RESEARCH ARTICLE
Doi: 10.5578/tt.58625
Tuberk Toraks 2017;65(3):220-226
Pneumocystis jirovecii pn?monisi tanısında mikroskopi ve ger?ek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu y?ntemlerinin karşılaştırılması: Klinik bulgular ile yorumlanması
Seray T?Z1, Cumhur G?ND?Z2, Aslı TETİK2, Meltem TAŞBAKAN3, H?sn? PULLUK?U3, Feza BACAKOĞLU4, Mehmet Sezai TAŞBAKAN4, Figen G?LEN5, Ayşeg?l ?NVER1, Nevin TURGAY1
1 Ege ?niversitesi Tıp Fak?ltesi, Parazitoloji Anabilim Dalı, İzmir, T?rkiye
1 Department of Parasitology, Faculty of Medicine, Ege University, Izmir, Turkey
2 Ege ?niversitesi Tıp Fak?ltesi, Tibbi Biyoloji Anabilim Dalı, İzmir, T?rkiye
2 Department of Medical Biology, Faculty of Medicine, Ege University, Izmir, Turkey
3 Ege ?niversitesi Tıp Fak?ltesi, İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı, İzmir, T?rkiye
3 Department of Infectious Diseases and Clinical Microbiology, Faculty of Medicine, Ege University, Izmir, Turkey
4 Ege ?niversitesi Tıp Fak?ltesi, G?ğ?s Hastalıkları Anabilim Dalı, İzmir, T?rkiye
4 Department of Chest Diseases, Faculty of Medicine, Ege University, Izmir, Turkey
5 Ege ?niversitesi Tıp Fak?ltesi, ?ocuk Sağlığı ve Hastalıkları Anabilim Dalı, İzmir, T?rkiye
5 Department of Children Health and Diseases, Faculty of Medicine, Ege University, Izmir, Turkey
?ZET
Pneumocystis jirovecii pn?monisi tanısında mikroskopi ve ger?ek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu y?ntemlerinin karşılaştırılması: Klinik bulgular ile yorumlanması
Giriş: Pneumocystis jirovecii pn?monisi (PCP) ?zellikle imm?ns?presif hastalarda ciddi infeksiyonlara neden olmaktadır. Bu ?alışmada iki farklı y?ntemle PCP araştırılmış olan ?rneklerin sonu?larının klinik veriler ile değerlendirilmesi ama?lanmıştır.
Materyal ve Metod: Ege ?niversitesi Tıp Fak?ltesi Parazitoloji Direkt Tanı Laboratuvarına g?nderilen bronkoalveoler lavaj (BAL)?rnekleri mikroskopi ve ger?ek zamanlı polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) y?ntemleri ile ?alışılmıştır. Retrospektif olarak hastaların demografik ?zellikleri, klinik ve laboratuvar verileri kaydedilmiştir. Veriler SPSS 16.0 programı ile değerlendirilmiştir.
Bulgular: Toplam 42 hastanın (24 erkek, ortalama yaş: 31.49 ?? 26.14) BAL ?rnekleri ?alışılmıştır. Pozitif tespit edilen toplam 16 ?rneğin t?m?ne ger?ek zamanlı PCR, ???ne ise mikroskopi ile P. jirovecii tanısı konmuştur. Hastaların altta yatan hastalıkları irdelendiğinde en sık malignite olduğu saptanmıştır. P. jirovecii pozitif bulunan hastalardan 11 tanesi PCP olarak değerlendirilerek trimetoprim-s?lfametoksazol (TMP-SMZ) tedavisi başlanmış, altı hasta kaybedilmiştir.???
Sonu?: G?n?m?zde gelişen tetkik ve tedavi olanaklarına rağmen PCP y?ksek mortalite ile seyreden bir hastalıktır. Klinik verilerin dikkatle değerlendirilmesi ve hastaların imm?n durumlarının g?z ?n?nde bulundurulması ?nemlidir. PCP'nin erken tanısında multidisipliner yaklaşıma ihtiya? bulunmaktadır.
Anahtar kelimeler: Pneumocystis jirovecii, pn?moni, ger?ek zamanlı PCR
SUMMARY
The comparison of microscopy and real time polymerase chain reaction methods for the diagnosis of Pneumocystis Jirovecii pneumonia: evaluation of clinical parameters
Introduction: Pneumocystis jirovecii pneumonia (PCP) causes serious infections, especially in patients with immunosuppressive diseases. In this study, it was aimed to evaluate the results of samples obtained from PCP suspected patients using two different methods together with clinical data.
Materials and Methods: Microscopy and real time polymerase chain reaction (real time PCR) methods were performed with bronchoalveolar lavage (BAL) samples sended to Ege University Medical Faculty Direct Parasitology Diagnostic Laboratory between March 2009 and June 2010. Demographic characteristics, clinical and laboratory data were also recorded retrospectively. The data were evaluated using the SPSS 16.0 program.
Results: A total of 42 BAL samples collected from patients (24 males, mean age: 31.49 ? 26.14) were included. There were totally 16 P. jirovecii positives either one of the tests. Sixteen and three samples were detected positive by real time PCR and microscopy, respectively. Trimethoprim-sulfamethoxazole was prescribed in 11 PCP diagnosed cases and 6 of them died.
Conclusion: Today, despite the growing opportunities in diagnosis and treatment, PCP pneumonia is associated with high mortality. Careful examination of clinical data and immune status of the patients are important. Multidisciplinary approach is required for early PCP diagnosis.
Key words: Pneumocystis jirovecii, pneumonia, real time PCR
Geliş Tarihi/Received: 10.08.2017 - Kabul Ediliş Tarihi/Accepted: 30.08.2017
GİRİŞ
Pneumocystis jirovecii tek h?creli, ?karyotik bir mikroorganizmadır. İlk tanımlandığında protozoon olarak kabul edilmiş sonra yapılan ultrasr?kt?rel ?alışmalar sonucu mantarlara benzer olduğu kanıtlanmıştır. P. jirovecii başlıca hava yolu ile bulaşır. Nadiren farklı klinik tablolara neden olmakla birlikte en sık pn?moni tablosu ile karşımıza ?ıkmaktadır. P. jirovecii pn?monisi (PCP)'nin, imm?ns?presif hastalarda ciddi solunum yetmezliğine neden olduğu bilinmektedir. ?zellikle kazanılmış imm?nyetmezlik sendromu (AIDS), malignite, organ transplantasyonu, steroid veya imm?ns?presif tedavi alanlar başlıca risk gruplarını oluşturmaktadırlar (1,2) .
Hastalığın kliniğinde dispne, takipne, nonprod?ktif ?ks?r?k, ateş ve siyanoz g?r?lebilir (2). Fizik muayenede spesifik bir bulgu yoktur ve radyolojik olarak interstisyel pn?moni g?r?n?m? hakimdir.? Erken d?nemde PCP'nin klinik olarak d?ş?n?lmesi, uygun ?rnekleme ve uygun y?ntemler ile etkenin araştırılması hayat kurtarıcı olmaktadır. Etken k?lt?rde ?retilemediğinden kesin tanı, alınan ?rneklerde organizmanın mikroskobik olarak g?sterilmesi, floresan monoklon antikorları ile antijenin veya molek?ler y?ntemlerle spesifik DNA'nın saptanmasıyla konulabilmektedir (3,4). Polimeraz zincir reaksiyonu (PCR)'nda ?oğaltılmak ?zere b?y?k y?zey glikoprotein geni (major surface glycoprotein; MSG), mitokondriyal b?y?k alt birim (mitochondrial large subunit; mtLSU) rRNA geni, dihydropteroate synthase (DHPS) geni, ısı şok protein (heat shock protein; HSP) 70 geni, beta-tubulin geni ve cyclin-dependent kinase (cdc2) geni gibi farklı gen b?lgeleri hedeflenebilmektedir (5,6). Bunlardan mtLSU ve MSG gibi ?ok kopyalı genler P. jirovecii'nin saptanmasında en y?ksek hassasiyeti g?stermektedirler. PCR? kolonizasyon olduğu halde hastalık oluşmayan olguları da saptaması nedeniyle d?ş?k pozitif prediktif değer ve y?ksek negatif prediktif değer g?stererek ?zellikle PCP tanısının dışlanmasında ?nem taşımaktadır (6).
Bu ?alışmada, Ege ?niversitesi Tıp Fak?ltesi Hastanesi Parazitoloji Direkt Tanı Laboratuvarına PCP ?n tanısıyla g?nderilen bronkoalveoler lavaj (BAL) ?rneklerinde, Gram Weigert ve Giemsa boyama y?ntemleri uygulanarak mikroskobik bakı ve ger?ek zamanlı PCR ile P. jirovecii araştırılmış ve sonu?ların hastaların klinik verileri eşliğinde değerlendirilmesi ama?lanmıştır.
MaTERYAL ve Metod
?alışılan ?rnekler
Ege ?niversitesi Tıp Fak?ltesi Hastanesi Parazitoloji Direkt Tanı Laboratuvarına g?nderilen toplam 42 hastaya ait BAL ?rnekleri, Gram Weigert ve Giemsa boyama y?ntemleri uygulanarak mikroskobik bakı ve ger?ek zamanlı PCR y?ntemleri ile ?alışılmıştır. Ger?ek zamanlı PCR y?ntemi, P. jirovecii mtLSU rRNA geninin kısmi dizisine g?re yeni tasarlanan spesifik primer ve problar ile uygulanmıştır.
Retrospektif olarak hastaların demografik (yaş, cinsiyet), klinik (ateş, solunum sıkıntısı, hemoptizi, eşlik eden hastalık, tanı, tedavi) ve laboratuvar verileri (hemogram, CRP, akciğer g?r?nt?lemesi, HIV) kaydedilmiştir. Veriler SPSS 16.0 programı ile değerlendirilmiştir.
?rneklerin Boyama ve Ger?ek Zamanlı PCR i?in ?n Hazırlığı
Mukus i?eren BAL ?rnekleri, iki kat %0.1 dithioreitol eklendikten sonra 1500 g devirde 5 dakika santrif?j edilerek, ?st kısımları atılmıştır. Eritrosit i?eren ?rnekler ise, aynı miktarda %0.1 saponin eklendikten sonra 1500 g devirde 5 dakika santrif?j edilmiş ve ?st kısımları uzaklaştırılmıştır. Elde edilen pelletler PBS tamponu ile sulandırıldıktan sonra, 200 μl ?rnek DNA izolasyonu i?in -20?C'ye konmuş ve kalan ?rnek 1500 g devirde 5 dakika sitosantrif?j edilerek (Hettich, Universal 320 ) havada kurutulduktan sonra Giemsa ve Gram Weigert boyama işlemleri uygulanmıştır.
Boyama İşlemleri
Giemsa boyama işlemi i?in, metanol ile fikse edilen ?rnekler havada kurutulup, %10 Giemsa sol?syonu ile kaplanmış ve oda ısısında 30 dakika ink?be edilmiştir. Preparatlar ?eşme suyunda yıkanıp daha sonra kurutulmuştur.
Gram Weigert boyama işlemi i?in, ?rnekler oda ısısında %1 Eosin-Y sol?syonunda 5 dakika boyanarak distile su ile 2 dakika ?alkalanmış, sonra 5 dakika kristal viyole sol?syonu (%5 kristal viyole; %10 etanol; %2 anilin yağı) ile boyanıp, Gram iodin sol?syonuna (3.61 mM potasyum iyot; 1.18 mM iodin) daldırılıp ?ıkartılarak 5 dakika beklenmiş ve distile su ile ?alkalanıp kağıt havlu ile ?rneğin ?evresi temizlenerek kurutulmuş, son olarak anilin yağı/ksilen sol?syonunda (%50 anilin yağı; %50 ksilen) yıkanıp, ksilen ile boyama durdurulmuştur. Preparatlar x1000 b?y?tmede ışık mikroskobunda deneyimli uzman tarafından incelenmiştir (5,7,8)?
DNA İzolasyonu
Olgulardan alınan BAL ?rneklerinden hazırlanan ve -20 ?C'de saklanan 200 μl pelletlerden High Pure PCR Template Preparation Kit (Roche) kullanılarak DNA izolasyonu protokole uygun olarak ger?ekleştirilmiştir.
Ger?ek Zamanlı PCR
Elde edilen DNA ?rneklerinden P. jirovecii varlığının saptanabilmesi i?in total hacim 10 ?l olacak şekilde 20-50 ng genomik DNA, 400 nM forward ve reverse primerler (Forward: 5'-GTAGGTATAGCACTGAATATCTCG-3', Reverse: 5'-TTTAGATATCCAACAACTTTTATTTCAC-3'), 200 nM problar (Probe1: ATAATCAGACTATGTGCGATAAGGTAGA-FL, Probe 2: LC640-CGAAAGGGAAACAGCCCAGAAC --PH), 2 mM MgCl2, 1 ?l LightCycler FastStart DNA Master Hybridisation probe (Roche Applied Science) ve 1.7 ?l PCR suyu (Roche Applied Science) ile ?rnekler hazırlanarak ger?ek zamanlı PCR'yi, LightCycler 2.0 (Roche Applied Science; Mannheim, Germany) cihazında ger?ekleştirilmiştir. Olgulara ait sonu?lar, analiz sonucunda elde edilen erime eğrisi pik derecelerine g?re pozitif ve negatif olarak belirlenmiştir. Erime eğrisi analizi Kanal 2' den ger?ekleştirilmiştir. Erime eğrisinde pozitif ?rnekler 56?C ile 63?C de pik vermektedir (Resim 1).
BULGULAR
Toplam 42 hastanın (24 erkek, yaş ortalaması 31.29 ? 26.43 (min: 1-max: 85) BAL ?rneği ?alışılmıştır. On altı ?rnekte herhangi bir test y?ntemi ile pozitiflik saptanmıştır. ?? ?rnek, ger?ek zamanlı PCR ve mikroskobi ile pozitif saptanmış iken 13 ?rnek sadece ger?ek zamanlı PCR ile pozitif bulunmuştur. Mikroskopik bakı altın standart olarak alınarak PCR y?nteminin hassasiyet ve ?zg?nl?k değerleri hesaplanmıştır (Tablo 1).
Hastaların klinik, laboratuvar bulguları, ek hastalıklar ve test sonu?ları Tablo 2'de g?sterilmiştir. Hastaların altta yatan risk fakt?rleri incelendiğinde en sık malignite ve romatolojik hastalığa bağlı imm?ns?presan ila? kullanımı saptanmıştır.
P. jirovecii tanısı alan hastaların 13'?nde solunum sıkıntısı, 12'sinde ateş g?r?lm?şt?r. L?kositoz beş hastada, l?kopeni ise bir hastada saptanmıştır. Hastaların akciğer grafilerinde en sık g?r?len radyolojik bulgunun pn?monik infiltrasyon olduğu tespit edilmiştir. Y?ksek rezolusyonlu akciğer tomografisi (HRCT) ?ekilen hastaların 11 tanesinde pulmoner infiltrasyon, beşinde buzlu cam g?r?n?m? ve bir hastada ise nod?ler patern g?r?lm?şt?r. ?rneklerinde P. jirovecii pozitifliği saptanan hastalardan, PCP olarak değerlendirilen 11'ine trimetoprim-s?lfametoksazol (TMP-SMZ)? tedavisi başlanmış, altı hasta kaybedilmiştir.
?n tanıda PCP d?ş?n?len ancak sonrasında PCP ile uyumlu klinik bulgusu olmayan, fakat sadece ger?ek zamanlı PCR ile P. jirovecii pozitifliği saptanan ve yabancı cisim aspirasyonu, fungal pn?moni, bronşiektazi, influenza pn?monisi ve pn?moni tanılarıyla takip edilen beş olguya tedavi uygulanmamıştır.
TARTIŞMA
G?n?m?zde gelişen tetkik ve tedavi olanaklarına rağmen PCP y?ksek mortalite ile seyreden bir hastalıktır. Klinik verilerin dikkatle değerlendirilmesi, hastaların imm?n durumlarının g?z ?n?nde bulundurulması ?nemlidir. Bunun yanı sıra erken tanı konulabilmesi i?in multidisipliner yaklaşım ve laboratuvar ile iletişim kolaylık sağlayabilmektedir. Laboratuvara g?nderilen ?rneğin miktarı, yoğunluğu ve etkenin akciğer dokusunda homojen dağılmaması laboratuvar testlerinin başarısını etkilemektedir (9). Kesin tanıda parazitin direkt g?r?lmesi yanında spesifik antijen ve DNA'nın saptanması da ?nemlidir. ?alışmamızda, ger?ek zamanlı PCR ile spesifik DNA ?oğaltılmasının, tanının sensitivitesini artırdığı g?sterilmiştir. Bununla birlikte, toplumda y?ksek P. jirovecii taşıyıcılık oranı g?z ?n?nde bulundurulmalıdır ve P. jirovecii pozitif saptanan hastalarda tedaviye karar verilirken klinik bulgular dikkatle değerlendirilmelidir. PCP kuşkusu olan hastalarda, ger?ek zamanlı PCR yanında en az bir tanısal y?ntemin uygulanmasının ve tedavi i?in hastalık semptomlarının değerlendirilmesinin kolonizasyon ve hastalık ayrımında yararlı olduğu kanısındayız. ?alışmamızda mikroskopi pozitif olan ?? ?rnek ger?ek zamanlı PCR ile de pozitif bulunmuş ve bu hastalar tedavi g?rm?şlerdir. Sadece ger?ek zamanlı PCR'nin pozitif bulunduğu sekiz ?rnekte ise tedavi kararı hastaların klinik bulguları, g?r?nt?leme y?ntemlerinin bulguları ve ayırıcı tanıda d?ş?n?len diğer hastalıkların test sonu?larına g?re verilmiştir. Ger?ek zamanlı PCR yanında uygulanan diğer bir y?ntem sensitivitesi daha d?ş?k bile olsa, klinisyenin PCP tanısını erken koymasına ve tedaviye başlamasına, sadece klinik bulgulara g?re profilaktik tedaviye başlandıysa devamına karar vermesine destek sağlamaktadır.?
P. jirovecii morfolojisini tanımlamak i?in Giemsa, Gram Weigert, Papanicolau, Gomori-Grocott, Toluidine blue O gibi pek ?ok farklı boya kullanılabilir. Bu boyaların bir kısmı trofozoit formları boyarken bir kısmı sadece kist duvarını boyar (3,4). ?alışmamızda biri kist duvarını boyayan Gram Weigert, diğeri ise intrakistik cisimleri ve trofozoitleri boyayan Giemsa boyaları uygulanmıştır.
Direkt floresan antikor (DFA) y?ntemi y?ksek duyarlılık ve ?zg?ll?k nedeniyle tanıda tercih edilen bir antijen saptama y?ntemidir. Kolay uygulanabilen bir y?ntem olması ve sonucun kısa s?rede alınabilmesi gibi ?nemli avantajları olmakla beraber floresan mikroskopu gerektirmesi de dezavantajıdır. ?lkemizde dokuz yıllık s?rede parazitoloji laboratuvarına g?nderilen ?rneklerin DFA y?ntemi ile değerlendirildiği bir ?alışmada %54'l?k pozitiflik saptanmıştır. Bu ?alışmada pozitiflik oranının y?ksek olmasının; kullanılan y?ntemin duyarlılık ve ?zg?ll?ğ?n?n y?ksek olması, alınan ?rneklerin uygun ve risk grubundaki hastalardan istenmiş olması ile testi ?alışan ve değerlendiren personelin deneyimli olmasına bağlı olduğu bildirilmiştir (10).
Molek?ler y?ntemler de y?ksek duyarlılığa sahip olmakla birlikte kolonizasyon-infeksiyon ayrımında sorunlara neden olmaktadır (6). Klinik bulgular ise altta yatan hastalığa g?re değişebilmektedir. PCP, akciğer nakli hastalarında asemptomatik seyredebildiği gibi, AIDS hastalarında uzun s?re nonspesifik bulgularla karşımıza ?ıkabilmektedir (11). Klinik belirtisi olan PCP hastalarında en sık g?r?len bulgular dispne, taşipne, ?ks?r?k, hemoptizi, ateş ve siyanozdur (2). ?alışmamızda, P. jirovecii pozitif saptanan 16 hastanın 13'?nde solunum sıkıntısı mevcuttu. Hastaların laboratuvar incelemelerinde beş hastada l?kositoz, bir hastada l?kopeni, 12 hastada ise C-reaktif protein (CRP) y?ksekliği saptanmıştır. Ancak bu testlerin tanıyı desteklemede rolleri kısıtlıdır. Radyolojik incelemelerden akciğer grafisi ?nemli bir tanı aracıdır. Hastaların bir b?l?m? normal akciğer grafisi ile başvursa da, klasik olarak bilateral dif?z, simetrik retik?ler (interstisyel) veya gran?ler opasiteler g?r?lebilir. Başlangı?ta bilateral ve simetrik olan opasiteler, dif?z tutuluma doğru ilerleyebilir. Akciğer grafisi normal olanlarda prognoz daha iyi seyretmekle birlikte hastalarda tedaviye başladıktan sonra akciğer grafisinde iyileşme olmayabilir veya k?t?leşme g?zlenebilir. Ağır PCP olgularında; klinik ve radyolojik d?zelmenin uzun s?receği unutulmamalıdır (12). Daha ileri radyolojik incelemelerden HRCT'de buzlu cam opasitelerin varlığı ve kistik lezyonlar g?r?lebilir. ?zellikle akciğer grafisi normal olan hastalarda HRCT yararlıdır. ?alışmamızdaki, pozitif ve negatif grup karşılaştırıldığında, HRCT sonu?larının PCP hastalarında klinik değerlendirmeye katkı sağladığı g?zlenmiş olup, hastalarımızda en sık g?r?len HRCT bulgusu pulmoner infiltrasyon olarak tespit edilmiştir.
Tedavide TMP-SMZ ilk ?nerilen ila?tır. Pentamidin isotiyonat, klindamisin, primakin de alternatif olarak kullanılabilecek ila?lardır. TMP-SMZ'nin (15-20 mg/kg/g?n/75-100 mg/kg/g?n) 14 g?n, insan imm?nyetmezlik vir?s? (HIV) ile infekte hastalarda ise 21 g?n s?re ile uygulanması ?nerilmektedir (6). ?alışmamızda 11 hasta TMP-SMZ ile tedavi edilmiştir. Beş hastada ger?ek zamanlı PCR ile P. jirovecii saptanmasına rağmen kolonizasyon olarak d?ş?n?lerek tedavi verilmemiştir. P. jirovecii kolonizasyonunun epidemiyolojik ve klinik anlamı tam anlaşılamamakla birlikte ?zellikle akciğer hastalığı olanlarda %2.6-55 arasında kolonizasyon saptandığı bildirilmiştir. İzmir'de pn?moni bulgusu olmayan 30 hastanın 21 (%70)'inde PCR, altı hastada DFA ve bir hastada mikroskopi ile P. jirovecii pozitifliği bulunmuştur. Bu hastaların 4'?nde hem PCR hem de DFA ile pozitiflik g?r?lm?ş ve PCR'nin kolonizasyonu g?stermede iyi bir y?ntem olduğu belirtilmiştir (13).
Uyguladığımız P. jirovecii ger?ek zamanlı PCR ile erime eğrisi analizinde t?m ?rnekler 63?C de pik verirken bir ?rnekte 63?C'nin yanı sıra 56?C'de ikinci bir pik g?zlenmiştir. Bu sonu? bu hastanın genetik olarak farklı iki suş ile olasılıkla farklı zamanlarda iki kez P. jirovecii ile karşılaştığını g?stermektedir. Genotiplerin farklılığının saptanması ve karşılaştırılması ?zellikle salgınlarda ?nem kazanmaktadır (9). ?alışmamızda ?rneklere sekans analizi uygulanmamıştır. Daha fazla sayıda ?rnek ile ?alışılarak farklı genotip olduğu d?ş?n?len ?rneklerde sekans analizinin yapılması ileride oluşabilecek salgınlar i?in temel bilgi oluşturabilecektir.
D?şkaya ve arkadaşlarının ?alışmasına dahil edilen aynı laboratuvarda mikroskobik bakısı yapılan 42 ?rneğin 9 tanesinin, bu ?alışmadaki 9 ?rnekle aynı ?rnekler olduğu saptanmıştır (5). Ancak bizim ?alışmamızda se?ilen ve ekibimiz tarafından primer ve probları yeni d?zenlenen ger?ek zamanlı PCR y?nteminin, hedef gen b?lgesi P. jirovecii mtLSU rRNA geninin bir b?l?m? iken, daha ?nce yayınlanan ?alışmadaki ger?ek zamanlı PCR y?nteminin hedef gen b?lgesi cdc2 gen b?lgesidir. Ortak olarak ?alışılan 9 ?rnek retrospektif olarak incelendiğinde, cdc2 PCR ile dokuz ?rnekten d?rd?n?n, ?alışmamızda uygulanan mtLSU PCR ile ise altı ?rneğin pozitif sonu?landığı, mikroskobik bakı ile ise dokuz ?rnekten sadece birisinin pozitif saptandığı ve bu ?rneğin PCR ile sadece bizim ?alışmamızda pozitif bulunduğu g?zlenmiştir. Bu sonu?lara g?re, ?lkemizde PCP tanısında PCR y?ntemi i?in farklı gen b?lgeleri hedef se?ilerek validasyon ?alışmalarının yapılmasının yararlı olacağı d?ş?n?lmektedir.??
?alışmamızda, ?zellikle imm?ns?presif hasta gruplarında y?ksek mortaliteye neden olabilen bu infeksiyonun erken tanısı ve tedavisi i?in multidisipliner yaklaşım ve laboratuvar ile iletişimin kolaylık sağlayacağı, molek?ler ?alışmaların devamının, tanıda hassasiyetin artırılmasında ve etkenin genotiplendirilmesinde yarar sağlayacağı sonucuna varılmıştır.
KAYNAKLAR
- Sokulska M, Kicia M, Wesołowska M, Hendrich AB. Pneumocystis jirovecii--from a commensal to pathogen: clinical and diagnostic review. Parasitol Res 2015;114:3577-85.
- Carmona EM, Limper AH. Update on the diagnosis and treatment of Pneumocystis pneumonia. Ther Adv Respir Dis 2011;5:41-59.
- Elb?ken G. Pneumocystis jirovecii enfeksiyonu ve akciğer tutulumu. Uludağ ?niv Tıp Fak Derg 2007;33:97-103.
- Garcia LS. Tissue protozoa. In: Diagnostic Medical Parasitology. 4th ed. Washington: ASM Press, 2001:132-58.
- D?skaya M, Caner A, Degirmenci A, Wengenack NL, Yolasigmaz A, Turgay N, et al. Degree and frequency of inhibition in a routine real-time PCR detecting Pneumocystis jirovecii for the diagnosis of Pneumocystis pneumonia in Turkey. J Med Microbiol 2011;60:937-44.
- Cooley L, Dendle C, Wolf J, Teh BW, Chen SC, Boutlis C, et al. Consensus guidelines for diagnosis, prophylexis and management of Pneumocystis jirovecii pneumonia in patients with haematological and solid malignancies, 2014. Intern Med J 2014;44:1350-63.
- Gill VJ, Nelson NA, Stock F, Evans G. Optimal use of the cytocentrifuge for recovery and diagnosis of Pneumocystis carinii in bronchoalveolar lavage and sputum specimens. J Clin Microbiol 1988:26;1641-4.
- Markell EK, John DT, Krotoski WA (eds). Examination of blood, other body fluids and tissues, sputum and urine. In: Markell and Voge's Medical Parasitology. 8th ed. WB Saunders Company, 1999:456-71.
- Alanio A, Bretagne S. Pneumocystis jirovecii detection in asymptomatic patients: what does its natural history tell us? F1000Res 2017;23:739.
- Yanık K, Karadağ A, Usta E,? ?nal N, Yılmaz H, H?kelek M. Pneumocystis jirovecii pn?monisi ş?phesi ile 2003-2011 yılları arasında Ondokuz Mayıs ?niversitesi Tıp Fak?ltesi Parazitoloji Laboratuvarına g?nderilen solunum yolu ?rneklerinde direkt floresans antikor test sonu?larının değerlendirilmesi. T?rk Mikrobiyol Cem Derg 2012;42:132-6.
- Girginkardeşler N, Ok Z?, Korkmaz M. Pneumocystis pn?monisi. ?zcel'in tibbi parazit hastalıkları. ?zcel MA (ed). İzmir: Meta Basım Matbaacılık, 2007:452-47.
- Mermut G, Avcı M, Zincir M. Pneumocystis pn?monisi. Bam?ag B?lteni 2010;1:7-10.
- ?zko? S, Bayram Delibaş S, Erbaycu AE, Erg?den C, Akıs? ?. Akciğer hastalığı olan hastalarda Pneumocystis jirovecii kolonizasyonunun araştırılması. Turkiye Parazitol Derg 2014;38:214-9.
Yazışma Adresi (Address for Correspondence)
Dr. Meltem TAŞBAKAN
Ege ?niversitesi Tıp Fak?ltesi,
İnfeksiyon Hastalıkları ve Klinik Mikrobiyoloji Anabilim Dalı,
İzmir - T?rkiye
e-mail: tasbakan@yahoo.com