed przejściem do kolejnego punktu należy poczekać, 

aż z PREPSTAIN ® Syringing Pipettes (pipety 

strzykawkowej) odcieknie całość roztworu próbki. Lub 

• Zdjąć zatyczkę fiolki. Powoli zlać około 8 mL próbki na 

PREPSTAIN ® Density Reagent (odczynnik do wirowania w 

gradiencie stężenia). 

4. Umieścić probówki na statywie wirówki zgodnie ze schematem 

sekwencji rozmieszczania w podręczniku procedury (każdy 

statyw mieści 12 probówek). Sekwencja rozmieszczania ma 

istotne znaczenie i musi być odpowiednio zrównoważona. 

5. Probówki do wirowania należy zrównoważyć poprzez dodanie 

do nich w razie konieczności płynu konserwującego i wirować 

przez 2 minuty (200 x g). 


6. Jeżeli stosowany jest Easy Aspirator, należy go włączyć 

i ustawić ciśnienie na 23 ±5 mmHg (9 ± 2 cala Hg). 

Na aspiratorze Easy Aspirator należy umieścić czyste 

końcówki. 

7. Wyjąć z wirówki statywy do wirowania. Powoli opuścić 

końcówki aspiratora Easy Aspirator (lub jednorazowe pipety do 

przenoszenia) do probówek do wirowania w celu odessania 

supernatantu. Po zakończeniu końcówka aspiratora powinna 

dotykać szczytu probówek. Końcówki aspiratora pomiędzy 

odsysaniem kolejnych próbek należy przemywać wodą. 

8. Odwirować probówki przez 10 minut (800 x g) w celu 

zagęszczenia elementu diagnostycznego do osadu na dnie 

probówki. 

9. Wyjąć z wirówki statywy do wirowania. Delikatnie i szybko 

zdekantować do zlewu. Odwracając statyw odsączyć probówki 

na papierze pochłaniającym zwracając uwagę, aby osad 

komórek pozostał w probówce. 

10. Opisać SUREPATH ® PreCoat (szkiełko podstawowe) numerem 

próbki zwracając uwagę, aby nie dotknąć powierzchni 

SUREPATH ® PreCoat (szkiełka podstawowego). Umieścić 

szkiełka podstawowe na statywie szkiełek podstawowych i 

zablokować na każdym szkiełku komorę osadczą PREPSTAIN ® . 

Położenie każdego ponumerowanego SUREPATH ® PreCoat 

(szkiełka podstawowego) musi odpowiadać położeniu 

odpowiedniej probówki do wirowania. 

11. Do każdej probówki dodać 4 mL wody dejonizowanej 

(pH od 7,5 do 8,0) i dokładnie wymieszać na wytrząsarce. 

12. Pracować z jedną probówką jednocześnie, wytrząsać probówkę 

i natychmiast nanosić 800 µL zawiesiny komórek na 

odpowiednio ponumerowaną komorę osadczą PREPSTAIN ® / 

SUREPATH ® PreCoat (szkiełko podstawowe). Czynność 

powtórzyć dla każdej próbki. 

13. Umożliwić pełną sedymentację trwającą 10 minut. 

Po zakończeniu sedymentacji delikatnie odwrócić płytkę nad 

zlew w celu zdekantowania pozostałego płynu, a następnie 

odsączyć resztki płynu na papierze pochłaniającym. 

14. Przemyć każdą komorę osadczą PREPSTAIN ® 500 µL 

denaturowanego etanolu i zdekantować. Powtórzyć 

przemywanie alkoholem oraz dekantowanie nadmiaru płynu 

oraz odsączanie pozostałości płynu na papierze pochłaniającym. 

Płytki powinny pozostać odwrócone przez co najmniej 1 

minutę. 

15. Zdjąć komorę osadczą PREPSTAIN ® . 

16. Szkiełka podstawowe SUREPATH ® wybarwić oraz przykryć 

szkiełkami nakrywkowymi. 

WYNIKI ORAZ INTERPRETACJA 

• Wszystkie kryteria, jakie laboratorium cytologiczne aktualnie 

stosuje wobec konwencjonalnych rozmazów Pap, mają także 

zastosowanie wobec ciekłych preparatów firmy TRIPATH Imaging ® . 

• Wszelkie nieprawidłowe lub kwestionowane wyniki badania 

przesiewowego należy przekazać do oceny i diagnozy patologa. 

Wszelkie zmiany morfologiczne są istotne i należy je notować. 

PIŚMIENNICTWO 





202-204. 



J Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 



743. 





215-219. 




Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 
















1976. 


USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

Telephone: +32 (0)53 720 673 

Fax: +32 (0)53 720 678 




Benex Limited 




Ireland 


WSZELKIE PRAWA ZASTRZEŻONE. 

BD, logo BD Logo oraz BD ProbeTec są znakami towarowymi 



RANKINIS METODAS 

Ląstelių paruošimo procesas ginekologiniam naudojimui 

REF 490529 REF 490635 

NAUDOJIMO PASKIRTIS 

Naudoti in vitro diagnostikai 

Rankinis metodas – tai ląstelių skysčių ruošinių (LBP) gaminimo 

metodas. Rankinis metodas naudojamas kaip įprasto PAP tepinėlio 

paruošimo metodo, naudojamo atliekant patikrą dėl gimdos kaklelio 

vėžio, pakaitas. 

„SUREPATH Preservative Fluid“ (konservavimo skystis) yra tinkama 

ginekologinių mėginių, tiriamų „BD ProbeTec“ Chlamydia 

trachomatis (CT) Q x ir Neisseria gonorrhoeae (GC) Q x amplifikuotų 

DNR tyrimais, ėmimo ir gabenimo terpė. Nurodymus, kaip naudoti 

„SUREPATH Preservative Fluid“ (konservavimo skystį) ruošiant 

mėginius įvairiems tyrimams, rasite tyrimo pakuotės informaciniuose 

lapeliuose. 

SANTRAUKA IR PAAIŠKINIMAS 

Atliekant gimdos kaklelio citologinę patikrą, Papanicolaou (PAP) 

metodu, mikroskopiškai tiriami ląstelių mėginiai, anksčiau paimti iš 

gimdos kaklelio išorės ir vidaus, užtepti ant stiklinių skaidrių ir dažomi 

taikant PAP procedūrą 1,2,3 . Atliekant gimdos kaklelio citologines 

patikras paimant PAP tepinėlį 50 – 70 proc. sumažėjo mirtingumas 

nuo invazinės gimdos kaklelio karcinomos. 4 Gimdos kaklelio 

citologija yra patikros testas, todėl rezultatus, kai įtariamas nenormalių 

ląstelių buvimas, būtina patvirtinti atlikus histologinį tyrimą. 

Mėginių paėmimas ir paruošimas yra itin svarbios procedūros, 

užtikrinančios PAP tepinėlių tikslumą. Kad būtų užtikrintas visiškas 

tikslumas, būtinos atsitiktinio ėmimo arba vienodos papildomo 

mėginių ėmimo procedūros. Taikant įprastą PAP tepinėlio techniką 

mėginio negalima maišyti prieš paruošiant jį perkelti ant skaidrės. 

Ląstelės ant mėginių ėmimo įrankio yra susimaišiusios su gleivėmis, 

todėl ant skaidrės perkeliamos ląstelės gali neatspindėti visos paimtų 

ląstelių populiacijos. Ląstelės ant skaidrės perkeliamos atitinkamai 

pagal tai, kur jos yra ant mėginių ėmimo įrankio. Daug ląstelių 

paliekama ant įrankio. 5 

Dėl įprasto gimdos kaklelio mėginio nevienodumo įprastus tepinėlius 

gali būti sunku paruošti, tikrinti ir interpretuoti gautus rezultatus. 

Didelė dalis įprastos skaidrės dažnai padengta nuosėdomis, 

uždegiminėmis ląstelėmis ir epitelio ląstelių sluoksniais – tai gali 

kliudyti gauti patikimus diagnostikos duomenis. Be to, jei tepinėlis 

nefiksuojamas iškart jį paruošus, gali būti deformuojama ląstelių 

morfologija, nes tepinėlis išdžiūsta (oro sausinimo artefaktas). 

Rankinis metodas – tai skystos gimdos kaklelio ląstelių mėginio 

suspensijos konvertavimo į nuosekliai nudažytą homogeninį sluoksnį 

ant „SUREPATH slide“ (skaidrės), išlaikant diagnostines ląstelių 

sankaupas, metodas. 6,7,8,9 Šis procesas apima ląstelių konservavimą, 

atsitiktinį ėmimą, diagnostinės medžiagos sodrinimą, lašinimą pipete 

ir nusėdimą, siekiant paruošti ląstelių ruošinį. Paruošimo proceso 

rezultatas – „SUREPATH slide“ (skaidrė), naudojama atliekant 

įprastinę citologinę patikrą ir klasifikavimą, kaip nurodo „Bethesda“ 

sistema. 10 

PROCEDŪROS PRINCIPAI 

Rankinis metodas – tai gimdos kaklelio ląstelių LBP paruošimo 

procedūra. Ginekologinius mėginius paima kvalifikuoti medicinos 

darbuotojai, naudojantys šepetėlio tipo įrankius (pvz., „Cervex-Brush “ ) 

arba jungtinius plastikinės mentelės ir endocervikalinius šepetėlio 

įrankius (pvz., „Cytobrush Plus GT“ ir „Pap-Perfect“ mentelę, 

„MedScand Inc.“ (JAV) su nuimamomis galvutėmis. Šepetėlio galvutė 

nuimama nuo rankenėlės ir įdedama į „SUREPATH Preservative fluid“ 

(konservavimo skysčio) buteliuką. Buteliukas uždaromas dangteliu, 

pažymimas etikete ir su atitinkamais dokumentais siunčiamas apdoroti į 

laboratoriją. 

Laboratorijoje konservuotas mėginys maišomas sukamaisiais judesiais ir 

perkeliamas į mėgintuvėlį, kuriame yra „PREPSTAIN Density Reagent“ 

(tankio reguliavimo reagento). Taikant sodrinimo procedūrą, kurią 

sudaro centrifuguojant atliekamas nusėsdinimas naudojant 

„PREPSTAIN Density Reagent“ (tankio reguliavimo reagentą), 

iš mėginio iš dalies pašalinamos nediagnostinės liekanos ir uždegiminių 

ląstelių perteklius. Baigus centrifugavimą mėgintuvėlis, kuriame yra 

pagerintas ląstelių komponentas, atkuriamas dejonizuotu vandeniu ir 

ląstelių medžiaga iš naujo sustabdoma naudojant pipetę, pakaitomis 

atliekant išsiurbimą / paskirstymą. Tada mėginio medžiaga perkeliama 

ant „PREPSTAIN SETTLING CHAMBER“ (nusėsdinimo kameroje) 

įtaisytos „SUREPATH PreCoat slide“ (skaidrės). Trumpos inkubacijos 

metu įvyksta nusėsdinimas, veikiant sunkio jėgai. Perteklinės 

medžiagos dekantuojamos. „SUREPATH PreCoat slide“ (skaidrė) 

dažoma, valoma ir uždengiama dengiamuoju stikleliu, o ląstelės yra 

13 mm skersmens apskritime. „SUREPATH slide“ (skaidrę) tiria 

specialiai apmokyti citopatologijos technologai ir patologai, 

atsižvelgdami į kitą susijusią pacientų informaciją. 

APRIBOJIMAI 

• Ginekologiniai mėginiai, paruošiami naudojant 

rankinį metodą, turi būti imami naudojant šepetėlio tipo įrankį 

laikantis standartinės gamintojo pateikiamos mėginių ėmimo 

procedūros. 

• „TRIPATH Imaging, Inc“ skysčių ruošinius gaminti ir įvertinti 

gali tik tokie darbuotojai, kuriuos mokė „TRIPATH“ arba kitos 

įmonės, „TRIPATH“ įgaliotos rengti tokius mokymus. 

• Kad prietaisas tinkamai veiktų, reikia naudoti tik „TRIPATH 

Imaging, Inc“ teikiamus arba rekomenduotus priedus. 

Naudojamus priedus reikia tinkamai šalinti pagal įmonės ir 

vietines taisykles. 

• Visi priedai yra vienkartinio naudojimo ir jų negalima naudoti 

pakartotinai. 

• „SUREPATH“ LBC tyrimui apdoroti reikia 8,0 ± 0,5 mL 

mėginio, paimto iš „SUREPATH Preservative Fluid Collection 

Vial“ (konservavimo skysčio mėginių ėmimo buteliuko). 

ĮSPĖJIMAI 

• „SUREPATH Preservative Fluid“ (konservavimo skystis) – tai 

skiestas denatūruoto etanolio tirpalas, jis nėra skirtas vartoti 

žmonėms. Mišinyje yra nedideli kiekiai metanolio ir 

izopropanolio, kurie prarijus gali būti kenksmingi ir sukelti aklumą. 

• „PREPSTAIN Density Reagent“ (tankio reguliavimo reagente) 

yra natrio azido. Natrio azidas gali reaguoti su švino ir vario 

dariniais ir sudaryti itin sprogius metalų azidus. Pašalindami 

nuplaukite dideliu kiekiu vandens, kad nesusikauptų azido. 

Išsamesnės informacijos rasite Ligų kontrolės ir prevencijos 

centrų išleistame vadove. 

ATSARGUMO PRIEMONĖS 

• Būtina laikytis geros laboratorinės praktikos ir griežtai 

vadovautis visomis rankinio metodo produkto naudojimo 

procedūromis. 

• Visus reagentus galima laikyti iki jų galiojimo laikotarpio 

pabaigos, jei laikomasi rekomenduojamų laikymo sąlygų. 

• Jei reagentai yra užteršti mikroorganizmų, rezultatai gali būti 

netikslūs. 

• Jei skaidrės pakeičiamos kitomis nei „SUREPATH PreCoat 

slides“ (skaidrėmis), rezultatai gali būti ne tokie optimalūs. 

• Venkite taškymosi ar aerozolių susidarymo. Naudokite tinkamą 

rankų, akių ir drabužių apsaugą. 

• „SUREPATH Preservative Fluid“ (konservavimo skystis) yra 

baktericidinis ir jis buvo patikrintas tiriant: Escherichia coli, 


albicans, Mycobacterium tubculosis bei Aspergillus niger. 

Tačiau visada reikėtų laikytis universalių saugaus darbo su 

biologiniais skysčiais atsargumo priemonių. 

PASIRENKAMO BANDINIO PAĖMIMAS 

„SUREPATH Preservative Fluid Collection Vial“ (konservavimo 

skysčio mėginių ėmimo buteliuke) yra pakankamas kiekis mėginio, 

kad būtų galima paimti iki 0,5 mL homogeniško ląstelių ir skysčio 

mišinio papildomam tyrimui atlikti prieš „SUREPATH“ PAP tyrimą, 

paliekant pakankamai mėginio PAP tyrimui. 

Nors nėra įrodymų, kad bandinio ėmimas iš „SUREPATH Preservative 

Fluid Collection Vial“ (konservavimo skysčio mėginių ėmimo 

buteliuko) paveikia mėginio citologinio tyrimo kokybę, šio proceso 

metu retkarčiais gali pasitaikyti atitinkamos diagnostinės medžiagos 

paskirstymo klaidų. Sveikatos priežiūros specialistams gali prireikti 

paimti naują mėginį, jeigu rezultatai neatitiks paciento sveikatos 

istorijos. Be to, citologiniai tyrimai skirti ir kitoms klinikinėms 

problemoms, ne tik lytiniu keliu plintančioms ligoms diagnozuoti, 

todėl bandinio ėmimas gali būti netinkamas visoms klinikinėms 

situacijoms. Jeigu reikia, lytiniu keliu plintančioms ligoms tirti gali 

būti paimtas atskiras mėginys, o ne bandinys iš „SUREPATH 

Preservative Fluid Collection Vial“ (konservavimo skysčio mėginių 

ėmimo buteliuko). 

Paėmus bandinį iš mažai ląstelių turinčių mėginių, gali likti 

nepakankamai medžiagos „SUREPATH Preservative Fluid Collection 

Vial“ (konservavimo skysčio mėginių ėmimo buteliuke) tinkamam 

„SUREPATH“ PAP tyrimui paruošti. 

Bandinį reikia paimti prieš apdorojant „SUREPATH“ PAP tyrimą. Prieš 

PAP tyrimą galima iš „SUREPATH Preservative Fluid Collection Vial“ 

(konservavimo skysčio mėginių ėmimo buteliuko) paimti tik vieną 

bandinį, nepaisant bandinio kiekio. 

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Procedūra 

1. Siekiant užtikrinti homogenišką mišinį „SUREPATH 

Preservative Fluid Collection Vial“ (konservavimo skysčio 

mėginių ėmimo buteliukas) turi būti sukamas 10 – 20 sekundžių ir 

0,5 mL bandinį reikia paimti per vieną sukimo minutę. 

2. Imant bandinį reikia naudoti polipropileno aerozolius 

sulaikančius mikrodozatorius, kurių dydis atitiktų imamą kiekį. 

Pastaba: serologinių pipečių naudoti negalima. Reikia laikytis 

geros laboratorinės praktikos, kad į „SUREPATH Preservative 

Fluid“ (konservavimo skysčio) mėginių ėmimo buteliuką arba 

bandinį nepatektų teršalų. Bandinį reikia imti tinkamoje vietoje, 

ne tame plote, kur atliekama amplifikacija. 

3. Vizualiai patikrinkite bandinio medžiagą pipetėje, ar nėra 

didelių dalelių arba pusiau kietųjų dalelių. Radus šių medžiagų 

imant bandinį, visą medžiagą reikia grąžinti į mėginių buteliuką 

ir nenaudoti mėginio papildomam tyrimui prieš atliekant PAP 

tyrimą. 

4. Nurodymus apie bandinio apdorojimą naudojant 

„BD ProbeTec“ CT Q x ir GC Q x amplifikuotų DNR tyrimus 

rasite tyrimo gamintojo pakuotės informaciniame lapelyje. 

BŪTINOS MEDŽIAGOS 

Tiekiamos medžiagos 

• „SUREPATH Preservative Fluid Collection Vial“ (konservavimo 

skysčio mėginių ėmimo buteliukas) 

• „PREPSTAIN Density Reagent“ (tankio reguliavimo reagentas) 

• „PREPSTAIN Settling Chambers“ (nusėsdinimo kameros) 

• „SUREPATH PreCoat slides“ (skaidrės) 

• Centrifugavimo mėgintuvėliai 

• „PREPSTAIN Syringing Pipettes“ (švirkštimo pipetės) 

• Aspiratoriaus antgaliai 

Būtinos, bet netiekiamos medžiagos 

• Centrifuga 

• Skaidrių stoveliai 

• Paprastasis aspiratorius (pasirenkama) 

• Apdorojimo dėklas (pasirenkama) 

• Šepetėlio tipo mėginių ėmimo įrankis arba endocervikalinis 

šepetėlis / plastikinė mentelė su nuimama (-omis) galvute (-ėmis) 

• Sukamasis maišytuvas 

• Tikslios pipetės su nuimamais antgaliais 

• Dejonizuotas vanduo (pH 7,5 – 8,5) 

• Izopropilo ir analiziškai grynas alkoholis 

• Dažymo reagentai 

• Valymo medžiaga, tvirtinimo terpė, dengiamieji stikleliai 

LAIKYMAS 

• „SUREPATH Preservative Fluid“ (konservavimo skystį) be 

citologinių mėginių kambario temperatūroje (15 – 30 °C) 

galima laikyti iki 36 mėnesių nuo pagaminimo datos. 

• „SUREPATH Preservative Fluid“ (konservavimo skystį) su 

citologiniais mėginiais galima laikyti užšaldytus (2 – 10 °C) 

iki 6 mėnesių, o kambario temperatūroje (15 – 30 °C) – iki 4 

savaičių. 

• „SUREPATH Preservative Fluid“ (konservavimo skystį) su 

citologiniais mėginiais, skirtą naudoti su „BD ProbeTec“ 

CT Q x ir GC Q x amplifikuotų DNR tyrimams, galima laikyti 

ir pervežti iki 30 dienų esant 2° – 30 °C temperatūrai prieš 

perkeliant į skysčio pagrindo citologinių mėginių (LBC) 

skiedimo mėgintuvėlius „BD ProbeTec“ Q x amplifikuotų DNR 

tyrimams. 

PROCEDŪROS 

1. Paėmus mėginį naudojant „Rovers Cervex-Brush“ “ arba 

atitinkamą mėginių ėmimo įrankį, šepetėlio galvutė įmerkiama 

tiesiai į skystį, nuėmus ją nuo rankenėlės ir įdėjus į „SUREPATH 

Preservative Fluid“ (konservavimo skysčio) buteliuką. Tada 

buteliukas sandariai uždaromas dangteliu, pažymimas etikete ir 

siunčiamas į laboratoriją. 

2. Kai mėginių buteliukai patenka į laboratoriją, įdėkite kiekvieną 

buteliuką į apdorojimo dėklą su pažymėtu centrifugavimo 

mėgintuvėliu, iš anksto pripildytu 4 mL „PREPSTAIN Density 

Reagent“ (tankio reguliavimo reagento), ir pažymėta „SUREPATH 

PreCoat slide“ (skaidre). „PREPSTAIN Density Reagent“ (tankio 

reguliavimo reagento) reikia įpilti į mėgintuvėlį prieš įdedant 

mėginį; kitu atveju pablogės veikimas. 

3. Smarkiai sukite kiekvieną mėginio buteliuką 10 – 20 sekundžių. 

(Yra pakankamas kiekis „SUREPATH Preservative Fluid Collection 

Vial“ (konservavimo skysčio mėginių ėmimo buteliuke), kad būtų 

galima paimti iki 0,5 mL homogeniško ląstelių ir skysčio mišinio 

papildomam tyrimui, paliekant pakankamai mėginio PAP tyrimui. 

Bandinį galima paimti po sukimo „SUREPATH“ LBC tyrimo 

procese.) 

• Norėdami perkelti mėginį, naudokite „PREPMATE 

Automated Accessory“ (automatizuotą priedą) ir 

„PREPSTAIN Syringing Pipettes“ (švirkštimo pipetes). 

Instrukcijas žr. „PREPMATE“ operatoriaus vadove. Arba 

• Nuimkite buteliuko dangtelį. Vienoje rankoje laikykite 

„SUREPATH Preservative Vial“ (konservavimo buteliuką), 

nukreipę „PREPSTAIN Syringing Pipettes“ (švirkštimo 

pipečių) galą nuo savęs, švelniai stumkite „PREPSTAIN 

Syringing Pipettes“ (švirkštimo pipetes) į buteliuką, kol 

jos sustos. Apverskite ir įdėkite buteliuką / „PREPSTAIN 

Syringing Pipettes“ (švirkštimo pipečių) rinkinį į atitinkamu 

numeriu pažymėtą „PREPSTAIN Density Reagent“ (tankio 

reguliavimo reagento) mėgintuvėlį. Prieš tęsdami darbą 

palaukite, kol visas mėginio tirpalas visiškai ištekės iš 

„PREPSTAIN Syringing Pipettes“ (švirkštimo pipečių). 

Arba 

• Nuimkite buteliuko dangtelį. Lėtai užpilkite maždaug 

8 mL mėginio ant „PREPSTAIN Density Reagent“ (tankio 

reguliavimo reagento). 

4. Įdėkite mėgintuvėlius į centrifugos stovelius, vadovaudamiesi 

išdėstymo seka, pateikta procedūros vadovo diagramoje 

(kiekviename mėgintuvėlių stovelyje telpa 12 mėgintuvėlių). 

Įdėjimo seka yra labai svarbi ir turi būti išlaikyta pusiausvyra. 

5. Subalansuokite centrifugavimo mėgintuvėlius, įpylę daugiau 

konservavimo skysčio, jei reikia; centrifuguokite mėginius 

2 min. 200 x g. 

6. Jei naudojamas paprastasis aspiratorius, įjunkite jo sistemą ir 

sureguliuokite slėgį, kad būtų 9 ± 2 Hg. Nuvalykite paprastojo 

aspiratoriaus antgalius. 

7. Iš centrifugos išimkite centrifugavimo mėgintuvėlių stovelius. 

Lėtai įleiskite paprastojo aspiratoriaus antgalius (arba vienkartines 

perkėlimo pipetes) į centrifugavimo mėgintuvėlius, kad būtų 

galima aspiruoti supernatantą. Kai procesas baigiamas, 

aspiravimo prietaisas turėtų prisiliesti prie mėgintuvėlių viršaus. 

Aspiratoriaus antgalius tarp mėginių skalaukite vandeniu. 

8. Centrifuguokite mėgintuvėlius 10 min. 800 x g, kad diagnostikos 

komponentas susikoncentruotų į ląstelių granulę mėgintuvėlio 

apačioje. 

9. Iš centrifugos išimkite mėgintuvėlio stovelį. Švelniai ir greitai 

dekantuokite į kriauklę. Palikę stovelį apverstą, atsargiai 

nusausinkite mėgintuvėlius sugeriamuoju popieriumi ir 

užtikrinkite, kad ląstelių granulė lieka mėgintuvėlyje. 

10. Pažymėkite „SUREPATH PreCoat slide“ (skaidrę) kiekvieno 

mėginio numeriu, tačiau nepalieskite „SUREPATH PreCoat“ 

skaidrės. Įstatykite skaidres į skaidrių stovelį ir užfiksuokite 

„PREPSTAIN Settling Chamber“ (nusėsdinimo kamerą) ant 

kiekvienos skaidrės. Kiekvienos sunumeruotos „SUREPATH 

PreCoat slide“ (skaidrės) lėkštėje padėtis turi atitikti atitinkamo 

centrifugavimo mėgintuvėlio padėtį. 

11. Į kiekvieną mėginį įpilkite 4 mL dejonizuoto vandens 

(pH 7,5 – 8,0) ir sukamaisiais judesiais gerai išmaišykite. 

12. Vienu metu apdorodami vieną mėginio mėgintuvėlį, sukite 

mėgintuvėlį ir nedelsdami perkelkite 800 µl ląstelių suspensijos 

ant atitinkamu numeriu pažymėtos „PREPSTAIN Settling 

Chamber“ (nusėsdinimo kameros) / „SUREPATH PreCoat slide“ 

(skaidrės). Pakartokite tai su kiekvienu mėginiu. 

13. Palaukite 10 minučių, kol bus visiškai nusėsdinta. Po 

nusėsdinimo atsargiai apverskite skaidrės lėkštę (-es) virš 

kriauklės, kad būtų dekantuotas visas likęs skystis, ir 

nusausinkite perteklinį skystį sugeriamuoju popieriumi. 

14. Kiekvieną „PREPSTAIN Settling Chamber“ (nusėsdinimo 

kamerą) išskalaukite 500 µl denatūruoto etanolio ir jį išpilkite. 

Dar kartą išskalaukite alkoholiu ir dekantuokite likusį skystį bei 

nusausinkite skysčio perteklių sugeriamuoju popieriumi, 

palikdami kamerą apverstą mažiausiai 1 min. 

15. Išimkite „PREPSTAIN Settling Chamber“ (nusėsdinimo kamerą). 

16. Nudažykite ir uždenkite dengiamuoju stikleliu „SUREPATH 

SLIDES“ (skaidres). 

REZULTATAI IR INTERPRETAVIMAS 

• Visi diagnostikos kriterijai, kurie šiuo metu taikomi citologijos 

laboratorijose įprastiems PAP tepinėliams, yra taikomi 

„TRIPATH Imaging, Inc“ skysčio ruošiniams gaminti. 

• Visus neįprastus ar abejotinus patikros pastebėjimus reikėtų 

perduoti patologui peržiūrėti ir įvertinti. Bet kokie ląsteliniai 

morfologiniai pakitimai yra svarbūs ir į juos būtina atkreipti 

dėmesį. 


LITERATŪRA 

1. Papanicolaou GN: A New Procedure for Staining Vaginal Smears. 

Science 1942; 95: 438-439. 



156: 202-204. 



J Am Med Assoc 1986; 256: 367-371. 





Sampling Accounts for the Increased Diagnostic Accuracy Using 

the ThinPrep® Processor. Am J Clin Pathol 1994; 

101: 215-219. 




Acta Cytol 1996; 40: 107-119. 
















1976. 


USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

Telephone: +32 (0)53 720 673 

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„Becton, Dickerson and Company“ prekių ženklai. © BD, 2011 m. 


METODĂ MANUALĂ 

Un proces de pregătire a celulelor pentru aplicaţii ginecologice 

REF 490529 REF 490635 

UTILIZARE SPECIFICĂ 

În scopul diagnosticului in vitro 

Metoda manuală este o metodă pentru producerea de preparate de 

celule pe bază de lichid (PBL). Metoda manuală are drept scop 

înlocuirea metodei convenţionale de pregătire a frotiului Pap pentru 

utilizarea la depistarea cancerului de col uterin. 

SUREPATH Preservative Fluid (Lichid conservant) este un mediu 

corespunzător de colectare şi transport pentru probele ginecologice 

testate cu BD ProbeTec Chlamydia trachomatis (CT) Q x şi Neisseria 

gonorrhoeae (GC) Q x Amplified DNA Assays (Analize ADN 

amplificat). Consultaţi prospectul testului pentru instrucţiuni legate de 

utilizarea SUREPATH Preservative Fluid (Lichid conservant) la 

pregătirea probelor spre a fi folosite cu aceste teste. 

REZUMAT ŞI EXPLICAŢII 

Screening-ul citologic de col uterin prin metoda Papanicolaou (Pap) 

presupune examinarea microscopică a probelor de celule ce au fost 

prelevate în principal din exocervix şi endocervix, întinse pe lamele 

de sticlă şi colorate prin procedura Pap. 1,2,3 Screening-ul citologic de 

col uterin cu frotiu Pap a dus la scăderea ratelor de mortalitate cauzată 

de carcinomul de col uterin invaziv cu între 50 şi 70 de procente. 4 

Deoarece citologia de col uterin este un test de screening, rezultatele 

anormale trebuie confirmate histologic. 

Colectarea şi pregătirea probelor sunt extrem de importante pentru 

acurateţea frotiurilor Pap. Randomizarea sau sub-eşantionarea 

uniformă este esenţială pentru acurateţe absolută. Tehnica frotiului 

Pap convenţională nu prevede amestecarea eşantionului înainte de 

pregătirea lamelei. Din cauza prinderii celulelor în mucusul de pe 

dispozitivul de prelevare, celulele transferate efectiv pe lamelă pot să nu 

fie reprezentative pentru totalul populaţiei colectate. Celulele sunt 

transferate pe lamelă în raport cu locul unde se aflau pe dispozitivul 

de prelevare. Multe celule rămân pe dispozitiv. 5 

Lipsa omogenităţii unui eşantion de col uterin tipic poate face dificilă 

pregătirea, screening-ul şi interpretarea frotiurilor convenţionale. Zone 

mari ale lamelei convenţionale sunt acoperite adesea cu reziduuri, celule 

inflamatoare şi straturi de celule epiteliale ce pot ascunde vederii 

material de diagnosticare valoros. În plus, dacă frotiul nu este fixat 

imediat după pregătire, morfologia celulară se poate distorsiona, 

deoarece frotiul se usucă (artefact de uscare în aer). 

Metoda manuală este o metodă pentru convertirea unei suspensii lichide a 

unui eşantion de col uterin într-o lamelă SUREPATH omogenă şi 

colorată complet, păstrând, în acelaşi timp, grupurile de celule de 

diagnosticare. 6,7,8,9 Procesul include conservarea celulelor, randomizarea, 

îmbogăţirea materialului de diagnosticare, pipetarea şi sedimentarea 

pentru a crea un preparat celular. Rezultatul procesului de pregătire 

este o lamelă SUREPATH pentru utilizare în screening şi clasificare 

citologică de rutină, conform definiţiei din sistemul Bethesda. 10 

PRINCIPIILE PROCEDURII 

Metoda manuală este o procedură pentru pregătirea de PBL de celule 

de col uterin. Probele ginecologice sunt colectate de personal medical 

calificat, utilizând dispozitive tip perie (de ex. Cervex-Brush) sau o 

combinaţie formată dintr-o spatulă de plastic şi dispozitive tip perie 

endocervicală (de ex. Cytobrush Plus GT şi spatulă Pap-Perfect, 

MedScand (SUA), Inc.) cu capete detaşabile. Capul periei este scos 

de pe mâner şi plasat într-o fiolă de SUREPATH Preservative Fluid 

(Lichid conservant). Se pune capacul fiolei, fiola este etichetată şi 

trimisă împreună cu documentele corespunzătoare la laborator pentru 

procesare. 

În laborator, eşantionul conservat este amestecat prin centrifugare şi 

transferat într-un tub ce conţine PREPSTAIN Density Reagent (Reactiv de 

densitate). O etapă de îmbogăţire, constând din sedimentarea 

centrifugală prin PREPSTAIN Density Reagent (Reactiv de densitate), 

îndepărtează parţial din eşantion reziduurile inutile pentru diagnosticare 

şi celulele inflamatoare în exces. După centrifugare, tubul ce conţine 

componenta celulară îmbogăţită este reconstituit cu apă D.I., iar 

materialul celular este resuspendat cu o pipetă, utilizând o secvenţă 

de aspirare/distribuire. Materialul eşantionului este apoi transferat 

într-o PREPSTAIN Settling Chamber (Cameră de decantare) montată 

pe o lamelă SUREPATH PreCoat. Sedimentarea gravitaţională are loc 

în timpul unei incubaţii scurte. Materialul în exces se decantează. 

Lamela SUREPATH PreCoat este colorată, curăţată şi acoperită cu o 

lamelă de sticlă, cu celulele dispuse în formă de cerc, cu un diametru 

de 13 mm. Lamela SUREPATH este examinată de tehnicieni citologi şi 

patologi calificaţi, împreună cu alte informaţii relevante despre pacient. 

LIMITĂRI 

• Probele ginecologice pentru pregătirea cu ajutorul Metodei 

manuale trebuie recoltate utilizând un dispozitiv de tip perie, 

în conformitate cu procedura de recoltare standard furnizată de 

producător. 

• Preparatele pe bază de lichid TRIPATH Imaging, Inc trebuie 

produse şi evaluate doar de personal instruit de TRIPATH sau de 

către alte persoane autorizate de TRIPATH să ofere o astfel de 

instruire. 

• Funcţionarea corespunzătoare a dispozitivului necesită utilizarea 

exclusiv a acelor consumabile acceptate de TRIPATH Imaging, 

Inc sau recomandate de TRIPATH Imaging, Inc. Consumabilele 

folosite trebuie eliminate în mod corespunzător, în conformitate cu 

reglementările instituţionale şi guvernamentale. 

• Toate consumabilele sunt de unică folosinţă şi nu pot fi reutilizate. 

• Un volum de 8,0 ± 0,5 mL de eşantion colectat în SUREPATH 

Preservative Fluid Collection Vial (Fiolă de colectare cu lichid 

conservant) este necesar pentru procesul SUREPATH LBC Test. 

AVERTISMENTE 

• SUREPATH Preservative Fluid (Lichid conservant) conţine o 

soluţie diluată de etanol denaturat şi nu este destinat consumului 

uman. Amestecul conţine cantităţi mici de metanol şi izopropanol, 

ce pot fi dăunătoare şi care pot cauza orbirea dacă sunt ingerate. 

• PREPSTAIN Density Reagent (Reactiv de densitate) conţine 

azidă de sodiu. Azida de sodiu poate reacţiona cu plumbul 

sau cu ţevile de cupru şi poate forma azide de metal puternic 

explozive. Când sunt eliminate, clătiţi-le cu un volum mare 

de apă pentru a preveni formarea azidelor. Pentru informaţii 

suplimentare, consultaţi Ghidul Manual emis de Centrele de 

control şi prevenire a bolilor 11 . 

PRECAUŢII 

• Se aşteaptă ca bunele practici de laborator să fie urmate şi ca 

toate procedurile pentru utilizarea Metodei manuale să fie 

respectate cu stricteţe. 

• Toţi reactivii sunt stabili până la datele de expirare menţionate, 

cu condiţia respectării şi menţinerii condiţiilor de depozitare 

recomandate. 

• Contaminarea microbiană a reactivilor poate duce la rezultate 

incorecte. 

• Înlocuirea cu altfel de lamele decât lamelele SUREPATH PreCoat 

poate duce la rezultate care să nu fie optime. 

• Evitaţi împroşcarea sau generarea de aerosoli. Utilizaţi 

echipament adecvat de protecţie corporală, pentru mâini şi ochi. 

• SUREPATH Preservative Fluid (Lichid conservant) este 

bactericid şi a fost testat contra următoarelor: Escherichia coli, 


albicans, Mycobacterium tubculosis şi Aspergillus niger. 

În orice caz, trebuie luate întotdeauna măsuri de precauţie 

universale pentru manipularea în siguranţă a lichidelor biologice. 

EXTRAGERE OPŢIONALĂ A PĂRŢII ALICOTE 

În SUREPATH Preservative Fluid Collection Vial (Fiolă de colectare 

cu lichid conservant) există suficient volum pentru a permite 

extragerea a maximum 0,5 mL de amestec omogen de celule şi lichid 

pentru testare auxiliară, înainte de SUREPATH Pap Test, rămânând un 

volum suficient şi pentru testarea Pap. 

Deşi nu există nicio dovadă a faptului că extragerea unei părţi alicote 

din SUREPATH Preservative Fluid Collection Vial (Fiolă de colectare 

cu lichid conservant) afectează calitatea probei pentru testarea 

citologică, pot apărea cazuri rare de alocare greşită a materialului de 

diagnosticare corespunzător în cadrul acestui proces. Este posibil ca 

personalul medical să fie nevoit să obţină o probă nouă, dacă rezultatele 

nu se corelează cu istoricul clinic al pacientului. În plus, citologia 

abordează probleme clinice diferite decât testarea pentru boli cu 

transmisie sexuală (BTS); prin urmare, este posibil ca extragerea 

părţii alicote să nu fie o practică potrivită pentru toate situaţiile clinice. 

Dacă este necesar, se poate colecta o probă separată pentru testarea 

BTS, în loc să se extragă o parte alicotă din SUREPATH Preservative 

Fluid Collection Vial (Fiolă de colectare cu lichid conservant). 

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Extragerea părţii alicote din probe cu compoziţie celulară redusă 

poate lăsa material insuficient în SUREPATH Preservative Fluid 

Collection Vial (Fiolă de colectare cu lichid conservant) pentru 

pregătirea unui test Pap SUREPATH satisfăcător. 

Partea alicotă trebuie extrasă înainte de procesarea SUREPATH Pap 

Test (Test Pap). O singură parte alicotă se poate extrage din 

SUREPATH Perservative Fluid Collection Vial (Fiolă de colectare cu 

lichid conservant) înainte de efectuarea testului Pap, indiferent de 

volumul părţii alicote. 

Procedură 

1. Pentru a asigura un amestec omogen, SUREPATH Preservative 

Fluid Collection Vial (Fiolă de colectare cu lichid conservant) 

trebuie centrifugată timp de 10-20 de secunde, iar partea alicotă de 

0,5 mL trebuie extrasă în maximum un minut de la centrifugare. 

2. Pentru extragerea părţii alicote trebuie utilizat un vârf de pipetă 

cu barieră de aerosoli din polipropilenă, dimensionat în mod 

corespunzător pentru volumul extras. Notă: Nu trebuie utilizate 

pipete serologice. Trebuie respectate bunele practici de laborator 

pentru a evita introducerea de contaminanţi în SUREPATH 

Preservative Fluid collection vial (Fiolă de colectare cu lichid 

conservant) sau în partea alicotă. Extragerea părţii alicote 

trebuie să se facă într-o locaţie adecvată, în afara zonei în care 

se execută amplificarea. 

3. Verificaţi vizual materialul părţii alicote din pipetă pentru a 

detecta particule mari sau semisolide. Prezenţa unor astfel de 

materiale în timpul extragerii materialului părţii alicote necesită 

returnarea întregului material în fiola cu probă şi descalificarea 

probei respective pentru testare auxiliară, înainte de efectuarea 

testului Pap. 

4. Pentru instrucţiuni legate de procesarea părţii alicote utilizând 

BD ProbeTec CT Q x şi GC Q x Amplified DNA Assays (Analize 

ADN amplificat), consultaţi prospectul testului furnizat de 

producător. 

MATERIALE NECESARE 

Materiale furnizate 

• SUREPATH Preservative Fluid Collection Vial (Fiolă de colectare 

cu lichid conservant) 

• PREPSTAIN Density Reagent (Reactiv de densitate) 

• PREPSTAIN Settling Chambers (Camere de decantare) 

• Lamele SUREPATH PreCoat 

• Tuburi centrifuge 

• PREPSTAIN Syringing Pipettes (Pipete cu seringă) 

• Vârfuri de aspirare 

Materiale necesare, dar nefurnizate 

• Centrifugă 

• Rackuri pentru lamele 

• Aspirator simplu (opţional) 

• Tavă de procesare (opţional) 

• Dispozitiv de prelevare tip perie sau perie/spatulă de plastic 

endocervicală cu cap(ete) detaşabil(e) 

• Mixer de centrifugare 

• Pipete de precizie cu vârfuri de unică folosinţă 

• Apă deionizată (pH între 7,5 şi 8,5) 

• Izopropanol şi alcool de clasă reactiv 

• Reactivi de colorare 

• Agent de curăţare, mediu de montare, lamele de acoperire 

DEPOZITARE 

• SUREPATH Preservative Fluid (Lichid conservant) fără 

eşantioane citologice poate fi depozitat la temperatura camerei 

(între 15° şi 30° C) timp de maximum 36 de luni de la data 

fabricaţiei. 

• Limita de depozitare pentru SUREPATH Preservative Fluid 

(Lichid conservant) cu eşantioane citologice este de 6 luni la 

temperaturi scăzute (între 2° şi 10° C) sau de 4 săptămâni la 

temperatura camerei (între 15° şi 30° C). 

• SUREPATH Preservative Fluid (Lichid conservant) conţinând 

eşantion citologic, destinat utilizării cu BD ProbeTec CT Q x 

şi GC Q x Amplified DNA Assays (Analize ADN amplificat) 

poate fi depozitat şi transportat timp de maximum 30 de zile la 

2° – 30° C, înainte de transferarea în Tuburile de diluare pentru 

proba citologică pe bază de lichid (PBL) pentru BD ProbeTec 

Q x Amplified DNA Assays (Analize ADN amplificat). 

PROCEDURI 

1. După ce eşantionul este colectat utilizând Rovers Cervex-Brush 

sau un echipament de prelevare echivalent, capul periei este 

clătit direct în lichid, scos de pe mâner şi lăsat într-o fiolă de 

SUREPATH Preservative Fluid (Lichid conservant). Apoi se 

pune etanş capacul fiolei, fiola este etichetată şi trimisă la 

laborator. 

2. Când fiolele de eşantion sunt primite în laborator, plasaţi fiecare 

fiolă în tava de procesare cu un tub centrifug etichetat, umplut 

în prealabil cu 4 mL de PREPSTAIN Density Reagent (Reactiv 

de densitate) şi cu o lamelă SUREPATH PreCoat etichetată. 

PREPSTAIN Density Reagent (Reactiv de densitate) trebuie 

adăugat în tub înainte de adăugarea eşantionului, altfel 

performanţa va fi redusă. 

3. Centrifugaţi puternic fiecare fiolă de eşantion, timp de 10 – 20 de 

secunde. (În SUREPATH Preservative Fluid Collection Vial 

(Fiolă de colectare cu lichid conservant) există suficient volum 

pentru a permite extragerea a maximum 0,5 mL de amestec 

omogen de celule şi lichid pentru testare auxiliară, rămânând un 

volum suficient şi pentru testarea Pap. Extragerea părţii alicote 

se poate face după această etapă de centrifugare din cadrul 

procesului SUREPATH LBC Test.) 

• Utilizaţi PREPMATE Automated Accessory (Accesoriu 

automat) şi PREPSTAIN Syringing Pipettes (Pipete cu 

seringă) pentru a transfera eşantionul. Consultaţi Manualul 

operatorului PREPMATE pentru instrucţiuni. Sau 

• Scoateţi capacul fiolei. Ţineţi o SUREPATH Preservative 

Vial (Fiolă de conservant) într-o mână, împingeţi uşor o 

PREPSTAIN Syringing Pipettes (Pipetă cu seringă) în fiolă, 

până se opreşte, orientând capătul PREPSTAIN Syringing 

Pipettes (Pipetă cu seringă) astfel încât să nu fie îndepărtat 

spre faţa dumneavoastră. Răsturnaţi ansamblul 

fiolă/PREPSTAIN Syringing Pipettes (Pipetă cu seringă) în 

tubul cu PREPSTAIN Density Reagent (Reactiv de densitate) 

numerotat corespunzător. Permiteţi scurgerea completă a 

soluţiei eşantionului din PREPSTAIN Syringing Pipettes 

(Pipetă cu seringă) înainte de a continua. Sau 

• Scoateţi capacul fiolei. Turnaţi încet aproximativ 8 mL de 

probă pe PREPSTAIN Density Reagent (Reactiv de 

densitate). 

4. Plasaţi tuburile în rackurile centrifuge, conform diagramei 

secvenţei de plasare din Manualul procedurii (fiecare rack 

pentru tuburi are o capacitate de 12 tuburi). Secvenţa de plasare 

este critică şi trebuie să fie echilibrată. 

5. Echilibraţi tuburile centrifuge prin adăugarea de Lichid 

conservant dacă este necesar şi centrifugaţi probele timp de 

2 minute la 200 x g. 

6. Dacă se utilizează Aspiratorul simplu, porniţi sistemul 

Aspiratorului simplu şi reglaţi presiunea la 9 ± 2 in Hg. Puneţi 

vârfuri curate pe sistemul de aspirare al Aspiratorului simplu. 

7. Scoateţi rackurile pentru tuburile centrifuge din centrifugă. 

Coborâţi încet vârfurile Aspiratorului simplu (sau pipetele de 

transfer de unică folosinţă) în tuburile centrifuge pentru a aspira 

supernatantul. Diapozitivul de aspirare trebuie să atingă partea 

de sus a tuburilor în momentul finalizării. Clătiţi cu apă 

vârfurile aspiratorului între eşantioane. 

8. Centrifugaţi tuburile timp de 10 minute la 800 x g pentru a 

concentra componenta de diagnosticare într-o tabletă de celule 

la fundul tubului. 

9. Scoateţi rackul pentru tuburi din centrifugă. Decantaţi uşor şi 

rapid în chiuvetă. Menţinând rackul răsturnat, tamponaţi cu 

grijă tuburile pe hârtie absorbantă, asigurându-vă că tableta de 

celule rămâne în tub. 

10. Etichetaţi câte o lamelă SUREPATH PreCoat cu fiecare număr de 

probă, având grijă să nu atingeţi suprafaţa lamelei SUREPATH 

PreCoat. Puneţi lamelele în rackul pentru lamele şi fixaţi câte o 

PREPSTAIN Settling Chamber (Cameră de decantare) pe fiecare 

lamelă. Poziţia fiecărei lamele SUREPATH PreCoat numerotate 

pe tavă trebuie să se potrivească cu poziţia tubului centrifug 

corespunzător. 

11. Adăugaţi 4 mL de apă deionizată (pH 7,5 – 8,0) în fiecare tub 

cu probă şi amestecaţi bine prin centrifugare. 

12. Lucrând cu câte un tub cu probă pe rând, centrifugaţi tubul şi 

transferaţi imediat 800 µl de suspensie de celule în PREPSTAIN 

Settling Chamber (Cameră de decantare)/lamelă SUREPATH 

PreCoat numerotată corespunzător. Repetaţi pentru fiecare 

eşantion. 

13. Lăsaţi 10 minute să aibă loc sedimentarea completă. După 

sedimentare, răsturnaţi uşor tava (tăvile) cu lamele peste chiuvetă 

pentru a decanta lichidul rămas şi transferaţi lichidul în exces pe 

hârtie absorbantă. 


14. Clătiţi fiecare PREPSTAIN Settling Chamber (Cameră de 

decantare) cu 500 µl de etanol denaturat şi decantaţi. Repetaţi 

clătirea cu alcool şi decantaţi lichidul rămas şi transferaţi 

lichidul în exces pe hârtie absorbantă, lăsându-le să stea 

răsturnate cel puţin 

1 minut. 

15. Îndepărtaţi PREPSTAIN Settling Chamber (Cameră de decantare). 

16. Coloraţi şi acoperiţi cu lamele de sticlă lamelele SUREPATH. 

REZULTATE ŞI INTERPRETARE 

• Toate criteriile de diagnosticare utilizate în prezent în 

laboratoarele citologice pentru frotiurile Pap convenţionale sunt 

valabile şi pentru preparatele pe bază de lichid TRIPATH 

Imaging, Inc. 

• Toate observaţiile de screening anormal sau îndoielnic trebuie 

adresate unui patolog pentru examinare şi diagnosticare. Orice 

modificare morfologică celulară este importantă şi trebuie notată. 

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Science 1942; 95: 438-439. 



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of Laboratory Sink Drains to Remove Azide Salts, Center for 

Disease Control, Atlanta, Georgia, April 30, 1976. 


USA 

Telephone: 1-877-822-7771 

Fax: 1-336-290-8333 

Europe 

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